Name: a cell free assay system estimating the neutralizing capacity of gm-csf antibody using recombinant soluble gm-csf receptor
Uploaded: 2011-06-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Cell Free Assay System Estimating the Neutralizing Capacity of GM-CSF Antibody using Recombinant Soluble GM-CSF Receptor at JoVE.com

Мы очень благодарны К. Nakagaki, д-р Х. Ишии, д-р К. Судзуки, А. Ямагата, К. Oofusa за их ценный вклад.

1. Производство и очистка sGMRα <ol><li> Amplify кДНК sGMRα из плаценты человека библиотеки кДНК с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). </li><li> Добавить 50 базовых 5&#39;-UTR последовательность бакуловирус конце полиэдрина и 27 базы кодирования RGS Его-теги к концу 3 &#39;ампликона ПЦР другим ПЦР. </li><li> В?...

<ol>
	<li>Arai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+neutralizing+capacity+of+GM-CSF+reflects+disease+severity+in+a+patient+with+pulmonary+alveolar+proteinosis+successfully+treated+with+inhaled+GM-CSF.">Serum neutralizing capacity of GM-CSF reflects disease severity in a patient with pulmonary alveolar proteinosis successfully treated with inhaled GM-CSF.</a> Respir Med. 98, 1227-1230 (2004).</li><li>Tazawa, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+and+lung+immunity+in+pulmonary+alveolar+proteinosis.">Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and lung immunity in pulmonary alveolar proteinosis.</a> Am J Respir Crit Care Med. 171, 1142-1149 (2005).</li><li>Inoue, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+a+large+cohort+of+patients+with+autoimmune+pulmonary+alveolar+proteinosis+in+Japan.">Characteristics of a large cohort of patients with autoimmune pulmonary alveolar proteinosis in Japan.</a> Am J Respir Crit Care Med. 177, 752-762 (2008).</li><li>Uchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-affinity+autoantibodies+specifically+eliminate+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+activity+in+the+lungs+of+patients+with+idiopathic+pulmonary+alveolar+proteinosis.">High-affinity autoantibodies specifically eliminate granulocyte-macrophage colony-stimulating factor activity in the lungs of patients with idiopathic pulmonary alveolar proteinosis.</a> Blood. 103, 1089-1098 (2004).</li><li>Sakagami, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+GM-CSF+autoantibodies+and+reproduction+of+pulmonary+alveolar+proteinosis.">Human GM-CSF autoantibodies and reproduction of pulmonary alveolar proteinosis.</a> N Engl J Med. 361, 2679-2681 (2009).</li><li>Raines, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+molecular+cloning+of+a+soluble+human+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+receptor.">Identification and molecular cloning of a soluble human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor receptor.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88, 8203-8207 (1991).</li><li>Williams, W., VonFeldt, J., Rosenbaum, H., Ugen, K., Weiner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+of+a+soluble+form+of+the+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+receptor+alpha+chain+from+a+myelomonocytic+cell+line.+Expression,+biologic+activity,+and+preliminary+analysis+of+transcript+distribution.">Molecular cloning of a soluble form of the granulocyte-macrophage colony-stimulating factor receptor alpha chain from a myelomonocytic cell line. Expression, biologic activity, and preliminary analysis of transcript distribution.</a> Arthritis Rheum. 37, 1468-1478 (1994).</li><li>Prevost, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+(GM-CSF)+and+inflammatory+stimuli+up-regulate+secretion+of+the+soluble+GM-CSF+receptor+in+human+monocytes:+evidence+for+ectodomain+shedding+of+the+cell+surface+GM-CSF+receptor+alpha+subunit.">Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and inflammatory stimuli up-regulate secretion of the soluble GM-CSF receptor in human monocytes: evidence for ectodomain shedding of the cell surface GM-CSF receptor alpha subunit.</a> J Immunol. 169, 5679-5688 (2002).</li><li>Iizuka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+recombinant+mouse+monoclonal+antibody+in+transgenic+silkworm+cocoons.">Production of a recombinant mouse monoclonal antibody in transgenic silkworm cocoons.</a> FEBS J. 276, 5806-5820 (2009).</li><li>Iizuka, M., Tomita, M., Shimizu, K., Kikuchi, Y., Yoshizato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+enhancement+of+recombinant+protein+synthesis+in+transgenic+silkworms+by+a+5'-untranslated+region+of+polyhedrin+gene+of+Bombyx+mori+Nucleopolyhedrovirus.">Translational enhancement of recombinant protein synthesis in transgenic silkworms by a 5'-untranslated region of polyhedrin gene of Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus.</a> J Biosci Bioeng. 105, 595-603 (2008).</li><li>Zou, W., Ueda, M., Yamanaka, H., Tanaka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+a+combinatorial+protein+library+displayed+on+yeast+cell+surface+using+DNA+random+priming+method.">Construction of a combinatorial protein library displayed on yeast cell surface using DNA random priming method.</a> J Biosci Bioeng. 92, 393-396 (2001).</li><li>Tamura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+transformation+of+the+silkworm+Bombyx+mori+L.+using+a+piggyBac+transposon-derived+vector.">Germline transformation of the silkworm Bombyx mori L. using a piggyBac transposon-derived vector.</a> Nat Biotechnol. 18, 81-84 (2000).</li><li>Tomita, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+silkworms+produce+recombinant+human+type+III+procollagen+in+cocoons.">Transgenic silkworms produce recombinant human type III procollagen in cocoons.</a> Nat Biotechnol. 21, 52-56 (2003).</li><li>Ogawa, S., Tomita, M., Shimizu, K., Yoshizato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+transgenic+silkworm+that+secretes+recombinant+proteins+in+the+sericin+layer+of+cocoon:+production+of+recombinant+human+serum+albumin.">Generation of a transgenic silkworm that secretes recombinant proteins in the sericin layer of cocoon: production of recombinant human serum albumin.</a> J Biotechnol. 128, 531-544 (2007).</li><li>Tomita, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+germline+transgenic+silkworm+that+secretes+recombinant+proteins+in+the+sericin+layer+of+cocoon.">A germline transgenic silkworm that secretes recombinant proteins in the sericin layer of cocoon.</a> Transgenic Res. 16, 449-465 (2007).</li><li>Kitamura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+pulmonary+alveolar+proteinosis+as+an+autoimmune+disease+with+neutralizing+antibody+against+granulocyte/macrophage+colony-stimulating+factor.">Idiopathic pulmonary alveolar proteinosis as an autoimmune disease with neutralizing antibody against granulocyte/macrophage colony-stimulating factor.</a> J Exp Med. 190, 875-880 (1999).</li><li>Tanaka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lungs+of+patients+with+idiopathic+pulmonary+alveolar+proteinosis+express+a+factor+which+neutralizes+granulocyte-macrophage+colony+stimulating+factor.">Lungs of patients with idiopathic pulmonary alveolar proteinosis express a factor which neutralizes granulocyte-macrophage colony stimulating factor.</a> FEBS Lett. 442, 246-250 (1999).</li><li>Brown, C., Pihl, C., Murray, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligomerization+of+the+soluble+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+receptor:+identification+of+the+functional+ligand-binding+species.">Oligomerization of the soluble granulocyte-macrophage colony-stimulating factor receptor: identification of the functional ligand-binding species.</a> Cytokine. 9, 219-225 (1997).</li><li>Urano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cell-free+assay+to+estimate+the+neutralizing+capacity+of+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+autoantibodies.">A cell-free assay to estimate the neutralizing capacity of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor autoantibodies.</a> J Immunol Methods. 360, 141-148 (2010).</li><li>Hayashida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+of+a+second+subunit+of+the+receptor+for+human+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+(GM-CSF):+reconstitution+of+a+high-affinity+GM-CSF+receptor.">Molecular cloning of a second subunit of the receptor for human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF): reconstitution of a high-affinity GM-CSF receptor.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 87, 9655-9659 (1990).</li><li>Hansen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+GM-CSF+receptor+complex+reveals+a+distinct+mode+of+cytokine+receptor+activation.">The structure of the GM-CSF receptor complex reveals a distinct mode of cytokine receptor activation.</a> Cell. 134, 496-507 (2008).</li></ol>

Бесклеточной анализа оценкам нейтрализующей способности ГМ-КСФ аутоантител с отличной воспроизводимостью и быстротой. Обязательные ингибирования GM-CSF аутоантитела IgG или сыворотке пациента фракций оценивали результаты анализа. Данные показали корреляцию между обязательными тормож...

a cell free assay system estimating the neutralizing capacity of gm-csf antibody using recombinant soluble gm-csf receptor

ФОН: Ранее мы показали, что нейтрализующей способности, но не концентрации ГМ-КСФ аутоантител коррелирует с тяжестью заболевания у пациентов с аутоиммунными легочного альвеолярного протеиноз (PAP) 1-3. Как отмена GM-CSF биологическую активность в легких является вероятной причиной аутоиммунных PAP 4,5, это перспективное для измерения нейтрализующей способности ГМ-КСФ аутоантител для оценки тяжести заболевания у каждого пациента с PAP. До сих пор, нейтрализующей способности ГМ-КСФ аутоантител была оценена путем вычисления замедление роста у человека клеток костного мозга или TF-1 клетки стимулировали ГМ-КСФ 6-8. В биопроб система, однако, часто бывает проблематично получить достоверные данные, а также сравнивать данные из различных лабораторий, в связи с техническими трудностями в поддержании клеток в постоянном состоянии. ЦЕЛЬ: имитировать GM-CSF привязки к GM-CSF рецепторов на поверхности клетки использованием бесклеточных рецептор-связывающий-анализа. Методы: Трансгенные шелкопряда технология применяется для получения большого количества рекомбинантных растворимых GM-CSF рецепторов альфа (sGMRα) с высокой чистоты 9-13. Рекомбинантный sGMRα содержится в гидрофильные слои серицина шелковых нитей, не будучи слит с протеинами шелка, и, таким образом, мы можем легко извлечь из коконов в хорошей чистоты с нейтральным водных растворах 14,15. К счастью, олигосахарид структур, которые имеют решающее значение для связывания с GM-CSF, больше похожи на структуры человеческого sGMRα, чем те, производимых другими насекомыми или дрожжей. РЕЗУЛЬТАТЫ: бесклеточной анализа системы с помощью sGMRα дали данные с высокой пластичностью и надежности. GM-CSF привязки к sGMRα была дозозависимой ингибируется поликлональных GM-CSF аутоантител в подобной манере к биопроб использованием ТФ-1 клетках, что свидетельствует о нашей новой бесклеточной анализа системы с помощью sGMRα более полезно для измерения нейтрализующей активностью ГМ-КСФ аутоантител, чем системы с помощью биопроб TF-1 ячейки или человеческих клеток костного мозга. Заключение: Мы созданы бесклеточной анализа количественного нейтрализующей способности ГМ-КСФ аутоантител.

Watch this Scientific Journal Video about A Cell Free Assay System Estimating the Neutralizing Capacity of GM-CSF Antibody using Recombinant Soluble GM-CSF Receptor at JoVE.com

A Cell Free Assay System Estimating the Neutralizing Capacity of GM-CSF Antibody using Recombinant Soluble GM-CSF Receptor

Мы разработали бесклеточной связывание с рецепторами анализа для оценки связывания гранулоцитов и макрофагов колониестимулирующий фактор (GM-CSF) с рецепторами. Это позволяет нам оценить конкурентного ингибирования биотинилированного GM-CSF связывания с растворимыми GM-CSF рецепторов альфа-ГМ-КСФ аутоантител с отличной воспроизводимости.

Бесклеточной системе Пробирной Оценка нейтрализующей способности ГМ-КСФ антител с использованием рекомбинантных растворимых ГМ-КСФ рецептор

BACKGROUNDS: Previously, we demonstrated that neutralizing capacity but not the concentration of GM-CSF autoantibody was correlated with the disease ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Expression of Functional Recombinant Hemagglutinin and Neuraminidase Proteins from the Novel H7N9 Influenza Virus Using the Baculovirus Expression System

Выражение функциональных рекомбинантного гемагглютинина и нейраминидазы белков от вируса H7N9 Роман гриппа Используя выражение бакуловирусной системе

The baculovirus expression system is a powerful tool for expression of  recombinant proteins. Here we use it to produce correctly folded and  glycosylated ...

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

Масштабируемость Высокая пропускная Выбор фага-дисплее синтетических библиотек антител

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

Генерация и идентификация GM-CSF производный альвеол, как макрофаги и дендритные клетки из костного мозга мыши

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Оценка сетчатке микроглии фагоцитарной функции<em&gt; В Vivo</em&gt; С использованием анализа проточной цитометрии на основе

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Мышиные лимфоцит Этикетировочное по<sup&gt; 64</sup&gt; Си-антитело к рецептору Ориентация на<em&gt; В Vivo</em&gt; Cell Торговля ПЭТ / КТ

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Поколение побег вариантов нейтрализующих антител моноклональных вирус гриппа

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to A(H3N2) Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to AH3N2 Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

Измерения гриппа, нейтрализуя антитело ответы на A(H3N2) вирусов в человеческой сыворотки, Microneutralization Assays клетки с помощью MDCK-SIAT1

Neutralizing antibodies against hemagglutinin (HA) of influenza viruses are considered the main immune mechanism that correlates with protection for ...

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Роман фидер бесплатная система для массового производства мышиных естественных клеток-киллеров в пробирке

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor ...

In Vitro Differentiation of Mouse Granulocyte-macrophage-colony-stimulating Factor (GM-CSF)-producing T Helper (THGM) Cells

In Vitro Differentiation of Mouse Granulocyte-macrophage-colony-stimulating Factor GM-CSF-producing T Helper THGM Cells

В пробирке Дифференциация мыши гранулоцитарно макрофагального колониестимулирующий фактор (ГМ КСФ)-производящ клетки T вспомогательный (THGM)

The granulocyte-macrophage-colony-stimulating factor (GM-CSF)-producing T helper (THGM) cell is a newly identified T helper cell subset that predominantly ...

Complementary Use of Microscopic Techniques and Fluorescence Reading in Studying Cryptococcus-Amoeba Interactions

Complementary Use of Microscopic Techniques and Fluorescence Reading in Studying Cryptococcus-Amoeba Interactions

Дополнительное использование микроскопических методов и флуоресценции Чтение в изучении Cryptococcus-Amoeba Взаимодействия

To simulate Cryptococcus infection, amoeba, which is the natural predator of cryptococcal cells in the environment, can be used as a model for ...