Name: aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors
Uploaded: 2012-05-31T12:00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors at JoVE.com

Speciellt tack till Cori Sanders vid Iroc Motiv för att förbereda illustrationer och Kris Reddi vid UCLA för att inrätta prov kulturer för siffror. Finansieringen för detta projekt har tillhandahållits av HHMI (HHMI Grant nr 52.006.944).

<ol>
	<li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> At the Bench: A Laboratory Navigator. , (1998).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL). , (2009).</li><li>Bykowski, T., Stevenson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique.">Aseptic Technique.</a> Current Protocols in Microbiology. Appendix 4, Appendix 4D (2008).</li><li>Cot&#233;, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique+for+Cell+Culture.">Aseptic Technique for Cell Culture.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 1, Unit 1.3 (2001).</li><li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine.">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine.</a> RAP Publication. AC802/E, 12-13 (2002).</li><li>Guzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pipetting:+A+Practical+Guide.">Pipetting: A Practical Guide.</a> The American Biology Teacher. 63 (2), 128-131 (2001).</li><li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual. , (2008).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cloning - A Laboratory Manual. , 978-087969576 (2001).</li><li>Seidman, L. A., Moore, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic Laboratory Methods for Biotechnology: Textbook and Laboratory Reference. , (2000).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PIPETMAN P User's Guide. , (2012).</li></ol>

Jag har ingenting att lämna ut.

Aseptisk teknik hänför sig till en uppsättning av rutinprocedurer görs för att förhindra sterila lösningar och kulturer blir kontaminerad av oönskade mikroorganismer i laboratoriet. Sådana tekniker är viktigt för experiment som kräver växande celler. Även om ett verk inställning som är helt steril inte kan uppnås, förfaranden såsom desinficering laboratorium ytor, vilket skapar ett sterilt fält med en Bunsenbrännare, vilket begränsar exponeringen av icke-begränsade kulturer och medier i luften, sterilisering material såsom flaskor, rör och pipetter glas, och undvika kontakt av sterila instrument med icke-sterila ytor minskar möjligheten för kontaminering av lösningar och kulturer i ett experiment. Målet är att dessa försiktighetsåtgärder förfaranden för att bli en andra natur, detta kommer med utbildning och praktik när du arbetar i ett laboratorium. Volym överföringar med sterila lösningar och kulturer med hjälp av instrument som serologiska pipetter och micropipettors är en av många typer av rutinmässiga tekniker utförda i ett laboratorium. Olika experimentella tillämpningar kräver instrument som kan överföra olika, men ändå precisa och korrekta, volymer. Serologiska pipetter används i mikrobiologiska laboratorier att förbereda cellkulturer kräver medier förberedelsearbetet där milliliter volymer medan micropipettors är viktigt att molekylärbiologiska experiment som endast behöver mikroliter mängder av lösningar. Då aseptisk teknik utföras med dessa instrument är kontamination minimeras under volym överföring oavsett mängd vätska eller typ av experiment. Även om det inte diskuteras i detta protokoll är en annan metod som vanligtvis används för att förhindra kontaminering att arbeta inom ett laminärt flöde (figur 10). Denna utrustning är avgörande för vävnadsodling och experiment utförda med mikroorganismer som klassificerats som BLS-2 eller högre. En huv med laminärt flöde innehåller ett HEPA (högeffektivpartiklar luft) filter som tar bort luftburna föroreningar från luften strömmar in i huvan och samtidigt förhindra ofiltrerad luft från rummet från att tränga arbetsytan. Att notera, kan en Bunsenbrännare inte användas inuti en huv med laminärt flöde eftersom värmen från lågan stör luftflödet avgörande för funktionaliteten i huven. Det är ofta bra att kontrollera kvaliteten på ditt aseptisk teknik när de utför experiment. För att bekräfta lösningar och kultur media inte får förorenas under experimentella manipulationer, alltid att utarbeta en negativ kontroll. Till exempel, om framställning rör med buljong för tillväxt av bakteriella kulturer, inte inokulera inte en röret lämnar endast sterila medier. Inkubera mediet vid sidan av de inokulerade rören då inspektera icke ympad kontroll rör för tecken på kontaminering som grumlighet från tillväxt av oönskade celler oavsiktligt införts i röret. Om kontrollen röret är förorenad, den experimentella rörettroligt är smittade också, och försöket kommer att upprepas. Dessa försiktighetsåtgärder bör göras med varje experiment.

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet på reagens </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> LB-buljong </td><td> Difco </td><td> 244.620 </td><td> Recept finns även i referens 6 </td></tr><tr><td colspan="4"> TE-buffert: </td></tr><tr><td> EDTA-dinatriumsalt-dihydrat </td><td> Sigma </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> Sigma </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Decon Laboratories, Inc. </td><td> 8504 </td><td> Desinfektionsmedel </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A406 </td><td> För användning som desinfektionsmedel, framställa 70% (volym / volym) med destillerat vatten </td></tr></tbody></table>

aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors

Mikroorganismer finns överallt - i luften, jorden och människokroppen samt på livlösa ytor som laboratorie bänkar och tangentbord dator. Den gränslösa mikrober skapar en riklig tillgång av potentiella föroreningar i ett laboratorium. För att säkerställa experimentell framgång måste antalet föroreningar på utrustning och arbete ytor minimeras. Vanligare bland många experiment i mikrobiologi är tekniker som omfattar mätning och överföring av kulturer som innehåller bakteriella celler eller viruspartiklar. För att göra detta utan att kontakta icke-sterila ytor eller förorena sterila media kräver (1) förbereder en steril arbetsyta, (2) exakt inställning och korrekt läsa instrument för aseptisk överföring av vätskor, och (3) rätt att manipulera instrument, kulturer flaskor, flaskor och rör inuti ett sterilt fält. Att lära dessa förfaranden kräver utbildning och övning. Till en början bör åtgärder vara långsam, avsiktligt, och kontrolleras med målet att för aseptiska technique att bli en andra natur när man arbetar vid bänken. Här presenterar vi de steg för att mäta volymer med serologiska pipetter och micropipettors inom ett sterilt fält som skapas av en Bunsenbrännare. Volymer sträcker sig från mikroliter (| il) till milliliter (ml) beroende på den använda instrumentet. Vätskor vanligt överförs inkluderar sterila buljong eller kemiska lösningar samt bakteriekulturer och lager fag. Genom att följa dessa förfaranden ska den studerande kunna: <ul><li> Arbeta inom det sterila fältet som skapas av den bunsenbrännare flamman. </li><li> Använd serologiska pipetter utan att kompromissa med instrumentet sterilitet. </li><li> Aspirera vätskor med serologiska pipetter, just läst kalibrerade volymerna genom att rikta in menisken bildas av vätskan till skalstreck på pipetten. </li><li> Håll kultur flaskor, tuber och deras respektive mössor sterila under flytande överföringar. </li><li> Identifiera olika tillämpningar för plast kontra glas serologiska pipettes. </li><li> Statliga noggrannhet begränsningar för micropipettors. </li><li> Exakt och korrekt inställd volym på micropipettors. </li><li> Vet hur man korrekt att använda den första och andra stopp på en mikropipett för att aspirera och överföra korrekta volymer. </li></ul>

Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors at JoVE.com

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

När du arbetar i ett laboratorium är det absolut nödvändigt att minimera föroreningskällor. Aseptisk teknik hänvisar till förfaranden som medger överföring av kulturer och reagenser samtidigt som man undviker kontakt med icke-sterila ytor. Serologiska pipetter och micropipettors används för att mäta exakta volymer utan att kompromissa sterilitet lösningar som används i experiment.

Aseptiska Laboratory Tekniker: Volym Överför med serologiska pipetter och Micropipettors

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microbial Communities in Nature and Laboratory - Interview

Mikrobiella samhällen i naturen och Laboratory - Intervju

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

Göra Patch-pipetter och Sharp Elektroder med en programmerbar Puller

Glass microelectrodes (also called pipettes) have been a workhorse of electrophysiology for decades.  Today, such pipettes are made from glass capillaries ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Tryck-polering Pipetter för förbättrad patch-clamp-inspelning

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Modeling Biological Membranes with Circuit Boards and Measuring Electrical Signals in Axons: Student Laboratory Exercises

Modellering Biologiska membran med kretskort och mäta elektriska signaler i Axoner: Övningar Student Laboratory

This is a demonstration of how electrical models can be used to characterize biological membranes. This exercise also introduces biophysical terminology ...

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

Aseptiska laboratorietekniker: Plating Metoder

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

Reconstruction of 3-Dimensional Histology Volume and its Application to Study Mouse Mammary Glands

Rekonstruktion av 3-dimensionell histologi volym och dess tillämpning att studera Mouse bröstkörtlar

Histology volume reconstruction facilitates the study of 3D shape and volume change of an organ at the level of macrostructures made up of cells. It can ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

Tekniker för analys av extracellulärt Blåsor Använda flödescytometri

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

Tryckmätning Volym loopar i musen

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

Tekniker för att inducera och kvantifiera cellulärt åldrande

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Volume Segmentation and Analysis of Biological Materials Using SuRVoS (Super-region Volume Segmentation) Workbench

Volume Segmentation and Analysis of Biological Materials Using SuRVoS Super-region Volume Segmentation Workbench

Volym segmentering och analys av biologiska material använda Workbench för SuRVoS (Super region volym segmentering)

Segmentation is the process of isolating specific regions or objects within an imaged volume, so that further study can be undertaken on these areas of ...