Name: insulin injection and hemolymph extraction to measure insulin sensitivity in adult drosophila melanogaster
Uploaded: 2011-06-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem NIA zu YW.CF (AG21068, AG31086) unterstützt.

1. Insulin Herstellung der Lösung <ol><li> Bereiten Sie frische Rinder-Insulin durch Auflösen von Insulin in PBS, um die Konzentration von 0,01 mg / ml zu erreichen. Sowohl Insulin / PBS und Kontrolle PBS-Lösungen müssen auf dem Eis während der Injektion gehalten werden. Diese Lösungen sollten mit 0,5% (v / v) FD &amp; C Blau nicht vorbereitet werden. 1 Nahrung Färbung. </li></ol> 2. Needle Vorbereitung und Injection Set-up <ol><li> Bereiten Kapillare Glasnadeln mit einer Mikropipette ...

<ol>
	<li>Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+insulin-producing+neurons+in+flies:+growth+and+diabetic+phenotypes.">Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes.</a> Science. 296, 1118-1118 (2002).</li><li>Kim, S. K., Rulifson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+mechanisms+of+glucose+sensing+and+regulation+by+Drosophila+corpora+cardiaca+cells.">Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora cardiaca cells.</a> Nature. 431, 316-316 (2004).</li><li>Broughton, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longer+lifespan,+altered+metabolism,+and+stress+resistance+in+Drosophila+from+ablation+of+cells+making+insulin-like+ligands.">Longer lifespan, altered metabolism, and stress resistance in Drosophila from ablation of cells making insulin-like ligands.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 3105-3105 (2005).</li><li>Haselton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+ablation+of+adult+Drosophila+insulin-producing+neurons+modulates+glucose+homeostasis+and+extends+life+span+without+insulin+resistance.">Partial ablation of adult Drosophila insulin-producing neurons modulates glucose homeostasis and extends life span without insulin resistance.</a> Cell Cycle. 9, 3063-3063 (2010).</li><li>Haselton, A. T., Fridell, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+the+study+of+glucose+homeostasis.">Adult Drosophila melanogaster as a model for the study of glucose homeostasis.</a> Aging (Albany NY). 2, 523-523 (2010).</li><li>Belgacem, Y. H., Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+insulin+pathways+alters+trehalose+level+and+abolishes+sexual+dimorphism+in+locomotor+activity+in+Drosophila.">Disruption of insulin pathways alters trehalose level and abolishes sexual dimorphism in locomotor activity in Drosophila.</a> J Neurobiol. 66, 19-19 (2006).</li><li>Demerec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Drosophila. , (1950).</li></ol>

Die Technik in diesem Bericht beschrieben wird, potentiell nützlich in jeder Studie, die physiologischen Prozesse sich in nachweisbaren Veränderungen in Drosophila Hämolymphe Zusammensetzung untersucht. Durch die Kombination von Injektions-und Hämolymphe Sammlung auf diese Weise ist es möglich, die unmittelbare physiologisch relevanten Auswirkungen einer bestimmten experimentellen Behandlung oder Manipulation zu ermitteln. Der primäre Vorteil dieser &quot;Aderlass&quot;-Technik in Hämolymphe Sammlung im ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes / Ausrüstung </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th></tr><tr><td> Rinderinsulin </td><td> Sigma </td><td> I5500 </td></tr><tr><td> Infinity Glukose-Reagenz </td><td> Thermo Electron Corporation </td><td> TR1541 </td></tr><tr><td> Manuelle Mikroinjektor </td><td> Sutter Instrument </td><td></td></tr><tr><td> P-87 Flamming / Brown Mikropipette puller </td><td> Sutter Instrument </td><td></td></tr><tr><td> Single Barrel Borosilikat Kapillare aus Glas </td><td> AM-Systeme </td><td> 626000 </td></tr><tr><td> FD &amp; C Blau Nr. 1 </td><td> McCormick &amp; Company </td><td></td></tr><tr><td> 1 ul Mikrokapillare Rohre </td><td> Drummond </td><td></td></tr><tr><td> Drei-Achs-Handbuch Mikromanipulator und Base </td><td> World Precision Instruments </td><td></td></tr></tbody></table>

insulin injection and hemolymph extraction to measure insulin sensitivity in adult drosophila melanogaster

Konservierte Nährstoff sensing Mechanismen existieren zwischen Säugetier und Fruchtfliege, wo Peptide ähnlich Säugetieren Insulin und Glukagon bzw. Funktion, um Glukose-Homöostase während der Entwicklung Larvenstadien 1,2 zu halten. Studien zu weitgehend post-mitotischen erwachsenen Fliegen haben Störung des Glukose-Homöostase als Ergebnis des genetischen Ablation von Insulin-like peptide (ILP) produzierenden Zellen (IPCs) 3 enthüllt. So halten erwachsenen Fruchtfliegen großes Versprechen als eine geeignete genetische Modellsystem für Stoffwechselstörungen wie Diabetes Typ II. Zur weiteren Entwicklung der Fruchtfliege System, müssen vergleichbare physiologische Tests verwendet werden, um die Glukosetoleranz und Insulinsensitivität bei Säugetieren messen eingerichtet werden. Zu diesem Zweck haben wir kürzlich ein neues Verfahren zur Messung der oralen Glukosetoleranztest Reaktion in die erwachsene Fliege beschrieben und demonstriert die Bedeutung der Erwachsenenbildung IPCs bei der Aufrechterhaltung Glukosehomöostase 4,5. Hier haben wir ein zuvor beschriebenes Verfahren zur Insulin-Injektion 6 modifiziert und kombiniert es mit einem neuartigen Hämolymphe-Extraktions-Verfahren der peripheren Insulinsensitivität in der erwachsenen Fliegen zu messen. Einzigartig ist, ermöglicht es unseren Protokoll direkte physiologische Messungen der Erwachsenen fliegen die Fähigkeit eines peripheren Glukose-Last auf Insulin-Injektion, eine Methodik, die es möglich, Insulin-Signalkaskade Mutanten und möglichen Interventionen beeinflussen Glukosetoleranz und Insulinsensitivität in die erwachsene Fliege zu charakterisieren, macht entsorgen.

Watch this Scientific Journal Video about Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster at JoVE.com

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Konservierte Insulin-Signalwege in der Fruchtfliege gefunden<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Make dieser Organismus ein potentielles Werkzeug für die Modellierung von Stoffwechselerkrankungen wie Typ II Diabetes. Zu diesem Zweck ist es wichtig, physiologische Tests zu etablieren, um effektiv zu messen systemischen Wirkung von Insulin in peripheren Glukose zur Verfügung in die erwachsene Fliege.

Insulin-Injektion und Hämolymphe Extraction die Insulinsensitivität in Adult Measure Drosophila melanogaster</em

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function ...

Research

JoVE Journal

Biology

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Hochauflösendes Video Tracking von Locomotion in Adult Drosophila melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Forschung

Biologie

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Präparation Oenocytes von Adult Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

A Quantitative Assay für Insulin-exprimierenden Koloniebildende Vorläufern

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Messung der Lebensdauer in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Use of the Ramsay Assay to Measure Fluid Secretion and Ion Flux Rates in the Drosophila melanogaster Malpighian Tubule

Use of the Ramsay Assay to Measure Fluid Secretion and Ion Flux Rates in the Drosophila melanogaster Malpighian Tubule

Die Nutzung der Ramsay Assay zu Flüssigkeitssekretion und Ionenfluss Preise in der Maßnahme<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Malpighischen Tubulus

Modulation of renal epithelial ion transport allows organisms to maintain ionic and osmotic homeostasis in the face of varying external conditions. The ...

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Glukoseaufnahme Messung und Response auf Insulin Stimulation in<em&gt; In vitro</em&gt; Kultivierte menschliche primäre Myotubes

Skeletal muscle is the largest glucose deposit in mammals and largely contributes to glucose homeostasis. Assessment of insulin sensitivity of muscle ...

Confocal Imaging of Neuropeptide Y-pHluorin: A Technique to Visualize Insulin Granule Exocytosis in Intact Murine and Human Islets

Confocal Imaging von Neuropeptid Y-pHluorin: eine Technik, um Insulin Granulat Exozytose in intakten murinen und menschliche Inseln visualisieren

Insulin secretion plays a central role in glucose homeostasis under normal physiological conditions as well as in disease. Current approaches to study ...

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

Optische Cross-sectional Muskel Bereich Bestimmung von Drosophila Melanogaster Erwachsenen indirekten Flugmuskeln

Muscle mass wasting, known as muscle atrophy, is a common phenotype in Drosophila models of neuromuscular diseases. We have used the indirect flight ...

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualisierung und Verfolgung endogenes mRNAs in Live Drosophila melanogaster Eierkammern

Fluorescence-based imaging techniques, in combination with developments in light microscopy, have revolutionized how cell biologists conduct live cell ...

Measuring Relative Insulin Secretion using a Co-Secreted Luciferase Surrogate

Messung der relativen Insulinsekretion mit einem co-secreted Luciferase Surrogate

Performing antibody-based assays for secreted insulin post-sample collection usually requires a few hours to a day of assay time and can be expensive, ...