Name: mouse model of middle cerebral artery occlusion
Uploaded: 2011-02-13T17:00:00
Duration: 9 min 43 s
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Questo lavoro è stato sostenuto da NIH concedere NS057195, UCSF premio REAC e Kent State University fondo iniziale di WH Chou.

<html> 1. Metodo MCAO Questo protocollo è stato approvato dalla cura degli animali e dei Comitati Istituzionali Usa a UCSF e Kent State University, e si attiene alle linee guida dell&#39;Istituto Nazionale di Sanità per l&#39;uso di animali da esperimento. <ol></ol><ol><li> Tagliare una sutura monofilamento 5-0 (Harvard Apparatus, Holliston, MA) in 20 segmenti mm. Intorno alla punta di ogni segmento di riscaldamento vicino a una cauterizer (Braintree Scientific, Inc., Boston, MA). Misurare il diametro della punta con un micrometro (Applied Image Inc., Rochester, NY). Usiamo una sutura con un diametro punta finale di 0,21-0,22 mm per un mouse con il peso corporeo di 25-30 g. </li><li> Sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici in autoclave (minimo 121 ° C, 15 PSI, per 15 minuti). Sterilizzare il tavolo operatorio e delle apparecchiature connesse con etanolo al 70%. </li><li> Anestetizzare uno 8-12 settimane di età del mouse (25-30 g) con il 5% isoflurano (Aerrane, Baxter, Deerfield, IL) nel 30% O 2 / 70% N 2 O con il sistema V-10 Anestesia (VetEquip, Inc ., Pleasanton, CA). Dopo l&#39;induzione dell&#39;anestesia, ridurre il livello di isoflurano e mantenerla a 1,5%. </li><li> Posizionare il mouse in posizione supina su una piastra elettrica. Inserimento di una sonda rettale, e monitorare e mantenere la temperatura corporea tra i 36,5-37,5 ° C utilizzando il TR-200 del sistema della temperatura homeothermic (Fine Science Tools Inc., Foster City, CA). </li><li> Accorciare il pelo sulla regione ventrale del collo con tagliaunghie elettrici (Braintree scientifico) per esporre la pelle. Disinfettare il sito chirurgico utilizzando tre applicazioni del 70% di etanolo. </li><li> Al microscopio stereo dissezione (Nikon, Giappone), fare un 1 cm lunga incisione sulla linea mediana del collo. Usa divaricatori (Braintree scientifico) per esporre il campo operatorio e di individuare il diritto arteria carotide comune (CCA), arteria carotide esterna (ECA), e della carotide interna (ICA). Con attenzione sezionare le arterie circostanti privi di nervi e fascia. </li><li> Sezionare la Corte dei conti ulteriormente distalmente e coagulare l&#39;(STA) Corte dei conti e la sua arteria tiroidea superiore ramo con un coagulatore bipolare (Howard Instrument Inc., Tuscaloosa, AL). Tagliare la Corte dei conti e STA al segmento coagulato. </li><li> Liberamente pareggio 8-0 due punti di sutura di seta intorno al ceppo della Corte dei conti. Applicare una pinza vascolare (Strumenti di scienze arti) alla biforcazione del CCA in Corte dei conti e ICA. </li><li> Fai una piccola incisione alla fine della Corte dei conti ceppo con Vännäs stile forbici a molla (Strumenti di scienze arti). Misurare e registrare la lunghezza di una sutura monofilamento 5-0 arrotondate sulla punta. Inserire la sutura in incisione e avanzare al morsetto. Serrare le due suture di seta intorno al lume quel tanto che basta a garantire ancora preservare la mobilità delle in-abitazione sutura monofilamento. </li><li> Rimuovere la fascetta dalla biforcazione. Delicatamente anticipo la sutura monofilamento dal lume della Corte dei conti nella ICA per una distanza di 9-10 mm al di là della biforcazione della CCA per occludere l&#39;origine della MCA. La durata dell&#39;intervento è di circa 30-45 min. </li><li> Sutura l&#39;incisione sul collo e posizionare il mouse in una casella C ° 35 di riposo per recuperare da anestesia, e restituirlo alla gabbia. Di solito, occorrono 5-10 min per i topi di recuperare da anestesia. Per eseguire MCAO transitoria, il ricercatore può ri-anestetizzare il mouse e ritirare la sutura di nuovo nel tronco di Corte dei conti, dopo un periodo di tempo, di solito tra 0,5-2 h. </li><li> Ventiquattro ore dopo l&#39;induzione di MCAO, anestetizzare il mouse con il 5% isoflurano e l&#39;eutanasia dalla dislocazione cervicale. Decapitare il mouse e raccogliere il cervello. Tagliate il cervello coronale in quattro fette di 2 mm con una matrice cervello (Braintree scientifico) sul ghiaccio. Incubare le fette di cervello in 2% 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) (Sigma-Aldrich) in PBS 1X per 20 minuti a temperatura ambiente per determinare la dimensione e l&#39;estensione dell&#39;infarto. Fissare le fette di cervello nel 10% tamponata neutra soluzione di formalina (Sigma-Aldrich) a 4 ° C fino imaging. L&#39;estensione di infarto può essere quantificato come descritto nella JOVE protocollo 955 ( <a href="http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955">http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955</a> ) 9. </li></ol> 2. Rappresentante Risultati <ol></ol> Il infarti generato da MCAO sono visti nello striato e nella corteccia dorsolaterale. Lo striato è più sensibile all&#39;ischemia rispetto alla corteccia cerebrale. Trenta minuti di MCAO produrrà un infarto solo nel corpo striato, mentre più di un&#39;ora di MCAO danneggia sia striato e la corteccia. Dopo 24 ore MCAO permanenti, la percentuale di infarto totale è ~ 40 ± 5% dell&#39;emisfero e il tasso di mortalità dopo l&#39;intervento chirurgico è ~ 10%. Escludiamo i topi da ulteriori studi, se si verifica un eccessivo sanguinamento durante l&#39;intervento chirurgico, il tempo di funzionamento supera i 90 minuti, i topi non riescono a riprendersi da anestesia entro 15 minuti, o emorragia si trova nelle sezioni di cervello o alla base del circolo di Willis durante l&#39;esame post-mortem . jove_content &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/2761/2761fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Immagini Rappresentante della TTC-macchiato fettine di cervello (coronale livello 1-4) dopo 24 ore di permanente MCAO. Nel tessuto vivo TTC è enzimaticamente ridotta di deidrogenasi a 1,3,5-triphenylformazan (TPF), che è di colore rosso, mentre nelle aree necrotiche rimane bianca a causa di mancanza di tale attività enzimatica. Pertanto, l&#39;area di infarto può essere identificato dal suo colore bianco a causa della mancanza di conversione del TTC per TPF. Nota: TTC è un po &#39;di calore e luce instabile sezioni colorate in modo da proteggere dal calore e dalla luce quanto più possibile.

<ol>
	<li>Howard, G., Howard, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Distribution of stroke: hetrogeneity of stroke by age, and sex. , 3-12 (2004).</li><li>Thom, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2006 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 113, e85-e151 (2006).</li><li>Mohr, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Middle cerebral artery disease. , 123-166 (2004).</li><li>Longa, E. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Chou, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+protein+kinase+Cdelta+as+a+mediator+of+stroke-reperfusion+injury.">Neutrophil protein kinase Cdelta as a mediator of stroke-reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 114, 49-56 (2004).</li><li>Hudgins, W. R., Garcia, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+electrocautery,+atmospheric+exposure,+and+surgical+retraction+on+the+permeability+of+the+blood-brain-barrier.">The effect of electrocautery, atmospheric exposure, and surgical retraction on the permeability of the blood-brain-barrier.</a> Stroke. 1, 375-380 (1970).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ischemic+stroke:+overview+of+major+experimental+rodent+models,+pathophysiology,+and+therapy+of+focal+cerebral+ischemia.">Acute ischemic stroke: overview of major experimental rodent models, pathophysiology, and therapy of focal cerebral ischemia.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 87, 179-197 (2007).</li><li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia.">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

Non abbiamo alcun interesse potenziale conflitto di rivelare.

MCAO nei topi è comunemente utilizzato per modellare ischemia cerebrale focale in esseri umani. L&#39;uso dei topi per studi corsa è diventato più frequente a causa della disponibilità di ceppi transgenici e knockout. Ci sono alcuni dettagli fondamentali per nota nel protocollo: <ol><li> E &#39;essenziale per mantenere la temperatura corporea del mouse durante l&#39;intervento chirurgico e prima che si riprenda pienamente dall&#39;anestesia. La temperatura corporea ha effetti sul grado di infarto, diminuisce ipotermia e ipertermia aumenta la dimensione dell&#39;infarto. </li><li> Esponendo e isolare il CCA e Corte dei conti, evitare di danneggiare il nervo vago vicino e la trachea, che potrebbe aumentare la dimensione infartuale e la vitalità diminuire. </li><li> Non inserire la sutura monofilamento superiore a 10 mm passare la biforcazione. Una sutura inserito troppo lontano possono perforare l&#39;arteria cerebrale anteriore e causare emorragia cerebrale. Una resistenza può essere sentito quando la sutura è avanzata circa 9-10 mm al di là del punto di biforcazione. In questo caso, il ricercatore dovrebbe smettere di promuovere la sutura e confermare la distanza. </li></ol>

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>Chemical	</td>
<td>Aerrane, Baxter</td>
<td>95045-588</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>V-10 Anesthesia system</td>
<td>Equipment</td>
<td>VetEquip</td>
<td>901807</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TR-200 Temp Controller</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>21060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric clipper</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>CLP-9931</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>Equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>SMZ745T</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Retractor system</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>ACD-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bipolar coagulator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Howard Instrument</td>
<td>64000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silk suture</td>
<td>Material</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>510479</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Monofilament suture</td>
<td>Material</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>723351</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vascular clamp</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>00396-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vannas scissor</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>15000-08</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Brain matrix</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>BS-2000C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td>
<td>Chemical</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T8877</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10% neutral buffer formalin</td>
<td>Chemical</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>HT5011</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

mouse model of middle cerebral artery occlusion

L&#39;ictus è la più comune malattia neurologica letale negli Stati Uniti 1. La maggior parte degli ictus (88%) il risultato di ostruzione dei vasi sanguigni nel cervello (ictus ischemico) 2. Poiché la maggior parte ictus ischemici (~ 80%) si verificano nel territorio dell&#39;arteria cerebrale media (MCA) 3, molti modelli animali ictus che sono stati sviluppati si sono concentrati su questa arteria. Il modello di monofilo intraluminale di occlusione dell&#39;arteria cerebrale media (MCAO) prevede l&#39;inserimento di un filamento chirurgico nella carotide esterna e filettatura in avanti in arteria carotide interna (ICA) finché la punta occlude l&#39;origine della MCA, con conseguente cessazione del flusso sanguigno e conseguente infarto cerebrale nei 4 territorio MCA. La tecnica può essere usata per modellare permanente o transitoria occlusione 5. Se la sutura viene rimosso dopo un certo intervallo (30 min, 1 h, o 2 h), la riperfusione è raggiunto (transitoria MCAO), se il filamento viene lasciato in sede (24 ore) la procedura è adatta come un modello di permanente MCAO . Questa tecnica non richiede craniectomia, una procedura di neurochirurgia per rimuovere una porzione di cranio, che possono influenzare la pressione intracranica e della temperatura 6. E &#39;diventato il metodo più frequentemente usato per mimare permanente e transitoria ischemia cerebrale focale in ratti e topi 7,8. Per valutare il grado di infarto cerebrale, si macchia sezioni di cervello con 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) per identificare il tessuto ischemico cerebrale 9. In questo video, dimostriamo il metodo MCAO e la determinazione della dimensione dell&#39;infarto da colorazione TTC.

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Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Dimostriamo nel video un metodo per produrre una occlusione dell&#39;arteria cerebrale media in topi adulti utilizzando un monofilamento intraluminale. Mostriamo anche come valutare il grado di infarto cerebrale da 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) colorazione.

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