Name: aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors
Uploaded: 2012-05-31T12:00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors at JoVE.com

Met dank aan Cori Sanders op Iroc Ontwerpen voor het bereiden van illustraties en aan Kris Reddi aan de UCLA voor het opzetten van monster culturen voor cijfers. De financiering voor dit project werd verzorgd door HHMI (HHMI Grant nr. 52006944).

<ol>
	<li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> At the Bench: A Laboratory Navigator. , (1998).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL). , (2009).</li><li>Bykowski, T., Stevenson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique.">Aseptic Technique.</a> Current Protocols in Microbiology. Appendix 4, Appendix 4D (2008).</li><li>Cot&#233;, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique+for+Cell+Culture.">Aseptic Technique for Cell Culture.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 1, Unit 1.3 (2001).</li><li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine.">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine.</a> RAP Publication. AC802/E, 12-13 (2002).</li><li>Guzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pipetting:+A+Practical+Guide.">Pipetting: A Practical Guide.</a> The American Biology Teacher. 63 (2), 128-131 (2001).</li><li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual. , (2008).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cloning - A Laboratory Manual. , 978-087969576 (2001).</li><li>Seidman, L. A., Moore, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic Laboratory Methods for Biotechnology: Textbook and Laboratory Reference. , (2000).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PIPETMAN P User's Guide. , (2012).</li></ol>

Ik heb niets te onthullen.

Aseptische verwijst naar een reeks van routine procedures gedaan steriele oplossingen en culturen voorkomen dat besmette van ongewenste micro-organismen in het laboratorium. Dergelijke technieken zijn essentieel voor experimenten groeiende cellen vereist. Hoewel een werkomgeving die volledig steriel kan niet worden bereikt, procedures, zoals desinfecteren laboratorium oppervlakken, het creëren van een steriel veld met een bunsenbrander, beperking van de blootstelling van de niet-afgetopte culturen en media aan de lucht, het steriliseren van materialen, zoals flessen, tubes en glazen pipetten, en het vermijden van contact van steriele instrumenten met niet-steriele oppervlakken vermindert de kans op vervuiling van oplossingen en culturen in een experiment. Het doel is dat deze voorzorgsmaatregelen procedures om een ​​tweede natuur geworden, dit komt met training en de praktijk tijdens het werken in een laboratorium. Deel transfers met steriele oplossingen en culturen met behulp van instrumenten zoals serologische pipetten en microfoonropipettors een van vele soorten gebruikelijke technieken uitgevoerd in een laboratorium. Verschillende experimentele toepassingen roepen voor instrumenten die geschikt zijn om verschillende, maar precies en nauwkeurig, volumes. Serologische pipetten worden gebruikt in microbiologische laboratoria op celculturen die media voorbereidingen met betrekking tot milliliter volumes voor te bereiden, terwijl micropipettors zijn essentieel voor de moleculaire biologie experimenten die alleen microliter hoeveelheden van oplossingen nodig hebben. Wanneer aseptische techniek wordt beoefend met deze instrumenten, is besmetting tot een minimum beperkt tijdens het volume transfers, ongeacht hoeveelheid vloeistof of het type experiment. Hoewel niet in dit protocol een andere middelen gebruikt om vervuiling te voorkomen is om te werken in een laminaire stroming kap (figuur 10). Dit apparaat is essentieel voor weefselkweek en experimenten met micro-organismen als BLS-2 of hoger. Een laminaire stroming kap bevat een HEPA (hoog rendementParticulate Air) filter dat verontreinigingen in de lucht verwijdert uit de lucht stroomt in de motorkap, terwijl het voorkomen ongefilterde lucht uit de kamer van doordringt de werkruimte. Van de nota kan een bunsenbrander niet worden gebruikt in een laminaire stroming kap omdat de warmte van de vlam verstoord luchtstroom van essentieel belang om de functionaliteit van de kap. Het is vaak handig om de kwaliteit van uw aseptische techniek te controleren bij het uitvoeren van experimenten. Om oplossingen te bevestigen en cultuur media niet die tijdens het experimentele manipulaties krijgen, altijd voor te bereiden een negatieve controle. Als bijvoorbeeld bereiden buizen bouillon gedurende groei van bacterieculturen niet enten een buis waardoor alleen steriel media. Incubeer het medium langs de geënte buizen te inspecteren dan niet-geënte controle buis op tekenen van verontreiniging, zoals troebelheid van de groei van ongewenste cellen onbedoeld geïntroduceerd in de buis. Indien de controle buis verontreinigd de experimentele buiss kunnen worden ook vervuild en het experiment te herhalen. Deze voorzorgsmaatregelen moeten worden gedaan met elk experiment.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> LB-bouillon </td><td> Difco </td><td> 244620 </td><td> Recept ook in referentie 6 </td></tr><tr><td colspan="4"> TE buffer: </td></tr><tr><td> EDTA dinatriumzoutdihydraat </td><td> Sigma </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> Sigma </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Decon Laboratories, Inc </td><td> 8504 </td><td> Ontsmettingsmiddel </td></tr><tr><td> Ethanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A406 </td><td> Voor gebruik als desinfectiemiddel, bereid 70% (v / v) met gedestilleerd water </td></tr></tbody></table>

aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors

Micro-organismen zijn overal - in de lucht, de bodem, en het menselijk lichaam en op levenloze oppervlakken, zoals het laboratorium banken en toetsenborden van computers. De alomtegenwoordigheid van microben zorgt voor een uitgebreid aanbod van potentiële contaminanten in een laboratorium. Van experimentele succes te garanderen, moet het aantal verontreinigingen op apparatuur en werkbladen worden geminimaliseerd. Vaak voor bij vele experimenten in de microbiologie zijn technieken waarbij de meting en de overdracht van culturen met bacteriële cellen of virale deeltjes. Om dit te doen zonder contact met niet-steriele oppervlakken of besmettende steriele media vereist (1) de voorbereiding van een steriele werkruimte, (2) precies en nauwkeurig instellen van het lezen van instrumenten voor aseptische overdracht van vloeistoffen, en (3) goed manipuleren van instrumenten, culturen flacons, flessen en buizen in een steriel veld. Het leren van deze procedures vraagt ​​om opleiding en praktijk. In eerste instantie moeten acties traag, weloverwogen, en gecontroleerd met als doel voor aseptische technique een tweede natuur geworden bij het werken op de bank. Hier presenteren we de stappen voor het meten van volumes met behulp van serologische pipetten en micropipettors binnen een steriel veld gecreëerd door een bunsenbrander. Volumes van microliter (il) tot milliliter (ml) afhankelijk van de gebruikte instrument. Vloeistoffen vaak overgedragen omvatten steriele bouillon of chemische oplossingen, alsmede bacteriële culturen en faag voorraden. Door het volgen van deze procedures, moeten studenten in staat zijn om: <ul><li> Het werk binnen het steriele veld gecreëerd door de bunsenbrander vlam. </li><li> Gebruik serologische pipetten zonder afbreuk te doen instrument steriliteit. </li><li> Zuig vloeistoffen met serologische pipetten, juist het lezen van geijkte volumes door het gelijktrekken van de meniscus gevormd door de vloeistof aan het afstuderen markeringen op de pipet. </li><li> Houd cultuur flessen, flacons, tubes en hun respectieve caps steriele vloeistof tijdens transfers. </li><li> Identificeer verschillende toepassingen voor kunststof ten opzichte van glas serologische pipEttes. </li><li> Staat nauwkeurigheid beperkingen voor micropipettors. </li><li> Precies en nauwkeurig in te stellen volumes op micropipettors. </li><li> Weet hoe goed de eerste en tweede stop op een micropipettor te gebruiken om te zuigen en over te dragen juiste volumes. </li></ul>

Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors at JoVE.com

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

Bij het werken in een laboratorium is het noodzakelijk te minimaliseren bronnen van verontreiniging. Aseptische techniek heeft betrekking op procedures die de overdracht van culturen en reagentia toe terwijl het vermijden van contact met niet-steriele oppervlakken. Serologische pipetten en micropipettors worden gebruikt om de precieze hoeveelheden te meten zonder afbreuk te doen aan de steriliteit van de oplossingen die gebruikt worden in experimenten.

Aseptische Laboratoriumtechniek: Volume Transfers met serologische Pipetten en Micropipettors

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microbial Communities in Nature and Laboratory - Interview

Microbiële gemeenschappen in de natuur en laboratorium - Interview

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

Het maken van Patch-pipetten en Sharp elektroden met een programmeerbare Puller

Glass microelectrodes (also called pipettes) have been a workhorse of electrophysiology for decades.  Today, such pipettes are made from glass capillaries ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Druk polijsten pipetten voor verbeterde patch-clamp opnemen

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Modeling Biological Membranes with Circuit Boards and Measuring Electrical Signals in Axons: Student Laboratory Exercises

Modelleren van biologische membranen met Circuit Boards en meten van elektrische signalen in Axonen: Student Laboratorium Oefeningen

This is a demonstration of how electrical models can be used to characterize biological membranes. This exercise also introduces biophysical terminology ...

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

Aseptische Laboratoriumtechniek: Plating Methoden

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

Reconstruction of 3-Dimensional Histology Volume and its Application to Study Mouse Mammary Glands

Reconstructie van 3-dimensionale Histologie Volume en de toepassing ervan te studeren Mouse borstklieren

Histology volume reconstruction facilitates the study of 3D shape and volume change of an organ at the level of macrostructures made up of cells. It can ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

Technieken voor de Analyse van de extracellulaire blaasjes Met behulp van flowcytometrie

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

Het meten van druk Volume Loops in de muis

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

Technieken voor het induceren en te kwantificeren Cellulaire senescentie

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Volume Segmentation and Analysis of Biological Materials Using SuRVoS (Super-region Volume Segmentation) Workbench

Volume Segmentation and Analysis of Biological Materials Using SuRVoS Super-region Volume Segmentation Workbench

Volume segmentatie en analyse van biologische materialen met behulp van de SuRVoS (Super regio Volume segmentatie) Workbench

Segmentation is the process of isolating specific regions or objects within an imaged volume, so that further study can be undertaken on these areas of ...