Name: in vivo imaging of the mouse spinal cord using two-photon microscopy
Uploaded: 2012-01-05T13:00:00
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この作品は全国多発性硬化症によってサポートされていた社会助成金適応および/ ​​またはDavalos ら 、J Neurosciの方法より転載KAフィギュアや映画へのDDとNIH / NINDS助成NS051470、NS052189とNS066361へRG4595A1 / T。 2008年03月30; 169（1）:1 - 7 2008著作権、エルゼビアの許可を得て。

1。脊椎安定化装置の構築<ol><li>ナリシゲSTS -コンパクト脊髄クランプとナリシゲMA - 6Nヘッド保持アダプタを注文。 </li><li>カスタム設計とその脊柱と尾部がクランプされている間、動物の頭部がサポートされているように整列二つナリシゲの部分を保持するためにステンレス製の底板を作る。デバイス全体は通常低下顕微鏡のステージ上に顕微鏡レンズの下に入る必要があることに留意して...

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	<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248, 73-76 (1990).</li><li>Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+green+fluorescent+protein.">The green fluorescent protein.</a> Annu. Rev. 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Neurosci. 9, 816-823 (2006).</li><li>Christie, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+arrest+of+individual+senile+plaques+in+a+model+of+Alzheimer's+disease+observed+by+in+vivo+multiphoton+microscopy.">Growth arrest of individual senile plaques in a model of Alzheimer's disease observed by in vivo multiphoton microscopy.</a> J. Neurosci. 21, 858-864 (2001).</li><li>Tsai, J., Grutzendler, J., Duff, K., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrillar+amyloid+deposition+leads+to+local+synaptic+abnormalities+and+breakage+of+neuronal+branches.">Fibrillar amyloid deposition leads to local synaptic abnormalities and breakage of neuronal branches.</a> Nat. Neurosci. 7, 1181-1183 (2004).</li><li>Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+synaptic+plasticity+and+pathology+in+the+living+mouse+brain.">Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain.</a> NeuroRx. 3, 489-496 (2006).</li><li>Takano, T., Han, X., Deane, R., Zlokovic, B., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+astrocytic+Ca2++signaling+and+the+microvasculature+in+experimental+mice+models+of+Alzheimer's+disease.">Two-photon imaging of astrocytic Ca2+ signaling and the microvasculature in experimental mice models of Alzheimer's disease.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 1097, 40-50 (2007).</li><li>Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Fractalkine+Receptor+CX3CR1+Function+by+Targeted+Deletion+and+Green+Fluorescent+Protein+Reporter+Gene+Insertion.">Analysis of Fractalkine Receptor CX3CR1 Function by Targeted Deletion and Green Fluorescent Protein Reporter Gene Insertion.</a> Mol. Cell. Biol. 20, 4106-4114 (2000).</li><li>Kerschensteiner, M., Schwab, M. E., Lichtman, J. W., Misgeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+axonal+degeneration+and+regeneration+in+the+injured+spinal+cord.">In vivo imaging of axonal degeneration and regeneration in the injured spinal cord.</a> Nat. Med. 11, 572-577 (2005).</li><li>Kim, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+microscopy+imaging+of+intact+spinal+cord+and+cerebral+cortex+reveals+requirement+for+CXCR6+and+neuroinflammation+in+immune+cell+infiltration+of+cortical+injury+sites.">Two-photon laser scanning microscopy imaging of intact spinal cord and cerebral cortex reveals requirement for CXCR6 and neuroinflammation in immune cell infiltration of cortical injury sites.</a> J. Immunol. Methods. 352, 89-100 (2010).</li><li>Shakhar, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+T+cell-dendritic+cell+interactions+precede+the+development+of+both+tolerance+and+immunity+in+vivo.">Stable T cell-dendritic cell interactions precede the development of both tolerance and immunity in vivo.</a> Nat. Immunol. 6, 707-714 (2005).</li><li>Tadokoro, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+inhibit+stable+contacts+between+CD4++T+cells+and+dendritic+cells+in+vivo.">Regulatory T cells inhibit stable contacts between CD4+ T cells and dendritic cells in vivo.</a> J Exp Med. 203, 505-511 (2006).</li><li>Lindquist, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+dendritic+cell+networks+in+vivo.">Visualizing dendritic cell networks in vivo.</a> Nat. Immunol. 5, 1243-1250 (2004).</li><li>Schwickert, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=vivo+imaging+of+germinal+centres+reveals+a+dynamic+open+structure.">vivo imaging of germinal centres reveals a dynamic open structure.</a> Nature. 446, 83-87 (2007).</li></ol>

方法は2つの光子顕微鏡を用いて麻酔したマウスの脊髄における人口密度の高い蛍光細胞構造の安定及びin vivoでの反復的なイメージングを可能にするここで説明する。実現性はカスタムメイドの脊椎安定化装置や呼吸器誘発性運動のアーチファクトを減少させる麻酔療法の結果です。脊椎安定化装置は、マウス本体の下に呼吸スペースを可能にし、市販の脊髄クランプとヘッド取付部?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>ローダミンBデキストラン</td><td>インビトロジェン</td><td> D1841 </td><td>で希釈した70kDaの、 ACSF（3％w / v）の</td></tr><tr><td>ケタミン塩酸</td><td> Bionichepharma </td><td> NDC番号：67457-001-10 </td><td> 50mg/ml、注射</td></tr><tr><td> Anased </td><td>ロイド研究所</td><td> NADA番号：139から236 </td><td>キシラジン注射液、 20mg/ml </td></tr><tr><td>アセプロマジン</td><td> Vedco </td><td> NADA番号：117から531 </td><td> 10mg/ml、注射</td></tr><tr><td>人工涙液 軟膏</td><td>フェニックス 製薬</td><td> NDC番号：57319-760 - 25 </td><td>潤滑油</td></tr><tr><td> Betadine </td><td>フィッシャー</td><td> 19-061617 </td><td></td></tr><tr><td>マクファーソン、ウェストコット はさみ</td><td>世界の精密 楽器</td><td> 555500S </td><td>湾曲した、鈍チップ はさみ</td></tr><tr><td>ストレートピンセット</td><td>世界の精密 楽器</td><td> 555047FT </td><td>歯先端の鉗子</td></tr><tr><td>小血管は焼灼する</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 18000〜00 </td><td></td></tr><tr><td> Gelfoam </td><td>ファルマシア、ファイザー社</td><td>ミキサーミルMM400 </td><td></td></tr><tr><td>コンパクト脊髄 クランプ</td><td>ナリシゲ</td><td> STS - </td><td></td></tr><tr><td>頭部保持アダプタ</td><td>ナリシゲ</td><td> MA - 6N </td><td></td></tr><tr><td> Gelseal </td><td>アマシャム バイオサイエンス（株） </td><td> 80-6421-43 </td><td></td></tr><tr><td>乳酸リンゲル</td><td>バクスターヘルスケア&lt;/ TD&gt; <td> 2B8609 </td><td></td></tr><tr><td> Buprenex </td><td> Reckitキットベンキーザー ティカルズ社</td><td> NDC番号：12496 - 6757から1 </td><td>ブプレノルフィン、 注射可能な</td></tr><tr><td> Baytril </td><td>バイエル</td><td> NADA 140から913 </td><td>エンロフロキサシン、 抗菌性注射剤 2.27パーセント（20ミリリットル） </td></tr><tr><td>加熱パッド - 大</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 21060〜10 </td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo imaging of the mouse spinal cord using two-photon microscopy

in vivoで遺伝的に特定の細胞型2-3に蛍光タンパク質を発現するように設計されているマウスでは、二光子顕微鏡1を用いたイメージングでは、大幅にin vivoで 4-7 の多くの組織で生理的および病理学的プロセスの知識を広げている。中枢神経系（CNS）の研究では、小説などの下でニューロン、アストロサイト、ミクログリア、などの細胞の挙動について、しばしば予想外の所見の茄多を生産している脳内のin vivoイメージングの幅広い応用がなされている生理学的または病理学的条件8月17日 。しかし、主に技術的な合併症は、生きているマウスの脊髄の研究ではin vivoイメージングの実装を制限してきた。特に、肺と心臓への脊髄の解剖学的接近は、イメージング生体脊髄やりがいのある仕事になる重要な動きのアーティファクトを生成します。 </P&gt; 我々は、脊柱を安定させる呼吸器誘発性の動きを減らし、それによってin vivoで画像にマウス脊髄をする二光子顕微鏡の使用を容易にすることによって脊髄のイメージングの固有の限界を克服する新しい方法を開発した。これは、呼吸器誘発性運動の有意な減少をもたらす、深い麻酔の方法でカスタマイズされた脊椎安定化装置を組み合わせることによって実現されます。このビデオプロトコルは、組織の損傷を維持して最小限に出血が長期間にわたって安定した生理的条件下で維持することができる生きている脊髄の小さな領域を公開する方法を示しています。高分解能in vivo で詳細にミクログリアと血管の間の密接な関係を取得した代表的な生のイメージ。タイムラプスシーケンスは、生きたマウスの脊髄でのミクログリアのプロセスの動的な挙動を示しています。また、同じz -フレームの連続スキャンが示すのこのメソッドは画像の位置合わせ後の取得を必要としない画像および/またはタイムラプスムービーのスタックを生成するために達成することができる卓越した安定性。最後に、我々は生体内で進行中の生理学的または病理学的プロセスの縦断的研究を可能にする、このメソッドは、後でタイムポイントでの脊髄の同じ領域を再検討し、再イメージングするために使用できる方法を示します。

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In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

マウス脊柱を安定させ、繰り返し実行するために低侵襲プロトコル<em&gt; in vivoで</em二光子顕微鏡を使用して&gt;脊髄の画像が記載されている。このメソッドは、呼吸器誘発性の動きを最小限にしてもアライメントや後処理他を必要としない生の画像データを生成するために脊椎安定化装置と麻酔薬の処方を組み合わせたもの。

二光子顕微鏡を用いたマウス脊髄の in vivoイメージングで

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

皮質ニューロンにおける経験依存性分子の変化の in vivo二光子イメージングにおける

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

皮膚における単一神経終末のin vivo二光子顕微鏡で

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

二光子<em&gt; in vivoで</em&gt;間引き頭蓋骨の準備を使用して、マウス皮質における樹状突起棘のイメージング

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

縦断のために脊髄商工を移植するための手順<em&gt;インビボ</emマウス脊髄の&gt;イメージング

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

マウス脊髄における細胞ダイナミクスの二光子イメージング

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

同時2光子<em&gt;インビボ</emマウス脳梁膨大後部皮質におけるシナプス入力とシナプス後ターゲットの&gt;イメージング

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

HIV誘導神経炎症のマウスモデルでは二光子顕微鏡を用いた脳血管のアーキテクチャの定量化

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

CLARITY / CUBIC技術を用いたマウスの脊髄にセロトニン繊維のイメージング

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Thy1を用いた一次体性感覚野における神経活動のイメージング-GCaMP6s トランスジェニック マウス

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

生体内で新生仔マウスの大脳皮質ニューロンの 2 光子イメージング

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...