Name: a protocol for collecting and staining hemocytes from the yellow fever mosquito aedes aegypti
Uploaded: 2011-05-16T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti at JoVE.com

Auteurs willen graag John Frey en Ben Peterson bedanken voor muggen opfok. We danken ook Christine Davis en Gary Radice voor hulp bij hemocyte microfoto. Dit onderzoek werd gefinancierd door de Universiteit van Richmond Arts &amp; Science zomer fellowship naar AA Qayum en de faculteit te verlenen aan A. Telang.

1. Voorbereiding van hemocyte collectie <ol><li> Bereid een hemolymfe verdunningsmiddel oplossing die bestaat uit 60% Medium van Schneider, 10% foetaal bovine serum (FBS), en 30% citraatbuffer (antistollingsmiddel, 98 mM NaOH, 186 mM NaCl, 1,7 mM EDTA, 41 mM citroenzuur, pH 4,5) 11. Maak 1,0 mL porties die kan worden opgeslagen bij -20 ° C. Gebruik elk aliquot slechts een keer (zie ook Materiaal). </li><li> Bereid glazen objectglaasjes (75 x 25 x 1 mm) met het noteren van een 1 cm cirkel met een diameter a...

<ol>
	<li>Enayati, A., Hemingway, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+management:+past,+present,+and+future.">Malaria management: past, present, and future.</a> Annu. Rev. Entomol. 55, 569-569 (2010).</li><li>Medlock, J., Luz, P. M., Struchiner, C. J., Galvani, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+transgenic+mosquitoes+on+dengue+virulence+to+humans+and+mosquitoes.">The impact of transgenic mosquitoes on dengue virulence to humans and mosquitoes.</a> The American Naturalist. 174, 565-565 (2009).</li><li>Baton, L. A., Garver, L., Xi, Z., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomics+studies+on+the+innate+immunity+of+disease+vectors.">Functional genomics studies on the innate immunity of disease vectors.</a> Insect Sci. 15, 15-15 (2008).</li><li>Thomas, R. E., Wu, W. K., Verleye, D., Rai, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midgut+basal+lamina+thickness+and+dengue-1+virus+dissemination+rates+in+laboratory+strains+of+Aedes+albopictus+(Diptera:+Culicidae).">Midgut basal lamina thickness and dengue-1 virus dissemination rates in laboratory strains of Aedes albopictus (Diptera: Culicidae).</a> J. Med. Entomol. 30, 326-326 (1993).</li><li>Bartholomay, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+infection+responses+in+the+haemocytes+of+the+mosquito,+Aedes+aegypti.">Profiling infection responses in the haemocytes of the mosquito, Aedes aegypti.</a> Insect Mol. Biol. 16, 761-761 (2007).</li><li>Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+cellular+immune+response.">The insect cellular immune response.</a> Insect Sci. 15, 1-1 (2008).</li><li>Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+mortality+in+immune+challenged+mosquitoes+(Aedes+aegypti)+correlates+with+a+decrease+in+haemocyte+numbers.">Age-associated mortality in immune challenged mosquitoes (Aedes aegypti) correlates with a decrease in haemocyte numbers.</a> Cell. Microbiol. 7, 39-39 (2005).</li><li>Chen, C. C., Laurence, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+study+on+humoral+encapsulation+of+microfilariae:+establishment+of+technique+and+description+of+reaction.">In vitro study on humoral encapsulation of microfilariae: establishment of technique and description of reaction.</a> International Journal for Parasitology. 17, 781-781 (1987).</li><li>Beerntsen, B. T., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dirofilaria+immitis:+effects+on+hemolymph+polypeptide+synthesis+in+Aedes+aegypti+during+melanotic+encapsulation+reactions+against+Microfilariae.">Dirofilaria immitis: effects on hemolymph polypeptide synthesis in Aedes aegypti during melanotic encapsulation reactions against Microfilariae.</a> Exp. Parasitol. 71, 406-406 (1990).</li><li>Hillyer, J. F., Schmidt, S. L., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibacterial+innate+immune+response+by+the+mosquito+Aedes+aegypti+is+mediated+by+hemocytes+and+independent+of+Gram+type+and+pathogenicity.">The antibacterial innate immune response by the mosquito Aedes aegypti is mediated by hemocytes and independent of Gram type and pathogenicity.</a> Microb. Infect. 6, 448-448 (2004).</li><li>Castillo, J. C., Robertson, A. E., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+from+the+mosquitoes+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Characterization of hemocytes from the mosquitoes Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 36, 891-891 (2006).</li></ol>

De hemocyte collectie hier beschreven methode is aangepast van eerder gepubliceerde methoden en laat een schoon te maken bereidingen van hemocytes van Aedes muggen isoleren met minder stappen. Terwijl onze bijzondere interesse ligt in het karakteriseren van hemocyte populaties in Aedes muggen, geloven wij deze techniek kan worden toegepast op andere mug groepen na de eerste proeven worden uitgevoerd om de juiste injectie volumes te bepalen. Ons protocol maakt gebruik van anti-stollingsmiddel buffers in...

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th><th> Commentaar (optioneel) </th></tr><tr><td> Schneider&#39;s Medium </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S0146 </td><td></td></tr><tr><td> Foetaal runderserum </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F0643 </td><td></td></tr><tr><td> Hema3 vlek kit </td><td> Visser </td><td> 123-869 </td><td></td></tr><tr><td> Glazen naalden (Borosilicaat met gloeidraad) </td><td> Sutter Instrument </td><td> BF100-78-10 </td><td> 1,0 mm OD en 0.78mm ID </td></tr><tr><td> Naald puller </td><td> Sutter Instrumenten </td><td> Model P-87 </td><td></td></tr><tr><td> MicroInjector </td><td> TriTech Onderzoek </td><td> MINJ-PD </td><td></td></tr><tr><td> Naaldhouder </td><td> TriTech Onderzoek </td><td> MINJ-4 </td><td></td></tr></tbody></table>

a protocol for collecting and staining hemocytes from the yellow fever mosquito aedes aegypti

Muggen zijn vectoren voor een aantal ziekteverwekkende pathogenen, zoals de gele koorts virus, malaria parasieten en filaria wormen. Laboratoria onderzoeken anti-pathogeen componenten van het aangeboren immuunsysteem bij de ziekte van vectorsoorten in de hoop van het genereren van transgene muggen die ongevoelig zijn voor een dergelijke pathogenen 1, 2. Het aangeboren immuunsysteem van muggen bestaat uit verschillende lijnen van de verdediging 3. Pathogenen die erin slagen om de barrière opgelegd door de epitheel-omzoomde muggen middendarm 4 te ontsnappen gaan de hemolymfe en ontmoeting circulerende hemocytes, belangrijke cellulaire componenten die in te kapselen en verzwelgen pathogenen 5, 6. Onderzoekers hebben geen bewijs gevonden voor hematopoietische weefsels in de muggen en de huidige gegevens wijzen erop dat het aantal hemocytes is vastgesteld op volwassen opkomst en het aantal kan zelfs afnemen als de mug leeftijd 7. Het vermogen om goed te verzamelen en te identificeren hemocytes van medisch belangrijke insecten is een essentiële stap voor studies in de cellulaire immuniteit. Echter, de geringe omvang van muggen en de beperkte volume van hemolymfe vormen een uitdaging voor het verzamelen van immuuncellen. Twee gevestigde methoden voor het verzamelen muggen hemocytes zijn uitzetting van hemolymfe van een snee slurf 8, en het volume verplaatsing (perfusie), waarin de zoutoplossing wordt in de vliezige necklike gebied geïnjecteerd tussen de kop en de thorax (dat wil zeggen, cervix) en de geperfuseerde hemolymfe wordt verzameld uit een gescheurde opening in een distale regio van de buik 9, 10. Deze technieken zijn echter beperkt door de lage herstel van de hemocytes en mogelijke vervuiling door vet lichaamscellen, respectievelijk 11. Meer recent een methode aangeduid als high injectie / herstel verbeterde terugvordering van de immunocytes door het gebruik van anticoagulantia buffers terwijl het verminderen van het niveau van verontreinigende schalen en de interne weefsels 11. Terwijl die methode zorgt voor een verbeterde methode voor het verzamelen en onderhouden van hemocytes voor de primaire cultuur, het betekent een aantal van de injectie en het verzamelen van stappen die niet nodig zijn als de stroomafwaartse doel is het verzamelen, repareren en vlek hemocytes voor de diagnostiek. Hier tonen we onze methode voor het verzamelen van muggen hemolymfe dat de eenvoud van perfusie gecombineerd, met behulp van anti-stollingsmiddel buffers in plaats van een zoutoplossing, met de nauwkeurigheid van de hoge injectie technieken om schoon voorbereidingen van hemocytes in Aedes muggen te isoleren.

Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti at JoVE.com

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

Een vereenvoudigde toch nauwkeurige methode voor het verzamelen en vlekken mug hemocytes wordt beschreven. Onze methode combineert de eenvoud van perfusie met de nauwkeurigheid van hoge injectie technieken om schoon voorbereidingen van hemocytes in Aedes muggen te isoleren. Deze methode maakt studies vereist kennis van de soorten hemocytes en hun overvloed.

Een protocol voor het verzamelen en Kleuring Hemocytes uit de Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

Protocol for Production of a Genetic Cross of the Rodent Malaria Parasites

Protocol voor de productie van een genetische Kruis van het knaagdieren malariaparasieten

Variation in response to antimalarial drugs and in pathogenicity of malaria parasites is of biologic and medical importance. Linkage mapping has led to ...

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito (Aedes aegypti) and Tick (Rhipicephalus microplus) G Protein-coupled Receptors

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito Aedes aegypti and Tick Rhipicephalus microplus G Protein-coupled Receptors

Een Calcium Bioluminescentie Assay voor functionele analyse van Mosquito ( Aedes aegypti) En Tick ( Rhipicephalus MicroPlus) G eiwit-gekoppelde receptoren

Arthropod hormone receptors are potential targets for novel pesticides as they regulate many essential physiological and behavioral processes.  The ...

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

Een eenvoudige Chelex protocol voor DNA-extractie van<em&gt; Anopheles</em&gt; Spp.

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

Utilization of Capsules for Negative Staining of Viral Samples within Biocontainment

Gebruik van capsules voor negatief vlekken van virale monsters in biocontainment

Transmission electron microscopy (TEM) is used to observe the ultrastructure of viruses and other microbial pathogens with nanometer resolution. Most ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Winning van Hemocytes van Drosophila melanogaster larven voor microbiële infectie en analyse

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Co-staining Blood Vessels and Nerve Fibers in Adipose Tissue

Co kleuring bloedvaten en zenuwvezels in adipeus weefsel

Recent studies have highlighted the critical role of angiogenesis and sympathetic innervation in adipose tissue remodeling during the development of ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

In Vitro ELISA-test om de potentie van rabiësvaccin te evalueren

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Vectorcompetentieanalyses op Aedes aegypti-muggen met behulp van het Zika-virus

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine ...

Propagation of the Microsporidian Parasite Edhazardia aedis in Aedes aegypti Mosquitoes

Propagation of the Microsporidian Parasite Edhazardia aedis in Aedes aegypti Mosquitoes

Voortplanting van de Microsporidische Parasiet Edhazardia aedis in Aedes aegypti Muggen

Edhazardia aedis is a microsporidian parasite of Aedes aegypti mosquitoes, a disease vector that transmits multiple arboviruses which cause millions of ...

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

Het voeden en kwantificeren van dierlijk bloed en kunstmatige maaltijden in Aedes aegypti-muggen

Females of certain mosquito species can spread diseases while biting vertebrate hosts to obtain protein-rich blood meals required for egg development. In ...