Name: mouse model of middle cerebral artery occlusion
Uploaded: 2011-02-13T17:00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion at JoVE.com

Detta arbete stöddes av NIH bidrag NS057195, UCSF REAC utmärkelse, och Kent State University startfond till WH Chou.

<html> 1. Kortex Metod Detta protokoll godkändes av Institutional Animal Care och kommittéer Använd vid UCSF och Kent State University, och står fast vid National Institutes of Health riktlinjer för användningen av försöksdjur. <ol><li> Skär en 5-0 monofilamentgarn sutur (Harvard Apparatur, Holliston, MA) till 20 mm segment. Runda toppen av varje segment genom att värma det nära en cauterizer (Braintree Scientific, Inc., Braintree, MA). Mät diametern på spetsen med hjälp av en mikrometer (Applied Image Inc., Rochester, NY). Vi använder en sutur med ett sista tips diameter på 0,21-0,22 mm för en mus med en kroppsvikt på 25-30 g. </li><li> Sterilisera alla kirurgiska verktyg genom autoklavering (minst 121 ° C, 15 PSI, i 15 min). SNYGGA operationen bordet och tillhörande utrustning som använder 70% etanol. </li><li> Bedöva en 8-12 veckor gamla mus (25-30 g) med 5% isofluran (Aerrane, Baxter, Deerfield, IL) hos 30% O 2 / 70% N 2 O med V-10 Anestesi-systemet (VetEquip, Inc ., Pleasanton, CA). Efter induktion av anestesi, minska nivån av isofluran och bibehålla den vid 1,5%. </li><li> Placera musen i ryggläge på en värmedyna. Sätt in en rektal sond, samt övervaka och upprätthålla kroppstemperaturen mellan 36,5-37,5 ° C med hjälp av TR-200 homeothermic temperatur systemet (Fine Science Tools Inc., Foster City, CA). </li><li> Raka pälsen på ventrala halsregionen med elektrisk hårklippningsmaskiner (Braintree vetenskapliga) att exponera huden. Desinficera operationsområdet med hjälp av tre tillämpningar av 70% etanol. </li><li> Enligt en stereo dissekera mikroskop (Nikon, Japan), gör en 1 cm lång mittlinje snitt på halsen. Använd upprullningsdon (Braintree vetenskapliga) att avslöja kirurgiska området och identifiera de rätta gemensamma halspulsådern (CCA), yttre halspulsådern (ECA), och carotis interna (ICA). Försiktigt dissekera artärerna fri från omgivande nerver och fascia. </li><li> Dissekera revisionsrätten ytterligare distalt och koagulerar revisionsrätten och dess överlägsna sköldkörtel artär (STA) filial med hjälp av en bipolär coagulator (Howard Instrument Inc., Tuscaloosa, AL). Skär revisionsrätten och STA på koagulerat segmentet. </li><li> Löst slips två 8-0 siden suturer runt ECA stubben. Applicera en vaskulär klämma (Fine Science Tools) vid bifurkation av CCA till revisionsrätten och ICA. </li><li> Gör ett litet snitt i slutet av revisionsrättens stubbe med Vannas stil våren sax (Fin Science Tools). Mät och anteckna längden på en 5-0 monofilamentgarn sutur rundade i spetsen. Sätt sutur i snitt och gå vidare till klämman. Dra åt de två siden suturer runt lumen precis tillräckligt för att säker men ändå bevara rörligheten i i-bostaden monofilament sutur. </li><li> Ta bort klämman från bifurkation. Försiktigt föra monofilamentgarn sutur från lumen revisionsrätten i ICA för ett avstånd på 90-10 mm utanför bifurkation av CCA att täppa ursprung MCA. Tiden för operation är ca 30-45 min. </li><li> Sutur snittet på halsen och placera musen i ett 35 ° C omvårdnad rutan för att återhämta sig från anestesi, och returnera den till buren. Det tar i regel 5-10 minuter för möss att återhämta sig från anestesi. För att utföra transienta kortex kan forskaren nytt söva musen och dra tillbaka sutur tillbaka in i stubben av revisionsrätten efter en tid, oftast mellan 0,5-2 h. </li><li> Tjugofyra timmar efter induktion av kortex, söva musen med 5% isofluran och avliva den genom att halsdislokation. Halshugga musen och samla hjärnan. Skiva hjärnan koronalt i fyra 2-mm skivor med en hjärna matris (Braintree vetenskapliga) på is. Inkubera hjärnan skivor i 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium klorid (TTC) (Sigma-Aldrich) i 1X PBS i 20 min i rumstemperatur för att bestämma storleken och omfattningen av hjärtinfarkt. Fäst hjärnan skivor i 10% neutral buffrad formalin lösning (Sigma-Aldrich) vid 4 ° C tills avbildning. Omfattningen av infarkt kan kvantifieras enligt JUPITER-protokoll 955 ( <a href="http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955">http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955</a> ) 9. </li></ol> 2. Representativa resultat Den infarkter som genereras av kortex ses i striatum och dorsolaterala cortex. Striatum är mer känslig för ischemi än hjärnbarken. Trettio minuter av kortex kommer att producera en infarkt bara i striatum, medan mer än en timme av kortex kommer att skada både striatum och cortex. Efter 24 timmar bestående kortex är den totala infarkt andelen ~ 40 ± 5% av halvklotet och dödligheten efter operationen är ~ 10%. Vi utesluter möss från fortsatta studier vid kraftig blödning uppstår under operation, överstiger drifttid 90 min, möss misslyckas med att återhämta sig från anestesi inom 15 minuter, eller blödning finns i hjärnan skivor eller vid basen av kretsen av Willis vid obduktion undersökning . 61/2761fig1.jpg &quot;alt =&quot; Bild 1 &quot;/&gt; Figur 1. Representant bilder av TTC-färgade hjärnan skivor (koronal nivå 1-4) efter 24 h fasta kortex. I levande vävnad TTC enzymatiskt minskas med dehydrogenaser till 1,3,5-triphenylformazan (TPF), som är röd till färgen, medan det i nekrotiska områden det är fortfarande vitt på grund av avsaknad av sådana enzymatiska aktivitet. Därför kan området infarkt identifieras genom sin vita färg på grund av konvertering av TTC till TPF. Obs: TTC är något värme och ljus instabil så skydda färgade snitt från värme och ljus så mycket som möjligt.

<ol>
	<li>Howard, G., Howard, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Distribution of stroke: hetrogeneity of stroke by age, and sex. , 3-12 (2004).</li><li>Thom, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2006 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 113, e85-e151 (2006).</li><li>Mohr, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Middle cerebral artery disease. , 123-166 (2004).</li><li>Longa, E. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Chou, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+protein+kinase+Cdelta+as+a+mediator+of+stroke-reperfusion+injury.">Neutrophil protein kinase Cdelta as a mediator of stroke-reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 114, 49-56 (2004).</li><li>Hudgins, W. R., Garcia, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+electrocautery,+atmospheric+exposure,+and+surgical+retraction+on+the+permeability+of+the+blood-brain-barrier.">The effect of electrocautery, atmospheric exposure, and surgical retraction on the permeability of the blood-brain-barrier.</a> Stroke. 1, 375-380 (1970).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ischemic+stroke:+overview+of+major+experimental+rodent+models,+pathophysiology,+and+therapy+of+focal+cerebral+ischemia.">Acute ischemic stroke: overview of major experimental rodent models, pathophysiology, and therapy of focal cerebral ischemia.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 87, 179-197 (2007).</li><li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia.">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

Vi har inte några potentiella intressekonflikter att lämna ut.

Kortex hos möss används ofta för att modellera fokal ischemi i hjärnan hos människor. Användning av möss för stroke studier har blivit vanligare på grund av tillgången av transgena och knockout stammar. Det finns några viktiga detaljer att notera i protokollet: <ol><li> Det är viktigt att hålla temperaturen musen kroppen under operation och innan man helt återhämtar sig från narkosen. Kroppstemperaturen har effekter på omfattningen av infarkten, hypotermi minskar och hypertermi ökar storleken på infarkten. </li><li> Medan exponera och isolera de CCA och revisionsrätten undvika skador på närliggande vagusnerven och luftstrupe, vilket skulle kunna öka infarkt storlek och minskar lönsamheten. </li><li> Aldrig in monofilamentgarn suturen mer än 10 mm passerar bifurkation. En sutur in för långt kan perforera främre cerebral artär och resultera i hjärnblödning. Ett motstånd kan kännas när suturen är avancerad ca 90-10 mm utanför bifurkationen punkten. Om detta inträffar bör forskaren sluta föra fram suturen och bekräfta avståndet. </li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>Chemical	</td>
<td>Aerrane, Baxter</td>
<td>95045-588</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>V-10 Anesthesia system</td>
<td>Equipment</td>
<td>VetEquip</td>
<td>901807</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TR-200 Temp Controller</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>21060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric clipper</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>CLP-9931</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>Equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>SMZ745T</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Retractor system</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>ACD-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bipolar coagulator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Howard Instrument</td>
<td>64000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silk suture</td>
<td>Material</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>510479</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Monofilament suture</td>
<td>Material</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>723351</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vascular clamp</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>00396-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vannas scissor</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>15000-08</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Brain matrix</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>BS-2000C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td>
<td>Chemical</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T8877</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10% neutral buffer formalin</td>
<td>Chemical</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>HT5011</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

mouse model of middle cerebral artery occlusion

Stroke är den vanligaste dödliga neurologisk sjukdom i USA 1. Majoriteten av stroke (88%) beror på blockering av blodkärl i hjärnan (ischemisk stroke) 2. Eftersom de flesta ischemisk stroke (~ 80%) inträffar inom mellersta cerebral artär (MCA) 3, har många djur stroke-modeller som har utvecklats fokuserat på denna artär. Den intraluminal monofilamentgarn modellen av mellersta cerebral artär ocklusion (kortex) innebär införandet av en kirurgisk glödtråden i den yttre halspulsådern och dra den framåt i den inre halspulsådern (ICA) tills spetsen occludes ursprung MCA, vilket resulterar i ett upphörande av blodflödet och efterföljande hjärninfarkt i MCA område 4. Tekniken kan användas för att modellera permanent eller tillfällig ocklusion 5. Om sutur tas bort efter ett visst intervall (30 min, 1 h eller 2 h), är reperfusion uppnås (övergående kortex), om glödtråden är kvar på plats (24 h) Bestämmelserna är lämplig som en modell av permanent kortex . Denna teknik kräver inte craniectomy, ett neurokirurgiskt ingrepp för att avlägsna en del av skallen, som kan påverka intrakraniella tryck och temperatur 6. Det har blivit den mest använda metoden för att efterlikna permanent och tillfällig fokal cerebral ischemi hos råttor och möss 7,8. För att utvärdera omfattningen av hjärninfarkt, bets vi hjärnan skivor med 2,3,5-triphenyltetrazolium klorid (TTC) för att identifiera ischemisk hjärnvävnad 9. I denna video visar vi de kortex metoden och bestämning av infarkt storlek med TTC färgning.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion at JoVE.com

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Vi visar i videon en metod för att producera en mellersta cerebral artär ocklusion i vuxna möss med hjälp av en intraluminal monofilament. Vi visar också hur man ska värdera omfattningen av hjärninfarkt av 2,3,5-triphenyltetrazolium klorid (TTC) färgning.

Musmodell av Middle Cerebral artärocklusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Modellering stroke hos möss - Middle Cerebral artärocklusion med glödlamporna modell

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral artärocklusion (kortex) Modell för ischemisk stroke med Laser Doppler Flowmetry Vägledning hos möss

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Tillämpningen av permanenta Mellanöstern Cerebral Artery Ligation i musen

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Endotelin-1 inducerad Middle cerebral artärocklusion modell för ischemisk stroke med laser Doppler Flowmetry Vägledning i råtta

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Använda en Kranial fönster för att visualisera den mellersta cerebrala artären under Endotelin-1 inducerad Middle cerebral artärocklusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Optimerat system för cerebral perfusion övervakning i råtta Stroke Modell av Intraluminal Middle cerebral artärocklusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Emboli Middle Cerebral artärocklusion (kortex) för ischemisk stroke med Homologa Blodproppar i råttor

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Kvantifiering av neurovaskulär skydd Efter Repetitiva Hypoxisk Förkonditionering och Transient Middle Cerebral artärocklusion hos möss

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Utföra ständiga Distal Middle Cerebral med gemensamma hals artärocklusion i åldrade råttor för att studera kortikal ischemi med fördröjd funktionshinder

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...