Name: insulin injection and hemolymph extraction to measure insulin sensitivity in adult drosophila melanogaster
Uploaded: 2011-06-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster at JoVE.com

Detta arbete har finansierats med bidrag från NIA till YW.CF (AG21068, AG31086).

1. Insulin beredning av lösningar <ol><li> Bered en färsk bovint insulin genom att lösa insulin i PBS för att uppnå en koncentration av 0,01 mg / ml. Både insulin / PBS och kontroll PBS lösningar måste förvaras på is under hela injektionen förfarandet. Dessa lösningar bör beredas med 0,5% (v / v) FD &amp; C Blue No. 1 karamellfärg. </li></ol> 2. Nål beredning och injektion Set-up <ol><li> Förbered kapillär glas nålar med hjälp av en mikropipett puller.The följande avdragar...

<ol>
	<li>Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+insulin-producing+neurons+in+flies:+growth+and+diabetic+phenotypes.">Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes.</a> Science. 296, 1118-1118 (2002).</li><li>Kim, S. K., Rulifson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+mechanisms+of+glucose+sensing+and+regulation+by+Drosophila+corpora+cardiaca+cells.">Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora cardiaca cells.</a> Nature. 431, 316-316 (2004).</li><li>Broughton, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longer+lifespan,+altered+metabolism,+and+stress+resistance+in+Drosophila+from+ablation+of+cells+making+insulin-like+ligands.">Longer lifespan, altered metabolism, and stress resistance in Drosophila from ablation of cells making insulin-like ligands.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 3105-3105 (2005).</li><li>Haselton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+ablation+of+adult+Drosophila+insulin-producing+neurons+modulates+glucose+homeostasis+and+extends+life+span+without+insulin+resistance.">Partial ablation of adult Drosophila insulin-producing neurons modulates glucose homeostasis and extends life span without insulin resistance.</a> Cell Cycle. 9, 3063-3063 (2010).</li><li>Haselton, A. T., Fridell, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+the+study+of+glucose+homeostasis.">Adult Drosophila melanogaster as a model for the study of glucose homeostasis.</a> Aging (Albany NY). 2, 523-523 (2010).</li><li>Belgacem, Y. H., Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+insulin+pathways+alters+trehalose+level+and+abolishes+sexual+dimorphism+in+locomotor+activity+in+Drosophila.">Disruption of insulin pathways alters trehalose level and abolishes sexual dimorphism in locomotor activity in Drosophila.</a> J Neurobiol. 66, 19-19 (2006).</li><li>Demerec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Drosophila. , (1950).</li></ol>

Tekniken beskrivs i denna rapport kan vara användbar i någon studie som undersöker fysiologiska processer som leder till mätbara förändringar i Drosophila hemolymph sammansättning. Genom att kombinera injektion och hemolymph samling på detta sätt är det möjligt att fastställa de omedelbara fysiologiskt relevanta effekter av en viss experimentell behandling eller manipulation. Den främsta fördelen med denna &quot;åderlåtning&quot; tekniken i hemolymph kollektionen jämfört med tidigare tekniker ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Namn på reagens / utrustning </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th></tr><tr><td> Bovint insulin </td><td> Sigma </td><td> I5500 </td></tr><tr><td> Infinity Glukos Reagens </td><td> Thermo Electron Corporation </td><td> TR1541 </td></tr><tr><td> Manuell microinjector </td><td> Sutter Instrument </td><td></td></tr><tr><td> P-87 Flamming / Brown mikropipetten avdragare </td><td> Sutter Instrument </td><td></td></tr><tr><td> Enstaka fat borosilikat kapillär glas </td><td> AM System </td><td> 626 tusen </td></tr><tr><td> FD &amp; C Blue No 1 </td><td> McCormick &amp; Company </td><td></td></tr><tr><td> 1 l microcapillary rör </td><td> Drummond </td><td></td></tr><tr><td> Treaxlig manuell mikromanipulator och bas </td><td> Världen precisionsinstrument </td><td></td></tr></tbody></table>

insulin injection and hemolymph extraction to measure insulin sensitivity in adult drosophila melanogaster

Bevaras näringsämnen avkänning mekanismer finns mellan däggdjur och fruktflugor där peptider som liknar däggdjur insulin och glukagon, respektive funktion att upprätthålla glukoshomeostas under utveckling larvstadier 1,2. Studier på i stort sett efter mitotiska vuxna flugor har visat störning av glukos homeostas som resultat av genetiska ablation av insulin-like peptid (IUP) som producerar celler (IPC) 3. Således vuxna bananflugor är mycket lovande som ett lämpligt genetiska modellsystem för metabola sjukdomar inklusive diabetes typ II. För att ytterligare utveckla systemet bananfluga, måste jämföras fysiologiska test som används för att mäta glukostolerans och insulinkänslighet i däggdjur fastställas. För detta ändamål har vi nyligen beskrivit en ny procedur för att mäta muntliga svar glukostolerans i den vuxna flugan och påvisade betydelsen av vuxna IPC upprätthålla glukoshomeostas 4,5. Här har vi ändrat ett tidigare beskrivits förfarande för insulin injektion 6 och kombinerat det med en roman hemolymph extraktion metod för att mäta perifer insulinkänslighet i den vuxna flugan. Unikt, gör att våra protokoll direkta fysiologiska mätningar av den vuxna flugan förmåga att avyttra en perifer glukosbelastning vid injektionsstället, en metod som gör det möjligt att karakterisera insulin signalering mutanter och eventuella ingrepp som påverkar glukostolerans och insulinkänslighet i den vuxna flugan.

Watch this Scientific Journal Video about Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster at JoVE.com

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Bevaras insulin signalvägar finns i bananfluga<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Gör denna organism ett potentiellt verktyg för modellering metabola sjukdomar inklusive diabetes typ II. I detta syfte är det viktigt att skapa fysiologiska tester för att effektivt mäta systemisk insulin åtgärder i perifert omhändertagande av glukos i den vuxna flugan.

Injektionsstället och Hemolymph Extraction till Mät insulinkänsligheten hos vuxna Drosophila melanogaster</em

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function ...

Research

JoVE Journal

Biology

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Högupplöst video Spårning av rörelseorgan hos vuxna Drosophila melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissekering av Oenocytes från Vuxen Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

En kvantitativ analys av insulin som uttrycker kolonibildande stamfäder

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Mätning av livslängden i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Use of the Ramsay Assay to Measure Fluid Secretion and Ion Flux Rates in the Drosophila melanogaster Malpighian Tubule

Use of the Ramsay Assay to Measure Fluid Secretion and Ion Flux Rates in the Drosophila melanogaster Malpighian Tubule

Användning av Ramsay analys för att mäta vätskeutsöndringen och Ion Flux priser i<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Malpighian tubuli

Modulation of renal epithelial ion transport allows organisms to maintain ionic and osmotic homeostasis in the face of varying external conditions. The ...

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Uppmätt mätning av glukos och reaktion på insulinstimulering i<em&gt; In Vitro</em&gt; Odlade humana primära myotubes

Skeletal muscle is the largest glucose deposit in mammals and largely contributes to glucose homeostasis. Assessment of insulin sensitivity of muscle ...

Confocal Imaging of Neuropeptide Y-pHluorin: A Technique to Visualize Insulin Granule Exocytosis in Intact Murine and Human Islets

Confocal Imaging av neuropeptid Y-pHluorin: en teknik för att visualisera Insulin granulat exocytos i intakt murina och mänskliga holmar

Insulin secretion plays a central role in glucose homeostasis under normal physiological conditions as well as in disease. Current approaches to study ...

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

Optiska tvärsnittsdata muskel område bestämning av Drosophila Melanogaster vuxen indirekta flygmuskler

Muscle mass wasting, known as muscle atrophy, is a common phenotype in Drosophila models of neuromuscular diseases. We have used the indirect flight ...

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualisera och spåra endogena mRNAs i levande Drosophila melanogaster ägg kammare

Fluorescence-based imaging techniques, in combination with developments in light microscopy, have revolutionized how cell biologists conduct live cell ...

Measuring Relative Insulin Secretion using a Co-Secreted Luciferase Surrogate

Mätning relativ insulinsekretion med hjälp av en co-utsöndras Luciferase surrogat

Performing antibody-based assays for secreted insulin post-sample collection usually requires a few hours to a day of assay time and can be expensive, ...