Name: 'bioluminescent' reporter phage for the detection of category a bacterial pathogens
Uploaded: 2011-07-08T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי תוכנית מחקר קטן חדשנות עסקית של המכונים הלאומיים לבריאות (NIAID, 1R43AI082698-01) ו - USDA המכון הלאומי של המזון והחקלאות (NIFA, 2009-33610-20028).

1. י &#39; pestis חיסון צלחת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Streak י pestis A1122 (BeiResources # NR15) תרבויות המניות על לוריא-Bertani (LB) אגר (מילר). השתמש בטכניקה סטרילית לבצע את כל י pestis מניפולציות בסוג הכיתה השנייה הקבינט. biosafety י pestis A1122 הוא רמה biosafety (מנהל?...

<ol>
	<li>Darling, R. G., Catlett, C. L., Huebner, K. D., Jarrett, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Threats+in+bioterrorism.+I:+CDC+category+A+agents.">Threats in bioterrorism. I: CDC category A agents.</a> Emerg Med Clin North Am. 20, 273-309 (2002).</li><li>Chu, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory manual of plague diagnostic tests.. , (2000).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> , (1999).</li><li>Inglesby, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthrax+as+a+biological+weapon,+2002:+updated+recommendations+for+management.">Anthrax as a biological weapon, 2002: updated recommendations for management.</a> JAMA. 287, 2236-2252 (2002).</li><li>Schuch, R., Fischetti, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+genomic+analysis+of+the+Wbeta+and+gamma+phages+infecting+Bacillus+anthracis:+implications+for+evolution+of+environmental+fitness+and+antibiotic+resistance.">Detailed genomic analysis of the Wbeta and gamma phages infecting Bacillus anthracis: implications for evolution of environmental fitness and antibiotic resistance.</a> J Bacteriol. 188, 3037-3051 (2006).</li><li>Garcia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genome+sequence+of+Yersinia+pestis+bacteriophage+phiA1122+reveals+an+intimate+history+with+the+coliphage+T3+and+T7+genomes.">The genome sequence of Yersinia pestis bacteriophage phiA1122 reveals an intimate history with the coliphage T3 and T7 genomes.</a> J Bacteriol. 185, 5248-5262 (2003).</li><li>Schofield, D. A., Molineux, I. J., Westwater, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+bioluminescent+phage+for+detection+of+Yersinia+pestis.">Diagnostic bioluminescent phage for detection of Yersinia pestis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 47, 3887-3894 (2009).</li><li>Schofield, D. A., Westwater, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phage-mediated+bioluminescent+detection+of+Bacillus+anthracis.">Phage-mediated bioluminescent detection of Bacillus anthracis.</a> Journal of Applied Microbiology. 107, 468-478 (2009).</li><li>Chu, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CDC: Basic laboratory protocols for the presumptive identification of Yersinia pestis. , 1-19 (2001).</li><li>Gunnison, J. B., Larson, A., Lazarus, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+differentiation+between+Pasteurella+pestis+and+Pasteurella+pseudotuberculosis+by+action+of+bacteriophage.">Rapid differentiation between Pasteurella pestis and Pasteurella pseudotuberculosis by action of bacteriophage.</a> J Infect Dis. 88, 254-255 (1951).</li><li>Lazarus, A. S., Gunnison, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Action+of+Pasteurella+pestis+Bacteriophage+on+Strains+of+Pasteurella,+Salmonella,+and+Shigella.">The Action of Pasteurella pestis Bacteriophage on Strains of Pasteurella, Salmonella, and Shigella.</a> J Bacteriol. 53, 705-714 (1947).</li><li>Sergueev, K. V., He, Y., Borschel, R. H., Nikolich, M. P., Filippov, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+sensitive+detection+of+Yersinia+pestis+using+amplification+of+plague+diagnostic+bacteriophages+monitored+by+real-time+PCR.">Rapid and sensitive detection of Yersinia pestis using amplification of plague diagnostic bacteriophages monitored by real-time PCR.</a> PLoS One. 5, e11337-e11337 (2010).</li></ol>

שיטה זו ממחישה את יכולתו של הפאג הכתב כדי לזהות במהירות Y. pestis מאז phage הכתב יכול transduce תגובה bioluminescent האות י &#39;תרבותי pestis תאים בתוך 20 דקות אחרי כן phage. Phage עיתונאי הוא גם מסוגל לזהות ישירות י pestis ב מטריצות קליני, ללא תנאי מוקדם של בידוד 7 הטיפוח הבאים. ב?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> Difco אגר LB, מילר </td><td> VWR </td><td> 90003-346 </td></tr><tr><td> Difco LB מרק, מילר </td><td> VWR </td><td> 90003-350 </td></tr><tr><td> 17 x 100 מ&quot;מ צינורות תרבות </td><td> ארה&quot;ב מדעי </td><td> 1485-0810 </td></tr><tr><td> n-Decanal </td><td> סיגמא </td><td> D7384 </td></tr><tr><td> Veritas microplate luminometer </td><td> טרנר Biosystems </td><td> 9100-001 </td></tr><tr><td> במטוס קטנטן microtiter 96-טוב צלחת </td><td> VWR </td><td> 62402-984 </td></tr></tbody></table>

'bioluminescent' reporter phage for the detection of category a bacterial pathogens

Pestis Yersinia ו anthracis Bacillus הם קטגוריה פתוגנים חיידקיים כי הם סוכני סיבתי של המגיפה ואת אנתרקס, בהתאמה 1. למרות התרחשות טבעית של שתי מחלות &quot;כיום נדיר יחסית, את האפשרות של קבוצות טרור באמצעות אלה פתוגנים כמו bioweapon הוא אמיתי. בגלל communicability הטבועה של המחלה, כמובן קליניים מהירה, שיעור תמותה גבוה, זה קריטי, כי התפרצות להתגלות מהר. לכן מתודולוגיות המספקים איתור אבחון מהיר חיוניים על מנת להבטיח יישום מיידי של צעדים לבריאות הציבור ההפעלה של ניהול משברים. רקומביננטי phage הכתב עשוי לספק גישה מהירה ספציפי לגילוי של י &#39; pestis ו-B anthracis. המרכז לבקרת מחלות ומניעתן משתמש כעת תמוגה מבחני קלאסית phage לזיהוי אישר אלה חיידקים פתוגנים 2-4. מבחני אלו לנצל טבעי phage שהם ספציפיים ממס עבור המארחים חיידקי שלהם. לאחר לילה צמיחה של החיידק מעובדים בנוכחות phage הספציפי, היווצרות הפלאק (תמוגה חיידקי) מספק זיהוי חיובי של יעד חיידקי. למרות מבחני האלה הם חזקים, הם סובלים משלושה חסרונות: 1) הם המעבדה מבוססת, 2) הם דורשים בידוד טיפוח חיידקים מן המדגם חשד, ו 3) הם לוקחים 24-36 שעות כדי להשלים. כדי לטפל בבעיות אלה, רקומביננטי &quot;אור מתויג&quot; phage הכתב היו מהונדסים גנטית על ידי שילוב harveyi Vibrio luxAB גנים לתוך הגנום של י &#39; pestis ו-B anthracis phage ספציפי 5-8. הכתב כתוצאה phage luxAB הצליחו לזהות יעד ספציפי שלהם במהירות (תוך דקות) וברגישות הענקת פנוטיפ bioluminescent לתאי הנמען. חשוב לציין, זיהוי הושג גם עם תאים הנמען מעובדים או עם מעושה נגוע דגימות קליניות 7. למטרות הדגמה, כאן אנו מתארים את השיטה לגילוי phage בתיווך של י ידוע pestis לבודד באמצעות phage כתב luxAB בנויים המגפה CDC אבחון phage ΦA1122 6,7 (איור 1). שיטה דומה, עם שינויים קלים (למשל שינוי הטמפרטורה צמיחה התקשורת), ניתן להשתמש לצורך זיהוי של B. anthracis מבודד באמצעות B. phage anthracis Wβ כתב: luxAB 8. השיטה מתארת ​​את התמרה phage בתיווך של פנוטיפ biolumescent י &#39;טיפח pestis התאים הנמדדים לאחר מכן באמצעות luminometer microplate. היתרונות העיקריים של שיטה זו על פני מבחני תמוגה המסורתית הפאג הוא קלות השימוש, התוצאות מהירה, את היכולת לבחון דגימות בו זמנית בפורמט 96-microtiter גם צלחת. <img src="/files/ftp_upload/2740/2740fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. סכמטית איתור. Phage מעורבבים עם המדגם, phage מדביק את התא, luxAB באים לידי ביטוי, ואת bioluminesces התא. עיבוד המדגם אינו הכרחי; phage ותאי מעורבבים ומדד לאחר מכן לאור.

Watch this Scientific Journal Video about 'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens at JoVE.com

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

שיטה פשוטה לזיהוי חיידקים פתוגנים העדיפות היא להשתמש phage כתב מהונדסים גנטית. אלה phage הכתב, אשר הן ספציפיות למין מסוים המארח שלהם, הם מסוגלים במהירות transducing תגובה אות bioluminescent לתאי המארח. בזאת, אנו מתארים את השימוש phage הכתב לצורך זיהוי של<em&gt; Yersinia pestis</em&gt;.

&quot;Bioluminescent&quot; כתב phage לצורך זיהוי של קטגוריה פתוגנים חיידקיים

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

באמצעות הדמיה Bioluminescent לחקור סינרגיזם בין Streptococcus pneumoniae ו שפעת וירוס עכברים תינוקות

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

זיהום של עוברים דג הזברה עם פתוגנים חיידקיים תאיים

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

הדמיה בקטריאלי bioluminescent<em&gt; In Vivo</em

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of ...

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

שינוי Biolistic של פלורסנט Tagged Gene לOpportunistic פטרייתיים פתוגן<em&gt; Neoformans קריפטוקוקוס</em

The basidiomycete Cryptococcus neoformans, an invasive opportunistic pathogen of the central nervous system, is the most frequent cause of fungal ...

Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS

זיהוי של חיידקים פתוגנים נדירים לפי 16S rRNA ג&#39;ין סידור MALDI-TOF MS

There are a number of rare and, therefore, insufficiently described bacterial pathogens which are reported to cause severe infections especially in ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

מבחנים איכותיים וכמוני עבור זיהוי ואפיון של antimicrobials החלבון

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

איתור תפוקה גבוהה של פתוגנים הנשימה בדגימות בעלי חיים על ידי ננו PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

פיתוח של מערכת Reporter וירוס הפטיטיס B לפקח בשלבים המוקדמים של מחזור שכפול

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

פלטפורמה תפוקה גבוהה להקרנה של סלמונלה spp /שיגלה spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...