Name: a protocol for collecting and staining hemocytes from the yellow fever mosquito aedes aegypti
Uploaded: 2011-05-16T12:00:00
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著者は、蚊飼育用ジョンフレイとベンピーターソンに感謝します。我々はまた、血球の顕微鏡写真のヘルプはクリスティンデイビスとゲイリーRadiceに感謝。この研究は、A.テーラングにAA Qayumと教員の助成金にリッチモンドアーツ＆サイエンスサマーフェローシップ大学によって資金を供給された。

1。血球コレクションの事前準備<ol><li> （は98 mMのNaOHを、186 mMのNaCl、1.7 mMのEDTA、41 mMクエン酸、pH4.5の抗凝固剤）60％シュナイダーの培地、10％ウシ胎児血清（FBS）、および30％クエン酸緩衝液で構成される体液の希釈溶液を調製11。 -20℃で保存することができます1.0mLのアリコートを作る（資料を参照してください）​​一度だけ各アリコートを使用してください。 </li><li>ガラスエ?...

<ol>
	<li>Enayati, A., Hemingway, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+management:+past,+present,+and+future.">Malaria management: past, present, and future.</a> Annu. Rev. Entomol. 55, 569-569 (2010).</li><li>Medlock, J., Luz, P. M., Struchiner, C. J., Galvani, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+transgenic+mosquitoes+on+dengue+virulence+to+humans+and+mosquitoes.">The impact of transgenic mosquitoes on dengue virulence to humans and mosquitoes.</a> The American Naturalist. 174, 565-565 (2009).</li><li>Baton, L. A., Garver, L., Xi, Z., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomics+studies+on+the+innate+immunity+of+disease+vectors.">Functional genomics studies on the innate immunity of disease vectors.</a> Insect Sci. 15, 15-15 (2008).</li><li>Thomas, R. E., Wu, W. K., Verleye, D., Rai, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midgut+basal+lamina+thickness+and+dengue-1+virus+dissemination+rates+in+laboratory+strains+of+Aedes+albopictus+(Diptera:+Culicidae).">Midgut basal lamina thickness and dengue-1 virus dissemination rates in laboratory strains of Aedes albopictus (Diptera: Culicidae).</a> J. Med. Entomol. 30, 326-326 (1993).</li><li>Bartholomay, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+infection+responses+in+the+haemocytes+of+the+mosquito,+Aedes+aegypti.">Profiling infection responses in the haemocytes of the mosquito, Aedes aegypti.</a> Insect Mol. Biol. 16, 761-761 (2007).</li><li>Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+cellular+immune+response.">The insect cellular immune response.</a> Insect Sci. 15, 1-1 (2008).</li><li>Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+mortality+in+immune+challenged+mosquitoes+(Aedes+aegypti)+correlates+with+a+decrease+in+haemocyte+numbers.">Age-associated mortality in immune challenged mosquitoes (Aedes aegypti) correlates with a decrease in haemocyte numbers.</a> Cell. Microbiol. 7, 39-39 (2005).</li><li>Chen, C. C., Laurence, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+study+on+humoral+encapsulation+of+microfilariae:+establishment+of+technique+and+description+of+reaction.">In vitro study on humoral encapsulation of microfilariae: establishment of technique and description of reaction.</a> International Journal for Parasitology. 17, 781-781 (1987).</li><li>Beerntsen, B. T., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dirofilaria+immitis:+effects+on+hemolymph+polypeptide+synthesis+in+Aedes+aegypti+during+melanotic+encapsulation+reactions+against+Microfilariae.">Dirofilaria immitis: effects on hemolymph polypeptide synthesis in Aedes aegypti during melanotic encapsulation reactions against Microfilariae.</a> Exp. Parasitol. 71, 406-406 (1990).</li><li>Hillyer, J. F., Schmidt, S. L., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibacterial+innate+immune+response+by+the+mosquito+Aedes+aegypti+is+mediated+by+hemocytes+and+independent+of+Gram+type+and+pathogenicity.">The antibacterial innate immune response by the mosquito Aedes aegypti is mediated by hemocytes and independent of Gram type and pathogenicity.</a> Microb. Infect. 6, 448-448 (2004).</li><li>Castillo, J. C., Robertson, A. E., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+from+the+mosquitoes+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Characterization of hemocytes from the mosquitoes Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 36, 891-891 (2006).</li></ol>

血球収集方法は、以前に発行されたメソッドから変更と1つのより少ない手順でヒトスジシマカ蚊から血球のクリーンな準備を分離することができますされ、ここで説明。私たちの特定の関心は、 ヒトスジシマカ蚊の血球集団を特徴付けるにある一方で、我々は最初の試験が適切な注入量を決定するために実施された後、この手法は他の蚊のグループに適用できると考えていま?...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td>シュナイダーのミディアム</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> S0146 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> F0643 </td><td></td></tr><tr><td> Hema3染色キット</td><td>フィッシャー</td><td> 123から869 </td><td></td></tr><tr><td>ガラス針 （フィラメントとホウケイ酸塩） </td><td>サターのインストゥルメント</td><td> BF100 - 78から10 </td><td> 1.0ミリメートルOD 0.78ミリメートルとID </td></tr><tr><td>ニードルプラー</td><td>サターインスツルメンツ</td><td>モデルP - 87 </td><td></td></tr><tr><td>微量注入器</td><td> Tritech研究</td><td> MINJ - PD </td><td></td></tr><tr><td>針のホルダー</td><td> Tritech研究</td><td> MINJ - 4 </td><td></td></tr></tbody></table>

a protocol for collecting and staining hemocytes from the yellow fever mosquito aedes aegypti

蚊は、黄熱病ウイルス、マラリア原虫やフィラリアワームなどの病気を引き起こす病原体の数のベクトルです。研究所は、そのような病原体1,2に抵抗性遺伝子組換え蚊を発生させることを望んで病気のベクトルの種の自然免疫系の抗病原体成分を調査している。蚊の自然免疫系は防御3の複数の行で構成されています。上皮で裏打ちされた蚊中腸4で課された障壁を逃れるために管理する病原体は血リンパを入力し、循環血球、カプセル化する重要な細胞成分と巻き込むの病原体5,6が発生する 。研究者は、蚊に造血組織のための証拠を発見していないと、現在の証拠は、血球の数が羽化に固定され、数字が実際に蚊の7歳と低下する場合があることを示唆している。適切に収集し、医学的に重要な昆虫から血球を識別する能力は、細胞性免疫の研究に不可欠なステップです。しかし、蚊と血リンパの限られた容積の小さいサイズは、免疫細胞を収集するために挑戦をもたらす。 蚊血球を収集するための2つの確立された方法は、頭部と胸部の間に膜necklike領域（すなわち、子宮頸部）に注入され、灌流血リンパが収集される生理食塩水でカット口先8、およびボリュームの変位（灌流）、からの血リンパの除名を含む腹部9、10の遠位領域内の引き裂かれた開口部から。これらの技術は、しかし、それぞれ11、血球の低い回収と脂肪体細胞による汚染の可能性によって制限されている。スケールと内部の組織11を汚染のレベルを低減しつつ、より多くの最近の方法は、抗凝固剤のバッファを使用することによって免疫細胞の高い注入/回収の改善回復と呼びます。その方式で初代培養のための血球を収集し、維持する改良法を可能にする一方で、それは注射の数を伴いますし、下流の目標は、収集、修正および診断のための血球を染色する場合に必要ではないステップを収集。ここでは、 ネッタイシマカ蚊の血球のクリーンな準備を分離するために、高いインジェクション技術の精度で、生理食塩水の代わりに抗凝固剤のバッファを使用して、血流のシンプルさを組み合わせた蚊の血リンパの収集の私達の方法を示しています。

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A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

記述されている蚊の血球細胞を収集して染色する、まだ正確な方法を簡素化。私たちの方法は、ヒトスジシマカ蚊の血球のクリーンな準備を分離するために、高いインジェクション技術の精度で灌流のシンプルさを兼ね備えています。このメソッドは、血球とその豊かさの種類の知識を必要とする研究を促進する。

黄熱病の蚊から血球を収集し、染色のためのプロトコルネッタイシマカ</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

Protocol for Production of a Genetic Cross of the Rodent Malaria Parasites

げっ歯類のマラリア原虫の遺伝的交雑の生産のためのプロトコル

Variation in response to antimalarial drugs and in pathogenicity of malaria parasites is of biologic and medical importance. Linkage mapping has led to ...

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito (Aedes aegypti) and Tick (Rhipicephalus microplus) G Protein-coupled Receptors

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蚊の機能解析のためのカルシウムの生物発光アッセイ（ネッタイシマカ）とダニ（ Rhipicephalus microplus）Gタンパク質共役受容体

Arthropod hormone receptors are potential targets for novel pesticides as they regulate many essential physiological and behavioral processes.  The ...

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

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からのDNA抽出のためのシンプルなChelexプロトコル<em&gt;ハマダラカ</em&gt;属。

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

Utilization of Capsules for Negative Staining of Viral Samples within Biocontainment

Biocontainmentにおけるウイルスサンプルの陰性染色のためのカプセルの利用

Transmission electron microscopy (TEM) is used to observe the ultrastructure of viruses and other microbial pathogens with nanometer resolution. Most ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

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細菌感染や解析のためのキイロショウジョウバエ幼虫血球の抽出

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Co-staining Blood Vessels and Nerve Fibers in Adipose Tissue

共同血管や脂肪組織における神経線維を染色

Recent studies have highlighted the critical role of angiogenesis and sympathetic innervation in adipose tissue remodeling during the development of ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

狂犬病ワクチンの効力を評価するインビトロELISA試験

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

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ジカウイルスを用いた Aedes aegypti蚊の ベクターコンピテンス分析

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine ...

Propagation of the Microsporidian Parasite Edhazardia aedis in Aedes aegypti Mosquitoes

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アエデスアエジプティ蚊における微小胞体寄生虫・エダリア・アダイスの伝播

Edhazardia aedis is a microsporidian parasite of Aedes aegypti mosquitoes, a disease vector that transmits multiple arboviruses which cause millions of ...

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

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アエデスアエジプティ蚊の動物由来血液と人工食事の摂食と定量化

Females of certain mosquito species can spread diseases while biting vertebrate hosts to obtain protein-rich blood meals required for egg development. In ...