Name: aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors
Uploaded: 2012-05-31T12:00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors at JoVE.com

Особая благодарность Кори Сандерса в Iroc образцы для подготовки иллюстраций и Крис Редди в Лос-Анджелесе для создания образцов культуры для фигуры. Финансирование этого проекта была предоставлена ​​HHMI (HHMI грант № 52006944).

<ol>
	<li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> At the Bench: A Laboratory Navigator. , (1998).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL). , (2009).</li><li>Bykowski, T., Stevenson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique.">Aseptic Technique.</a> Current Protocols in Microbiology. Appendix 4, Appendix 4D (2008).</li><li>Cot&#233;, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique+for+Cell+Culture.">Aseptic Technique for Cell Culture.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 1, Unit 1.3 (2001).</li><li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine.">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine.</a> RAP Publication. AC802/E, 12-13 (2002).</li><li>Guzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pipetting:+A+Practical+Guide.">Pipetting: A Practical Guide.</a> The American Biology Teacher. 63 (2), 128-131 (2001).</li><li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual. , (2008).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cloning - A Laboratory Manual. , 978-087969576 (2001).</li><li>Seidman, L. A., Moore, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic Laboratory Methods for Biotechnology: Textbook and Laboratory Reference. , (2000).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PIPETMAN P User's Guide. , (2012).</li></ol>

Мне нечего раскрывать.

Асептики относится к набору рутинных процедур сделать, чтобы предотвратить стерильных растворов и культур становится загрязненной нежелательных микроорганизмов в лабораторных условиях. Такие методы необходимы для проведения экспериментов, требующих растущие клетки. Несмотря на то, рабочей обстановке, полностью стерильных не может быть достигнуто, процедуры, такие как дезинфекция лаборатория поверхности, создавая стерильную поле с помощью горелки Бунзена, ограничение воздействия раскрытый культуры и средств массовой информации в воздух, стерилизация материалов, таких как бутылки, трубы, стекло пипетки, и избегая контакта стерильных инструментов с нестерильных поверхностей снижает возможность загрязнения решений и культуры в эксперименте. Цель этих процедур предосторожности, чтобы стать второй натурой, это приходит с практикой подготовки и во время работы в лаборатории. Объем переводов в стерильных растворов и культуры с помощью инструментов, таких как серологических пипеток и микрофонropipettors являются одним из многих видов рутинных методов сделано в лаборатории. Различные экспериментальные приложения требуют инструменты могут передавать различные, но точный и аккуратный, объемы. Серологические пипетки используются в микробиологической лаборатории для подготовки клеточных культур, требующих подготовки с участием средств массовой информации мл объема, в то время micropipettors имеют важное значение для молекулярной биологии эксперименты, которые нужны только микролитр количества решений. При асептических практикуется с этими документами, загрязнения сведены к минимуму во время объем переводов, независимо от количества жидкости или типа эксперимента. Хотя это и не обсуждается в данном протоколе, одна средства обычно используются для предотвращения загрязнения работать в капот ламинарного течения (рис. 10). Данное оборудование имеет решающее значение для культуры тканей и для экспериментов с микроорганизмами классифицируется как BLS-2 или выше. Капот ламинарный поток содержит HEPA (высокоэффективныйчастиц воздуха) фильтр, который удаляет загрязнения воздуха от воздуха, поступающего в капоте, предотвращая нефильтрованного воздуха из помещения с пронизывающей рабочей области. Следует отметить, что горелку не могут быть использованы в ламинарном боксе, так как тепло от пламени нарушает воздушный поток необходимо функциональность капотом. Часто бывает полезно проверить качество вашей асептики при проведении экспериментов. Для подтверждения решения и культуру средств массовой информации не получают загрязненную во время экспериментальных манипуляций, всегда готовить отрицательный контроль. Например, если подготовка труб бульон для роста бактериальных культур, не прививают одной трубы, оставляя только стерильными средствами массовой информации. Инкубируйте среде наряду с трубами привиты затем проверить uninoculated контроль труб на наличие признаков загрязнения, такие как помутнение от роста нежелательных клеток непреднамеренно ввел в трубку. Если контрольная труба загрязнена, экспериментальные трубыскорее всего загрязнены, а также и опыт придется повторить. Эти меры предосторожности должно быть сделано с каждым экспериментом.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> LB бульоне </td><td> Difco </td><td> 244620 </td><td> Рецепт также в работе 6 </td></tr><tr><td colspan="4"> TE буфера: </td></tr><tr><td> ЭДТА динатриевая соль дигидрат </td><td> Сигма </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> Сигма </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Decon Laboratories, Inc </td><td> 8504 </td><td> Дезинфицирующее средство </td></tr><tr><td> Этанол </td><td> Fisher Scientific </td><td> A406 </td><td> Для использования в качестве дезинфицирующего средства, готовят 70% (объем / объем) с дистиллированной водой </td></tr></tbody></table>

aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors

Микроорганизмы находятся повсюду - в воздухе, почве, и человеческое тело, а также на поверхностях, как неодушевленные лабораторных стендах и компьютерных клавиатур. Широкое распространение микробов создает обильные поставки потенциальных загрязнителей в лабораторных условиях. Для обеспечения экспериментальных успехов, количество загрязняющих веществ на оборудование и рабочие поверхности должны быть сведены к минимуму. Общие многих экспериментов в области микробиологии методики, связанные с измерения и передачи культуры, содержащие бактериальных клеток или вирусных частиц. Чтобы сделать это без обращения нестерильных поверхностей или загрязнения стерильных средах требует (1) подготовка стерильного рабочего, (2) именно установка и точное чтение инструментов для асептического перекачки жидкостей, а также (3) правильно манипулирования инструментами, культуры фляги, бутылки и Трубы в стерильной зоне. Изучение этих процедур требует обучения и практики. Во-первых, действия должны быть медленными, осознанными, и контролируется с целью осуществления для асептического тechnique стать второй натурой при работе на скамейке. Здесь мы представляем шаги для измерения объемов использования серологических пипеток и micropipettors в стерильных поля, создаваемого горелкой Бунзена. Объем варьируется от микролитров (мкл) в миллилитрах (мл) в зависимости от инструмента используются. Жидкости обычно передается включает стерильный бульон или химических растворов, а также бактериальных культур и фагов акций. Следуя этим процедурам, студенты должны уметь: <ul><li> Работа в стерильные поля, создаваемого пламени горелки Бунзена. </li><li> Использование серологических пипеток без ущерба для инструмента бесплодия. </li><li> Аспирируйте жидкостей с серологических пипеток, именно чтение калиброванного объема, совместив мениска образованных жидкости окончания знаки на пипетку. </li><li> Держите культуры бутылки, флаконы, тубы и их крышки стерильной жидкости во время передачи. </li><li> Определение различных приложений для пункта по сравнению с пластиковым стеклом серологическихettes. </li><li> Государство точность ограничений на micropipettors. </li><li> Точно и четко установить объемы на micropipettors. </li><li> Знать, как правильно использовать первый и второй остановки на micropipettor для аспирации и передачи правильных объемов. </li></ul>

Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors at JoVE.com

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

При работе в лаборатории, крайне важно, чтобы свести к минимуму источников загрязнения. Асептики относится к процедурам, которые позволяют передачу культуры и реагенты, избегая контакта с нестерильных поверхностей. Серологические пипетки и micropipettors используются для измерения точного объема без ущерба для стерильности решений, используемых в экспериментах.

Асептики лаборатории: Объем переводов с Серологические пипетки и Micropipettors

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microbial Communities in Nature and Laboratory - Interview

Микробных сообществ в природе и лаборатории - Интервью

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

Создание Patch-пипетки и Sharp Электроды с программируемой Puller

Glass microelectrodes (also called pipettes) have been a workhorse of electrophysiology for decades.  Today, such pipettes are made from glass capillaries ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Давление полировки Пипетки для улучшения Патч-зажим Запись

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Modeling Biological Membranes with Circuit Boards and Measuring Electrical Signals in Axons: Student Laboratory Exercises

Моделирование биологических мембранах с плат и измерения электрических сигналов в Аксоны: Упражнения студенческой лаборатории

This is a demonstration of how electrical models can be used to characterize biological membranes. This exercise also introduces biophysical terminology ...

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

Асептики лаборатории: Покрытие методы

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

Reconstruction of 3-Dimensional Histology Volume and its Application to Study Mouse Mammary Glands

Реконструкция 3-Dimensional гистологии Том и его применение для изучения Mouse молочных желез

Histology volume reconstruction facilitates the study of 3D shape and volume change of an organ at the level of macrostructures made up of cells. It can ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

Методы анализа внеклеточной везикул с использованием проточной цитометрии

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

Измерение давления громкости Loops в мыши

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

Методы индуцируют и Quantify Cellular Старение

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Volume Segmentation and Analysis of Biological Materials Using SuRVoS (Super-region Volume Segmentation) Workbench

Volume Segmentation and Analysis of Biological Materials Using SuRVoS Super-region Volume Segmentation Workbench

Объем сегментации и анализ биологических материалов с помощью Workbench SuRVoS (супер-регионе объем сегментация)

Segmentation is the process of isolating specific regions or objects within an imaged volume, so that further study can be undertaken on these areas of ...