Name: in vivo imaging of the mouse spinal cord using two-photon microscopy
Uploaded: 2012-01-05T13:00:00
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Ce travail a été soutenu par la National Multiple Sclerosis Society accorde RG4595A1 / T à DD et les subventions des NIH / NINDS NS051470, NS052189 et NS066361 aux figures KA et des films adaptés et / ou tiré à part de Davalos et coll., J Neurosci Méthodes. Mars 2008 30; 169 (1) :1-7 Copyright 2008, avec la permission d&#39;Elsevier.

1. Construire le dispositif de stabilisation spinale <ol><li> Ordre de la mission STS-A Narishige Compact Pinces moelle épinière et le Narishige MA-6N adaptateur tenant la tête. </li><li> Conception sur mesure et faire une plaque en acier inoxydable de base pour tenir les deux parties Narishige dans l&#39;alignement de sorte que la tête de l&#39;animal est pris en charge alors que sa colonne vertébrale et la queue sont serrées. Gardez à l&#39;esprit que l&#39;ensemble du dispositif doit pouvoir être placés so...

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	<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248, 73-76 (1990).</li><li>Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+green+fluorescent+protein.">The green fluorescent protein.</a> Annu. Rev. 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Neurosci. 9, 816-823 (2006).</li><li>Christie, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+arrest+of+individual+senile+plaques+in+a+model+of+Alzheimer's+disease+observed+by+in+vivo+multiphoton+microscopy.">Growth arrest of individual senile plaques in a model of Alzheimer's disease observed by in vivo multiphoton microscopy.</a> J. Neurosci. 21, 858-864 (2001).</li><li>Tsai, J., Grutzendler, J., Duff, K., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrillar+amyloid+deposition+leads+to+local+synaptic+abnormalities+and+breakage+of+neuronal+branches.">Fibrillar amyloid deposition leads to local synaptic abnormalities and breakage of neuronal branches.</a> Nat. Neurosci. 7, 1181-1183 (2004).</li><li>Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+synaptic+plasticity+and+pathology+in+the+living+mouse+brain.">Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain.</a> NeuroRx. 3, 489-496 (2006).</li><li>Takano, T., Han, X., Deane, R., Zlokovic, B., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+astrocytic+Ca2++signaling+and+the+microvasculature+in+experimental+mice+models+of+Alzheimer's+disease.">Two-photon imaging of astrocytic Ca2+ signaling and the microvasculature in experimental mice models of Alzheimer's disease.</a> Ann. N. Y. Acad. 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V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+microscopy+imaging+of+intact+spinal+cord+and+cerebral+cortex+reveals+requirement+for+CXCR6+and+neuroinflammation+in+immune+cell+infiltration+of+cortical+injury+sites.">Two-photon laser scanning microscopy imaging of intact spinal cord and cerebral cortex reveals requirement for CXCR6 and neuroinflammation in immune cell infiltration of cortical injury sites.</a> J. Immunol. Methods. 352, 89-100 (2010).</li><li>Shakhar, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+T+cell-dendritic+cell+interactions+precede+the+development+of+both+tolerance+and+immunity+in+vivo.">Stable T cell-dendritic cell interactions precede the development of both tolerance and immunity in vivo.</a> Nat. Immunol. 6, 707-714 (2005).</li><li>Tadokoro, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+inhibit+stable+contacts+between+CD4++T+cells+and+dendritic+cells+in+vivo.">Regulatory T cells inhibit stable contacts between CD4+ T cells and dendritic cells in vivo.</a> J Exp Med. 203, 505-511 (2006).</li><li>Lindquist, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+dendritic+cell+networks+in+vivo.">Visualizing dendritic cell networks in vivo.</a> Nat. Immunol. 5, 1243-1250 (2004).</li><li>Schwickert, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=vivo+imaging+of+germinal+centres+reveals+a+dynamic+open+structure.">vivo imaging of germinal centres reveals a dynamic open structure.</a> Nature. 446, 83-87 (2007).</li></ol>

La méthode décrite ici permet de stable et répétitive en imagerie in vivo de la fluorescence densément peuplées structures cellulaires dans la moelle épinière des souris anesthésiées à l&#39;aide microscopie à deux photons. La stabilité obtenue est le résultat d&#39;un instrument fait sur mesure et une stabilisation de la colonne vertébrale protocole anesthésique qui réduit d&#39;artefact mouvement respiratoire induite. Le dispositif de stabilisation vertébrale permet de répit sous l...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Société </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Rhodamine B dextrane </td><td> Invitrogen </td><td> D1841 </td><td> 70 kDa, dilué dans ACSF (3% p / v) </td></tr><tr><td> Kétamine HCl </td><td> Bionichepharma </td><td> NDC Non: 67457-001-10 </td><td> Injectable, 50mg/ml </td></tr><tr><td> Anased </td><td> Lloyd Labs </td><td> NADA Non: 139-236 </td><td> Injectables xylazine, 20mg/ml </td></tr><tr><td> Acépromazine </td><td> Vedco </td><td> NADA Non: 117-531 </td><td> Injectable, 10mg/ml </td></tr><tr><td> Les larmes artificielles onguent </td><td> Phoenix pharmaceutiques </td><td> NDC Non: 57319-760 - 25 </td><td> Lubrifiant </td></tr><tr><td> Betadine </td><td> Fisher </td><td> 19-061617 </td><td></td></tr><tr><td> McPherson Westcott Ciseaux </td><td> Précision du Monde Instruments </td><td> 555500S </td><td> Courbé, émoussé pointe ciseaux </td></tr><tr><td> Pince droite </td><td> Précision du Monde Instruments </td><td> 555047FT </td><td> Pince la pointe crantée </td></tr><tr><td> Petit bâtiment cautériser </td><td> Outils Fine Science </td><td> 18000-00 </td><td></td></tr><tr><td> Gelfoam </td><td> Pharmacia, Pfizer Inc </td><td> Mixer Mill MM400 </td><td></td></tr><tr><td> Compact de la moelle épinière pinces </td><td> Narishige </td><td> STS-A </td><td></td></tr><tr><td> Adaptateur de tête tenant </td><td> Narishige </td><td> MA-6N </td><td></td></tr><tr><td> Gelseal </td><td> Amersham Biosciences Corp </td><td> 80-6421-43 </td><td></td></tr><tr><td> Ringer </td><td> Baxter Healthcare &lt;/ Td&gt; <td> 2B8609 </td><td></td></tr><tr><td> Buprenex </td><td> Reckit Benckiser Pharmaceuticals Inc </td><td> NDC Non: 12496 - 6757-1 </td><td> La buprénorphine, injectables </td></tr><tr><td> Baytril </td><td> Bayer </td><td> NADA 140-913 </td><td> Enrofloxacine, injectable antibactérien 2,27% (20ml) </td></tr><tr><td> Coussin chauffant - Grand </td><td> Outils Fine Science </td><td> 21060-10 </td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo imaging of the mouse spinal cord using two-photon microscopy

L&#39;imagerie in vivo en utilisant microscopie à deux photons dans une souris qui ont été génétiquement modifiées pour exprimer des protéines fluorescentes dans des types cellulaires 2-3 a sensiblement élargi notre connaissance des processus physiologiques et pathologiques dans de nombreux tissus in vivo 4-7. Dans les études sur le système nerveux central (SNC), il ya eu une large application de l&#39;imagerie in vivo dans le cerveau, qui a produit une pléthore de nouvelles et les résultats souvent inattendus sur le comportement des cellules comme les neurones, les astrocytes, la microglie, sous conditions physiologiques ou pathologiques 8-17. Toutefois, des complications essentiellement techniques ont limité la mise en œuvre de l&#39;imagerie in vivo dans des études de la moelle épinière de souris vivante. En particulier, la proximité anatomique de la moelle épinière vers les poumons et le cœur génère des artefacts importants mouvements qui permet l&#39;imagerie de la moelle épinière qui vivent une tâche difficile. </p&gt; Nous avons développé une nouvelle méthode qui permet de surmonter les limitations inhérentes à l&#39;imagerie de la moelle épinière par la stabilisation de la colonne vertébrale, réduisant respiratoires induites par les mouvements et en facilitant ainsi l&#39;utilisation de la microscopie à deux photons à l&#39;image de la moelle épinière de souris in vivo. Ce résultat est obtenu en combinant un dispositif de stabilisation spinale personnalisé avec une méthode d&#39;anesthésie profonde, résultant en une réduction significative des maladies respiratoires induites par les mouvements. Ce protocole vidéo montre comment exposer une petite zone de la moelle épinière qui vivent peut être maintenu sous des conditions physiologiques stables sur de longues périodes de temps en gardant une lésion des tissus et des saignements au minimum. Représentant des images brutes acquises en détail in vivo à haute résolution de la relation étroite entre les microglies et la vascularisation. Une séquence timelapse montre le comportement dynamique des processus microgliales dans la moelle épinière de souris vivante. Par ailleurs, une analyse continue de la même z-cadre démontrents la stabilité exceptionnelle que cette méthode peut réaliser pour générer des piles d&#39;images et / ou des films timelapse qui ne nécessitent pas d&#39;alignement d&#39;image post-acquisition. Enfin, nous montrons comment cette méthode peut être utilisée pour revisiter et réimager la même zone de la moelle épinière au timepoints plus tard, permettant des études longitudinales de cours de processus physiologiques ou pathologiques in vivo.

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In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

Un protocole minimalement invasive pour stabiliser la colonne vertébrale de souris et d&#39;effectuer répétitives<em&gt; In vivo</emImagerie&gt; moelle épinière en utilisant microscopie à deux photons est décrit. Cette méthode combine un dispositif de stabilisation vertébrale et un régime d&#39;anesthésie afin de minimiser les mouvements induits par des voies respiratoires et de produire des données d&#39;imagerie brutes qui ne nécessitent pas d&#39;alignement ou d&#39;autres post-traitement.

Dans l&#39;imagerie in vivo de la moelle épinière de souris utilisant microscopie à deux photons

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

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Neurosciences

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