Name: mouse model of middle cerebral artery occlusion
Uploaded: 2011-02-13T17:00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion at JoVE.com

Эта работа была поддержана NIH грант NS057195, UCSF REAC награду, и Kent State University запуска фонда WH Чжоу.

<html> 1. Метод MCAO Этот протокол был одобрен Уходу за животными и использование комитетов UCSF и Кентского государственного университета, а также соблюдает Национального института здоровья руководящих принципов для использования подопытных животных. <ol><li> Вырезать 5-0 мононити шва (Harvard Аппарат, Холлистон, М. А.) в 20 мм сегменты. Круглый кончик каждого сегмента при нагревании его рядом cauterizer (Braintree Научные, Inc, Braintree, MA). Измерьте диаметр кончика использованием микрометра (Applied изображения Inc, Рочестер, штат Нью-Йорк). Мы используем шва с конечным диаметром кончика 0.21-0.22 мм для мыши с массой тела 25-30 г. </li><li> Стерилизовать всех хирургических инструментов в автоклаве (минимум 121 ° С, 15 PSI, в течение 15 мин). Sanitize таблице хирургии и связанного с ним оборудования с использованием 70% этанола. </li><li> Обезболить 8-12 недельных мышей (25-30 г) с 5% изофлуран (Aerrane, Baxter, Дирфилд, штат Иллинойс) в 30% O 2 / 70% N 2 O использованием V-10 Анестезия системы (VetEquip, Inc ., Плезантон, Калифорния). После вводного наркоза, снижение уровня изофлуран и поддерживать его на уровне 1,5%. </li><li> Наведите в положении лежа на грелку. Вставьте ректального датчика, а также контролировать и поддерживать температуру тела между 36.5-37.5 ° С с использованием TR-200 теплокровных температуры системы (Fine науки Инструменты Inc, Foster City, CA). </li><li> Бритье мех на вентральной области шеи с электрическими ножницами (Braintree Scientific) подвергать кожу. Лечить хирургического сайте, используя три заявки из 70% этанола. </li><li> Под стерео рассекает микроскоп (Nikon, Япония), чтобы 1 см в длину средней линии разрез на шее. Используйте преднатяжителями (Braintree Scientific) подвергать операционного поля и определить правой общей сонной артерии (ССА), внешние сонной артерии (ЭКА), и внутренней сонной артерии (ВСА). Аккуратно вскрыть артерии свободными от окружающих нервов и фасции. </li><li> Рассеките ЭКА дальнейшего дистально и коагулируют ЭКА и ее превосходной артерии щитовидной железы (STA) филиала использованием биполярного коагулятора (Howard Инструмент Inc, Tuscaloosa, AL). Вырезать ЭКА и ГНА в коагулируют сегменте. </li><li> Свободно два галстука 8-0 швов шелка вокруг культи ЕЦА. Применить сосудистой зажим (Fine Инструменты наук) в бифуркации ОСА в ЭКА и ICA. </li><li> Сделайте небольшой надрез в конце ЭКА пень с Vannas стиле весны ножницы (Fine Инструменты наук). Измерьте и запишите длину 5-0 мононити шва закругленным кончиком. Вставьте шва в разрез и заранее, чтобы зажим. Затяните два шелковых швов вокруг просвета просто достаточно, чтобы обеспечить еще сохранить подвижность в жилых мононити шва. </li><li> Снимите зажим бифуркации. Аккуратно заранее мононити шва из просвета ЭКА в МКА на расстоянии 9-10 мм за бифуркации ОСА окклюдировать происхождения MCA. Длительность операции составляет около 30-45 мин. </li><li> Шовный разрез на шее и место мышь в 35 ° C кормящих поле, чтобы оправиться от наркоза, и вернуть ее в клетку. Как правило, он занимает 5-10 мин для мышей, чтобы оправиться от наркоза. Для выполнения переходных MCAO, исследователь может повторно анестезию мыши и снять шов обратно в культю ЭКА после периода времени, обычно от 0,5-2 ч. </li><li> Двадцать четыре часа после индукции MCAO, обезболить мышь с 5% изофлуран и усыпить его, шейки дислокации. Обезглавьте мыши и собирать мозга. Нарежьте мозга коронки на четыре 2-мм кубиков с матрицей мозга (Braintree Scientific) на льду. Инкубируйте мозга ломтики в 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium хлорид (ТТС) (Sigma-Aldrich) в 1X PBS в течение 20 мин при комнатной температуре, чтобы определить размер и степень миокарда. Fix мозга срезов в 10% нейтральный буферный формалин решение (Sigma-Aldrich) при 4 ° С до визуализации. Степень миокарда может быть определена количественно, как описано в протоколе Юпитера 955 ( <a href="http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955">http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955</a> ) 9. </li></ol> 2. Представитель Результаты Инфаркты порожденных MCAO видны в полосатом теле и дорсолатеральной коры головного мозга. Полосатого тела более чувствительна к ишемии, чем коры головного мозга. Тридцать минут MCAO будет производить инфаркта только в полосатом теле, а более одного часа MCAO может повредить как стриатуме и коре головного мозга. Через 24 ч постоянной MCAO, общий процент инфаркта ~ 40 ± 5% от полушарии и смертности после операции составляет ~ 10%. Мы исключаем мышей от дальнейших исследований, если чрезмерное кровотечение во время операции, время работы превышает 90 мин, мыши не могут оправиться от наркоза в течение 15 мин, или кровотечение в мозгу ломтиками или у основания круг Уиллис во вскрытии . 61/2761fig1.jpg &quot;ALT =&quot; Рисунок 1 &quot;/&gt; Рисунок 1. Представителю образы TTC-окрашенных ломтики мозга (корональные уровня 1-4) после 24 часов постоянного MCAO. В живой ткани TTC ферментативно сократилось на дегидрогеназ с 1,3,5-triphenylformazan (ВПС), который является красный цвет, а в некротических областях она остается белым из-за отсутствия такого ферментативную активность. Таким образом, область миокарда можно определить по его белым цветом из-за отсутствия преобразования TTC в ВПС. Примечание: TTC несколько тепла и света, поэтому нестабильный защитить окрашенные срезы от тепла и света как можно больше.

<ol>
	<li>Howard, G., Howard, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Distribution of stroke: hetrogeneity of stroke by age, and sex. , 3-12 (2004).</li><li>Thom, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2006 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 113, e85-e151 (2006).</li><li>Mohr, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Middle cerebral artery disease. , 123-166 (2004).</li><li>Longa, E. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Chou, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+protein+kinase+Cdelta+as+a+mediator+of+stroke-reperfusion+injury.">Neutrophil protein kinase Cdelta as a mediator of stroke-reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 114, 49-56 (2004).</li><li>Hudgins, W. R., Garcia, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+electrocautery,+atmospheric+exposure,+and+surgical+retraction+on+the+permeability+of+the+blood-brain-barrier.">The effect of electrocautery, atmospheric exposure, and surgical retraction on the permeability of the blood-brain-barrier.</a> Stroke. 1, 375-380 (1970).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ischemic+stroke:+overview+of+major+experimental+rodent+models,+pathophysiology,+and+therapy+of+focal+cerebral+ischemia.">Acute ischemic stroke: overview of major experimental rodent models, pathophysiology, and therapy of focal cerebral ischemia.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 87, 179-197 (2007).</li><li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia.">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

У нас нет любые потенциальные конфликтующие интересы раскрывать.

MCAO у мышей обычно используется для модели фокальной ишемии мозга у людей. Использование мыши для хода исследования стало более частым из-за наличия трансгенных и нокаут штаммов. Есть несколько ответственных деталей отметить в протоколе: <ol><li> Это необходимо для поддержания температуры тела мыши во время операции и, прежде чем она полностью оправится от анестезии. Температура тела оказывает влияние на степень миокарда; переохлаждение уменьшается, а гипертермия увеличивает размер инфаркта. </li><li> Хотя разоблачение и изоляцию ОСО и ЭКА, избежать повреждения близлежащих блуждающего нерва и трахеи, что может увеличить размер инфаркта и снижению жизнеспособности. </li><li> Никогда не вставляйте мононити шва более 10 мм проходит бифуркации. Шов вставлен слишком далеко может перфорировать передней мозговой артерии и в результате кровоизлияния в мозг. Сопротивление может быть чувствовал, когда шов передовых около 9-10 мм за точкой бифуркации. В этом случае исследователь должен остановить продвижение шва и подтвердить расстояния. </li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>Chemical	</td>
<td>Aerrane, Baxter</td>
<td>95045-588</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>V-10 Anesthesia system</td>
<td>Equipment</td>
<td>VetEquip</td>
<td>901807</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TR-200 Temp Controller</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>21060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric clipper</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>CLP-9931</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>Equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>SMZ745T</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Retractor system</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>ACD-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bipolar coagulator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Howard Instrument</td>
<td>64000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silk suture</td>
<td>Material</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>510479</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Monofilament suture</td>
<td>Material</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>723351</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vascular clamp</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>00396-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vannas scissor</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>15000-08</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Brain matrix</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>BS-2000C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td>
<td>Chemical</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T8877</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10% neutral buffer formalin</td>
<td>Chemical</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>HT5011</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

mouse model of middle cerebral artery occlusion

Инсульт является наиболее распространенным фатальной неврологической болезни в США 1. Большинство ударов (88%) в результате блокирования сосудов головного мозга (ишемический инсульт) 2. Так как большинство ишемических инсультов (~ 80%) имеют место на территории средней мозговой артерии (СМА) 3, многих животных инсульта моделей, которые были разработаны сосредоточили свое внимание на этой артерии. Внутрипросветный модель мононити средней мозговой артерии (MCAO) включает вставки из хирургической нити в наружной сонной артерии и резьбы его вперед на внутренней сонной артерии (ВСА) до кончика закрывает происхождения MCA, что приводит к прекращению кровотока и последующего инфаркта мозга в 4 территории MCA. Метод может быть использован для моделирования постоянной или транзиторной окклюзии 5. Если шов удаляется через определенный интервал (30 мин, 1 час, или 2 ч), реперфузия достигается (переходные MCAO), если нить остается на месте (24 ч) процедура может быть использован как модель непрерывного MCAO . Этот метод не требует удаление фрагментов костей черепа, нейрохирургические процедуры для удаления части черепа, которые могут повлиять на внутричерепное давление и температура 6. Она стала наиболее часто используемый метод, чтобы имитировать постоянное и временное координационного ишемии головного мозга у крыс и мышей 7,8. Для оценки степени инфаркт мозга, мы пятна мозга ломтики с 2,3,5-triphenyltetrazolium хлорид (ТТС) для выявления ишемической ткани мозга 9. В этом видео, мы демонстрируем MCAO метод и определение размера инфаркта окрашиванием ТТК.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion at JoVE.com

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Мы демонстрируем в видео способе получения окклюзии средней мозговой артерии у взрослых мышей использования внутрипросветного мононити. Мы также показываем, как оценить степень инфаркт мозга по 2,3,5-triphenyltetrazolium хлорида (ТТК) окрашивания.

Мышь модели окклюзии средней мозговой артерии

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Моделирование инсульта у мышей - окклюзии средней мозговой артерии с накаливания Модель

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Внутрипросветный средней мозговой артерии (MCAO) Модель развития ишемического инсульта с лазерной допплеровской флоуметрии Руководство у мышей

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Применение постоянных средней мозговой артерии Лигирование в мышь

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Эндотелина-1 Индуцированные средней мозговой артерии модели развития ишемического инсульта с лазерной доплеровской флоуметрии руководство в Крысы

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Используя черепно окна для визуализации средней мозговой артерии во время эндотелина-1 Индуцированные окклюзии средней мозговой артерии

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Оптимизированная система для мониторинга церебральный перфузии у крыс хода модели внутрипросветного окклюзии средней мозговой артерии

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Эмболические средней мозговой артерии Окклюзия (MCAO) для ишемического инсульта с гомологичными сгустки крови у крыс

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Количественное нейрососудистой защите После Серийное гипоксического прекондиционирования и переходных средней мозговой артерии Окклюзия у мышей

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Выполнение Постоянная дистального средней мозговой с общей сонной артерии окклюзии у старых крыс по изучению кортикальной ишемии с устойчивым инвалидности

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...