Name: a protocol for collecting and staining hemocytes from the yellow fever mosquito aedes aegypti
Uploaded: 2011-05-16T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti at JoVE.com

Autori desiderano ringraziare Frey John e Ben Peterson per l&#39;allevamento di zanzare. Ringraziamo anche Christine Davis e Gary Radice per un aiuto con micrografie hemocyte. Questa ricerca è stata finanziata dalla University of Richmond Arte e Scienza di borsa di studio estiva AA Qayum e docenti concedere ad A. Telang.

1. Preparazione in anticipo della raccolta hemocyte <ol><li> Preparare una soluzione diluente emolinfa che consiste di 60% di media Schneider, 10% di siero fetale bovino (FBS) e tampone citrato 30% (anticoagulante; 98 mM NaOH, 186 mM NaCl, 1,7 mM EDTA, 41 ml Acido citrico, pH 4,5) 11. Fai aliquote 1,0 ml che possono essere conservati a -20 ° C. Utilizzare ciascuna aliquota solo una volta (vedi Materiali). </li><li> Preparare vetrini da microscopio in vetro (75 x 25 x 1 mm) segnando un 1 cm di diametro cerc...

<ol>
	<li>Enayati, A., Hemingway, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+management:+past,+present,+and+future.">Malaria management: past, present, and future.</a> Annu. Rev. Entomol. 55, 569-569 (2010).</li><li>Medlock, J., Luz, P. M., Struchiner, C. J., Galvani, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+transgenic+mosquitoes+on+dengue+virulence+to+humans+and+mosquitoes.">The impact of transgenic mosquitoes on dengue virulence to humans and mosquitoes.</a> The American Naturalist. 174, 565-565 (2009).</li><li>Baton, L. A., Garver, L., Xi, Z., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomics+studies+on+the+innate+immunity+of+disease+vectors.">Functional genomics studies on the innate immunity of disease vectors.</a> Insect Sci. 15, 15-15 (2008).</li><li>Thomas, R. E., Wu, W. K., Verleye, D., Rai, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midgut+basal+lamina+thickness+and+dengue-1+virus+dissemination+rates+in+laboratory+strains+of+Aedes+albopictus+(Diptera:+Culicidae).">Midgut basal lamina thickness and dengue-1 virus dissemination rates in laboratory strains of Aedes albopictus (Diptera: Culicidae).</a> J. Med. Entomol. 30, 326-326 (1993).</li><li>Bartholomay, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+infection+responses+in+the+haemocytes+of+the+mosquito,+Aedes+aegypti.">Profiling infection responses in the haemocytes of the mosquito, Aedes aegypti.</a> Insect Mol. Biol. 16, 761-761 (2007).</li><li>Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+cellular+immune+response.">The insect cellular immune response.</a> Insect Sci. 15, 1-1 (2008).</li><li>Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+mortality+in+immune+challenged+mosquitoes+(Aedes+aegypti)+correlates+with+a+decrease+in+haemocyte+numbers.">Age-associated mortality in immune challenged mosquitoes (Aedes aegypti) correlates with a decrease in haemocyte numbers.</a> Cell. Microbiol. 7, 39-39 (2005).</li><li>Chen, C. C., Laurence, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+study+on+humoral+encapsulation+of+microfilariae:+establishment+of+technique+and+description+of+reaction.">In vitro study on humoral encapsulation of microfilariae: establishment of technique and description of reaction.</a> International Journal for Parasitology. 17, 781-781 (1987).</li><li>Beerntsen, B. T., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dirofilaria+immitis:+effects+on+hemolymph+polypeptide+synthesis+in+Aedes+aegypti+during+melanotic+encapsulation+reactions+against+Microfilariae.">Dirofilaria immitis: effects on hemolymph polypeptide synthesis in Aedes aegypti during melanotic encapsulation reactions against Microfilariae.</a> Exp. Parasitol. 71, 406-406 (1990).</li><li>Hillyer, J. F., Schmidt, S. L., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibacterial+innate+immune+response+by+the+mosquito+Aedes+aegypti+is+mediated+by+hemocytes+and+independent+of+Gram+type+and+pathogenicity.">The antibacterial innate immune response by the mosquito Aedes aegypti is mediated by hemocytes and independent of Gram type and pathogenicity.</a> Microb. Infect. 6, 448-448 (2004).</li><li>Castillo, J. C., Robertson, A. E., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+from+the+mosquitoes+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Characterization of hemocytes from the mosquitoes Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 36, 891-891 (2006).</li></ol>

Il metodo di raccolta hemocyte qui descritto è stato modificato dai metodi precedentemente pubblicato e permette di isolare i preparativi pulita di ematociti concentrati da zanzare Aedes con meno passaggi. Mentre il nostro particolare interesse risiede nel caratterizzare popolazioni hemocyte in zanzare Aedes, crediamo che questa tecnica può essere applicata a gruppi di altre zanzare, dopo gli studi iniziali condotti per determinare il volume d&#39;iniezione appropriate. Il nostro protocollo utilizza ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome del reagente </th><th> Azienda </th><th> Numero di catalogo </th><th> Commenti (opzionale) </th></tr><tr><td> Media Schneider </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S0146 </td><td></td></tr><tr><td> Siero fetale bovino </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F0643 </td><td></td></tr><tr><td> Hema3 kit macchia </td><td> Pescatore </td><td> 123-869 </td><td></td></tr><tr><td> Vetro aghi (Borosilicato con filamento) </td><td> Sutter strumento </td><td> BF100-78-10 </td><td> 1,0 millimetri OD e 0,78 millimetri ID </td></tr><tr><td> Ago estrattore </td><td> Sutter Instruments </td><td> Modello P-87 </td><td></td></tr><tr><td> MicroInjector </td><td> Tritech di ricerca </td><td> Minj-PD </td><td></td></tr><tr><td> Porta aghi </td><td> Tritech di ricerca </td><td> Minj-4 </td><td></td></tr></tbody></table>

a protocol for collecting and staining hemocytes from the yellow fever mosquito aedes aegypti

Le zanzare sono vettori di una serie di agenti patogeni che causano malattie come il virus della febbre gialla, malaria, parassiti e vermi filarial. Laboratori stanno studiando anti-patogeno componenti del sistema immunitario innato nella specie dei vettori di malattie, nella speranza di generare zanzare transgeniche che sono refrattari agli agenti patogeni quali 1, 2. Il sistema immunitario innato di zanzare è composto da diverse linee di difesa 3. Agenti patogeni che riescono a sfuggire alla barriera imposta dalla epitelio-allineata zanzara midgut 4 Inserire il emolinfa e di incontro ematociti concentrati in circolazione, importanti componenti cellulari che incapsulano e patogeni fagocitare 5, 6. I ricercatori non hanno trovato prove per i tessuti emopoietici in zanzare e fatti suggeriscono che il numero di ematociti concentrati è fissato a emergere per adulti e numeri può effettivamente diminuire con l&#39;invecchiamento della zanzara 7. La capacità di raccogliere correttamente e identificare ematociti concentrati dagli insetti medicalmente importante è un passo essenziale per gli studi di immunità cellulare. Tuttavia, la dimensione piccola delle zanzare e il volume limitato di emolinfa rappresentano una sfida a raccogliere le cellule immunitarie. Due metodi per la raccolta di ematociti concentrati zanzara comprendono espulsione di emolinfa da un taglio proboscide 8, e lo spostamento del volume (perfusione), in cui viene iniettato soluzione salina nella regione membranosa necklike tra la testa e torace (cioè, cervice) e la perfusione emolinfa viene raccolta da un&#39;apertura strappato in una regione distale dell&#39;addome 9, 10. Queste tecniche, tuttavia, sono limitate da basso recupero di ematociti concentrati e di possibile contaminazione da parte delle cellule di grasso corporeo, rispettivamente 11. Più recentemente un metodo denominato di iniezione ad alta / recupero di un migliore recupero immunocytes mediante l&#39;uso di tamponi anticoagulanti, riducendo i livelli di contaminanti scale e tessuti interni 11. Anche se questo metodo permette un metodo migliorato di raccolta e di conservazione ematociti concentrati per la cultura primaria, che comporta un certo numero di iniezione e fasi di raccolta che non sono necessari se l&#39;obiettivo a valle è quello di raccogliere, fissare e macchia ematociti concentrati per la diagnostica. Qui, dimostriamo il nostro metodo di raccolta emolinfa zanzara che unisce la semplicità di perfusione, utilizzando tamponi anticoagulante al posto della soluzione fisiologica, con la precisione delle tecniche di iniezione ad alta isolare i preparativi pulita di ematociti concentrati in Aedes zanzare.

Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti at JoVE.com

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

Un semplice ma accurato metodo per raccogliere e macchia ematociti concentrati zanzara è descritto. Il nostro metodo combina la semplicità di perfusione con la precisione delle tecniche di iniezione ad alta isolare i preparativi pulita di ematociti concentrati in Aedes zanzare. Questo metodo facilita la conoscenza di studi che richiedono i tipi di ematociti concentrati e la loro abbondanza.

Un protocollo per la raccolta e la colorazione ematociti concentrati dal Mosquito febbre gialla Aedes aegypti</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

Protocol for Production of a Genetic Cross of the Rodent Malaria Parasites

Protocollo per la produzione di un incrocio fra i roditori parassiti della malaria

Variation in response to antimalarial drugs and in pathogenicity of malaria parasites is of biologic and medical importance. Linkage mapping has led to ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito (Aedes aegypti) and Tick (Rhipicephalus microplus) G Protein-coupled Receptors

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito Aedes aegypti and Tick Rhipicephalus microplus G Protein-coupled Receptors

Un saggio di calcio bioluminescenza di analisi funzionale del Mosquito ( Aedes aegypti) E Tick ( Rhipicephalus Microplus) G recettori accoppiati alla proteina

Arthropod hormone receptors are potential targets for novel pesticides as they regulate many essential physiological and behavioral processes.  The ...

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

Un protocollo Chelex semplice per l&#39;estrazione del DNA da<em&gt; Anopheles</em&gt; Spp.

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

Utilization of Capsules for Negative Staining of Viral Samples within Biocontainment

Utilizzazione di capsule per la colorazione negativa di campioni virali all&#39;interno del Biocontainment

Transmission electron microscopy (TEM) is used to observe the ultrastructure of viruses and other microbial pathogens with nanometer resolution. Most ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Estrazione di emociti da larve di Drosophila melanogaster per infezione microbica e l'analisi

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Co-staining Blood Vessels and Nerve Fibers in Adipose Tissue

Co-macchiatura dei vasi sanguigni e fibre nervose nel tessuto adiposo

Recent studies have highlighted the critical role of angiogenesis and sympathetic innervation in adipose tissue remodeling during the development of ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

Test ELISA in vitro per valutare la potenza del vaccino contro la rabbia

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Analisi di competenza vettoriale sulle zanzare Aedes aegypti utilizzando il virus Zika

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine ...

Propagation of the Microsporidian Parasite Edhazardia aedis in Aedes aegypti Mosquitoes

Propagation of the Microsporidian Parasite Edhazardia aedis in Aedes aegypti Mosquitoes

Propagazione del parassita microsporidiano Edhazardia aedis nelle zanzare Aedes aegypti

Edhazardia aedis is a microsporidian parasite of Aedes aegypti mosquitoes, a disease vector that transmits multiple arboviruses which cause millions of ...

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

Alimentazione e quantificazione del sangue di origine animale e dei pasti artificiali nelle zanzare Aedes aegypti

Females of certain mosquito species can spread diseases while biting vertebrate hosts to obtain protein-rich blood meals required for egg development. In ...