Name: aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors
Uploaded: 2012-05-31T12:00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors at JoVE.com

תודה מיוחדת קורי סנדרס על עיצובים Iroc להכנת איורים וכדי קריס Reddi ב-UCLA להקמת תרבויות מדגם של דמויות. המימון לפרויקט זה סופק על ידי HHMI (HHMI גרנט מס &#39;52006944).

<ol>
	<li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> At the Bench: A Laboratory Navigator. , (1998).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL). , (2009).</li><li>Bykowski, T., Stevenson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique.">Aseptic Technique.</a> Current Protocols in Microbiology. Appendix 4, Appendix 4D (2008).</li><li>Cot&#233;, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique+for+Cell+Culture.">Aseptic Technique for Cell Culture.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 1, Unit 1.3 (2001).</li><li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine.">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine.</a> RAP Publication. AC802/E, 12-13 (2002).</li><li>Guzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pipetting:+A+Practical+Guide.">Pipetting: A Practical Guide.</a> The American Biology Teacher. 63 (2), 128-131 (2001).</li><li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual. , (2008).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cloning - A Laboratory Manual. , 978-087969576 (2001).</li><li>Seidman, L. A., Moore, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic Laboratory Methods for Biotechnology: Textbook and Laboratory Reference. , (2000).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PIPETMAN P User's Guide. , (2012).</li></ol>

אין לי מה לחשוף.

הטכניקה אספטי מתייחס למערכת של נהלים שגרתיים לעשות כדי למנוע פתרונות סטריליים ותרבויות מלהפוך מזוהמים על ידי מיקרואורגניזמים לא רצויים במעבדה. טכניקות אלה חיוניים לניסויים הדורשים התאים גוברת. אף על פי הגדרת העבודה כי הוא סטרילי לחלוטין לא ניתן להשיג, נהלים כגון חיטוי משטחים מעבדה, יצירת שדה סטרילי באמצעות מבער בונזן, הגבלת החשיפה של תרבויות התקשורת הסיר את המיכסה לאוויר, עיקור חומרים כגון בקבוקים, צינורות טפטפות זכוכית, ועל הימנעות ממגע של מכשירים סטריליים עם לא סטריליים משטחים מפחית את האפשרות של זיהום פתרונות ותרבויות בניסוי. המטרה היא נהלים אלה זהירות להפוך לטבע שני, זה מגיע עם הכשרה בפועל תוך כדי עבודה במעבדה. נפח העברות עם פתרונות ותרבויות סטריליים באמצעות מכשירים כגון בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות ו מיקרופוןropipettors הם אחד סוגים רבים של טכניקות שגרתיות שנעשו במעבדה. יישומים ניסיוניים שונים דורשים מכשירים המסוגלים להעביר שונים, כמויות מדויקות עדיין ומדויק. בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות משמשים במיקרוביולוגיה מעבדות להכנת תרביות תאים הדורשים הכנות מדיה מעורבים כרכים למיליליטר, ואילו micropipettors חיוניים ניסויים בביולוגיה מולקולרית, כי צריך כמויות רק microliter של פתרונות. כאשר טכניקה אספטי הוא התאמן עם מכשירים אלה, זיהום ממוזער במהלך העברת נפח ללא קשר לכמות של נוזל או סוג של ניסוי. אמנם לא דנו בפרוטוקול זה, אחד באמצעים אחרים נפוצים על מנת למנוע זיהום היא לעבוד בתוך ברדס למינרית הזרימה (איור 10). ציוד זה הוא קריטי עבור התרבות רקמות ניסויים שבוצעו עם מיקרואורגניזמים המסווגים BLS-2 ומעלה. מכסה המנוע זרימה למינרית מכיל (HEPA יעילות גבוההחלקיקי האוויר) מסנן מסיר חומרים מזהמים הנישאים באוויר מן האוויר זורם לתוך מכסה המנוע תוך מניעת בלי פילטר אוויר מהחדר מ המחלחל סביבת העבודה. ראוי לציין, מבער בונזן לא ניתן להשתמש בו בתוך מכסה המנוע זרימה למינרית בגלל החום מהאש משבש את זרימת האוויר חיוני לפעולה התקינה של מכסה המנוע. זה בדרך כלל מועיל כדי לבדוק את איכות הטכניקה aseptic שלך בעת ביצוע הניסויים. כדי לאשר את פתרונות התקשורת והתרבות לא מקבלים מזוהמים במהלך המניפולציה, תמיד להכין בקרת שלילית. לדוגמה, אם הכנת צינורות של מרק לצמיחה של תרבויות חיידקים, לא לחסן 1 ולהשאיר רק צינור התקשורת סטריליים. דגירה בינוני לצד צינורות מחוסן ואז לבדוק את צינור השליטה uninoculated סימנים של זיהום כגון עכירות מן הצמיחה של תאים לא רצויים שהוכנסו בטעות לתוך הצינור. אם הצינור השליטה מזוהם, שפופרת הניסויסביר להניח מזוהמים גם כן, הניסוי יהיה צורך לחזור. אמצעים אלה זהירות צריך להיעשות בכל ניסוי.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> LB מרק </td><td> Difco </td><td> 244620 </td><td> מתכון זמינה גם התייחסות 6 </td></tr><tr><td colspan="4"> TE חוצץ: </td></tr><tr><td> EDTA הרכב: dihydrate מלח </td><td> סיגמא </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> סיגמא </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Decon Laboratories, Inc </td><td> 8504 </td><td> מחטא </td></tr><tr><td> אתנול </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> A406 </td><td> לשימוש חומר חיטוי, להכין 70% (V / V) עם מים מזוקקים </td></tr></tbody></table>

aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors

מיקרואורגניזמים נמצאים בכל מקום - באוויר, אדמה, גוף האדם, כמו גם על משטחים דוממים כמו ספסלים מעבדה ומקלדות מחשב. המצאות בכל מקום של חיידקים יוצר היצע רב של מזהמים פוטנציאליים במעבדה. כדי להבטיח את הצלחת הניסוי, מספר מזהמים על משטחים ציוד העבודה חייב להיות ממוזער. המשותף בין ניסויים רבים במיקרוביולוגיה טכניקות הקשורות מדידה והעברת תרבויות המכילים תאים חיידקיים או חלקיקים נגיפיים. כדי לעשות זאת בלי קשר לא סטריליים משטחים סטריליים או זיהום התקשורת דורש (1) הכנת סביבת עבודה סטרילית, (2) בדיוק ההגדרה ומדויק לקרוא מכשירים להעברת אספטי של נוזלים, ו (3) שצריך לתמרן מכשירים, תרבויות צלוחיות, בקבוקים צינורות בתוך שדה סטרילי. למידה הליכים אלה דורשת אימון ותרגול. בתחילה פעולות צריך להיות איטי ומחושב, ונשלט במטרה להיות עבור T אספטייםechnique להיות טבע שני כאשר עובדים על הספסל. כאן אנו מציגים את הפעולות למדידת נפח באמצעות בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות ו micropipettors בתוך שדה סטרילי נוצר על ידי מבער בונזן. הכרכים נע בין מיקרוליטר (μl) כדי מיליליטר (מ&quot;ל), תלוי במכשיר שימוש. הנוזלים מועברים בדרך כלל כוללות מרק סטרילית או תמיסות כימיות, כמו גם תרבויות חיידקים ומניות הפאג. על ידי ביצוע הליכים אלה, התלמידים צריכים להיות מסוגלים: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבוד בתוך השדה הסטרילי שנוצר על ידי להבה מבער בונזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משתמשים בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות מבלי להתפשר על עקרות המכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב נוזלים עם בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות, דווקא קריאת ספרים מכויל על ידי יישור המניסקוס שהוקמה על ידי נוזל על סימני סיום על פיפטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על תרבות בקבוקים, צלוחיות, צינורות וכובעים שלהם סטריליים במהלך העברת נוזלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זיהוי יישומים שונים עבור PIP סרולוגית פלסטיק לעומת זכוכיתettes. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דיוק המדינה מגבלות micropipettors. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיר במדויק ובאופן מדויק כרכים על micropipettors. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדעת איך להשתמש נכון התחנה הראשונה והשנייה על micropipettor כדי לשאוב ולהעביר כמויות נכונות. </li></ul>

Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors at JoVE.com

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

כאשר עובד במעבדה, חובה לצמצם מקורות זיהום. הטכניקה אספטי מתייחס נהלים המאפשרים העברה של תרבויות ריאגנטים תוך הימנעות ממגע עם משטחים לא סטריליים. בטפי להחדרת נוזלים סרולוגית ו micropipettors משמשים למדידת כמויות מדויקות מבלי להתפשר על עקרות של פתרונות המשמשים בניסויים.

טכניקות מעבדה אספטיים: העברות נפח עם טפטפות ו Micropipettors סרולוגיות

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microbial Communities in Nature and Laboratory - Interview

הקהילות מיקרוביאלית בטבע מעבדה - ראיון

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

ביצוע Patch ו-pipettes אלקטרודות שארפ עם פולר לתכנות

Glass microelectrodes (also called pipettes) have been a workhorse of electrophysiology for decades.  Today, such pipettes are made from glass capillaries ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

לחץ לליטוש pipettes עבור Patch-clamp הקלטה משופרים

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Modeling Biological Membranes with Circuit Boards and Measuring Electrical Signals in Axons: Student Laboratory Exercises

דוגמנות ממברנות ביולוגיות עם מעגלים מדידת אותות חשמליים בתוך האקסונים: מעבדה תרגילים סטודנטים

This is a demonstration of how electrical models can be used to characterize biological membranes. This exercise also introduces biophysical terminology ...

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

טכניקות מעבדה אספטיים: שיטות ציפוי

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

Reconstruction of 3-Dimensional Histology Volume and its Application to Study Mouse Mammary Glands

שחזור נפח היסטולוגיה 3 ממדים ויישומו לחקר מאוס החלב בלוטות

Histology volume reconstruction facilitates the study of 3D shape and volume change of an organ at the level of macrostructures made up of cells. It can ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

טכניקות לניתוח של תאית שלפוחית ​​שימוש cytometry הזרימה

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

מדידת לולאות נפח לחץ העכבר

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

טכניקות כדי להשרות ולכמת סלולר הזדקנות

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Volume Segmentation and Analysis of Biological Materials Using SuRVoS (Super-region Volume Segmentation) Workbench

Volume Segmentation and Analysis of Biological Materials Using SuRVoS Super-region Volume Segmentation Workbench

נפח פילוח וניתוח של חומרים ביולוגיים באמצעות SuRVoS (סופר-אזור אחסון פילוח) עבודה, שעליו מונחים

Segmentation is the process of isolating specific regions or objects within an imaged volume, so that further study can be undertaken on these areas of ...