Name: a protocol for collecting and staining hemocytes from the yellow fever mosquito aedes aegypti
Uploaded: 2011-05-16T12:00:00
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저자는 모기가 양육을 위해 존 프라이와 벤 피터슨 감사하고 싶습니다. 우리는 또한 hemocyte micrographs와 관련하여 도움이 크리스틴 데이비스와 게리 Radice 감사드립니다. 이 연구는 리치몬드 예술 &amp; AA Qayum와 A. Telang에 교수 부여하는 과학 여름 교제 대학에 의해 투자되었다.

1. hemocyte 컬렉션 사전에 준비 <ol><li> (; 98 MM NaOH, 186 MM NaCl, 1.7 MM EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산), 41 MM 구연산 산성, pH를 4.5 항응고제) 60% 슈나이더의 중간 10 % 태아 소 혈청 (FBS) 및 30 % 구연 산염 버퍼의 구성된 hemolymph의 희석제 솔루션을 준비 11. -20 ° C.에 저장할 수 있습니다 1.0 ML aliquots 만들기 (자료 참조) 한 번만 각 나누어지는을 사용합니다. </li><li> 유리 에칭 도구를 사용하여 한쪽...

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	<li>Enayati, A., Hemingway, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+management:+past,+present,+and+future.">Malaria management: past, present, and future.</a> Annu. Rev. Entomol. 55, 569-569 (2010).</li><li>Medlock, J., Luz, P. M., Struchiner, C. J., Galvani, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+transgenic+mosquitoes+on+dengue+virulence+to+humans+and+mosquitoes.">The impact of transgenic mosquitoes on dengue virulence to humans and mosquitoes.</a> The American Naturalist. 174, 565-565 (2009).</li><li>Baton, L. A., Garver, L., Xi, Z., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomics+studies+on+the+innate+immunity+of+disease+vectors.">Functional genomics studies on the innate immunity of disease vectors.</a> Insect Sci. 15, 15-15 (2008).</li><li>Thomas, R. E., Wu, W. K., Verleye, D., Rai, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midgut+basal+lamina+thickness+and+dengue-1+virus+dissemination+rates+in+laboratory+strains+of+Aedes+albopictus+(Diptera:+Culicidae).">Midgut basal lamina thickness and dengue-1 virus dissemination rates in laboratory strains of Aedes albopictus (Diptera: Culicidae).</a> J. Med. Entomol. 30, 326-326 (1993).</li><li>Bartholomay, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+infection+responses+in+the+haemocytes+of+the+mosquito,+Aedes+aegypti.">Profiling infection responses in the haemocytes of the mosquito, Aedes aegypti.</a> Insect Mol. Biol. 16, 761-761 (2007).</li><li>Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+cellular+immune+response.">The insect cellular immune response.</a> Insect Sci. 15, 1-1 (2008).</li><li>Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+mortality+in+immune+challenged+mosquitoes+(Aedes+aegypti)+correlates+with+a+decrease+in+haemocyte+numbers.">Age-associated mortality in immune challenged mosquitoes (Aedes aegypti) correlates with a decrease in haemocyte numbers.</a> Cell. Microbiol. 7, 39-39 (2005).</li><li>Chen, C. C., Laurence, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+study+on+humoral+encapsulation+of+microfilariae:+establishment+of+technique+and+description+of+reaction.">In vitro study on humoral encapsulation of microfilariae: establishment of technique and description of reaction.</a> International Journal for Parasitology. 17, 781-781 (1987).</li><li>Beerntsen, B. T., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dirofilaria+immitis:+effects+on+hemolymph+polypeptide+synthesis+in+Aedes+aegypti+during+melanotic+encapsulation+reactions+against+Microfilariae.">Dirofilaria immitis: effects on hemolymph polypeptide synthesis in Aedes aegypti during melanotic encapsulation reactions against Microfilariae.</a> Exp. Parasitol. 71, 406-406 (1990).</li><li>Hillyer, J. F., Schmidt, S. L., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibacterial+innate+immune+response+by+the+mosquito+Aedes+aegypti+is+mediated+by+hemocytes+and+independent+of+Gram+type+and+pathogenicity.">The antibacterial innate immune response by the mosquito Aedes aegypti is mediated by hemocytes and independent of Gram type and pathogenicity.</a> Microb. Infect. 6, 448-448 (2004).</li><li>Castillo, J. C., Robertson, A. E., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+from+the+mosquitoes+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Characterization of hemocytes from the mosquitoes Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 36, 891-891 (2006).</li></ol>

hemocyte 수집 방법은 이전에 게시 방법에서 수정 한 적은 수의 단계를 Aedes 모기에서 hemocytes의 깨끗한 준비를 분리 수있다 여기에서 설명한. 우리의 특별한 관심 Aedes 모기에 hemocyte 인구 특성화에 자리잡고 있지만, 우리는 초기 실험이 적절한 사출 볼륨을 결정하기 위해 실시 후이 기법은 다른 모기 그룹에 적용할 수 믿습니다. 우리 프로토콜은 생리 식염수 대신 항응고제 버퍼를 사용?...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> 슈나이더의 중간 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S0146 </td><td></td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> F0643 </td><td></td></tr><tr><td> Hema3 얼룩 키트 </td><td> 어부 </td><td> 123-869 </td><td></td></tr><tr><td> 유리 바늘 (필라멘트와 borosilicate) </td><td> 서터 악기 </td><td> BF100 - 78-10 </td><td> 1.0mm OD 및 0.78mm ID </td></tr><tr><td> 니들 풀러 </td><td> 서터 인 스트 루먼트 </td><td> 모델 P - 87 </td><td></td></tr><tr><td> MicroInjector </td><td> Tritech 연구 </td><td> MINJ - PD </td><td></td></tr><tr><td> 니들 홀더 </td><td> Tritech 연구 </td><td> MINJ - 4 </td><td></td></tr></tbody></table>

a protocol for collecting and staining hemocytes from the yellow fever mosquito aedes aegypti

모기는 황열병 바이러스, 말라리아 기생충 및 filarial 웜과 같은 질병을 유발 병원균의 번호를 벡터입니다. 실험실은 병원균 1, 2 내화물 아르 유전자 변형 모기를 생성하는 희망에서 질병 벡터 수종에 본래 면역 시스템의 백신 병원체 구성 요소를 조사하고 있습니다. 모기의 타고난 면역 시스템은 방어 3 몇 가지 라인으로 구성되어 있습니다. 상피 - 줄지어 모기 midgut 사에 의해 부과된 장벽을 탈출하기 위해 관리 병원균은 hemolymph를 입력 순환 hemocytes, 캡슐 중요한 세포 구성 요소와 삼켜의 병원균 5, 6을 발생합니다. 연구팀은 모기의 조혈 조직에 대한 증거를 발견하지 않은 현재의 증거는 hemocytes의 숫자가 성인 출현에 고정하고 숫자가 실제로 모기 세 7로 거부할 수있는 제안합니다. 제대로 수집하고 의료 중요한 곤충의 hemocytes를 식별하는 능력은 세포 면역의 연구에 필수적인 단계입니다. 그러나, 모기의 작은 크기와 hemolymph의 제한된 볼륨 면역 세포를 수집하는 도전을 제기. 모기 hemocytes를 수집하기 위해 두 설립 방법은 상처 코 8 hemolymph의 추방, 그리고 호수가 머리와 흉부 (즉, 자궁 경부)와 perfused hemolymph가 수집되는 사이 막의 necklike 영역으로 주입되는 볼륨 변위 (재관류)를 포함 복부 9, 10의 말초 지역의 찢어진 오프닝에서. 이러한 기술은, 그러나, hemocytes의 낮은 복구 및 각각 11 지방 신체 세포에 의해 오염 가능성에 의해 제한됩니다. 오염 저울 및 내부 조직 11 레벨을 감소하면서 최근에는 방법이 항응고제 버퍼의 사용에 의해 immunocytes 높은 주입 / 복구 개선 복구이라고도합니다. 그 방법이 기본 문화 hemocytes를 수집 및 유지 관리의 개선 방법에 대한 수 있지만, 그것은 주사와 하류 목표가 진단에 대한 hemocytes를 수집, 수정하고 얼룩이있다면 필요하지 않습니다 수집 단계의 숫자를 알아볼 수 있습니다. 여기, 우리는 Aedes 모기에 hemocytes의 깨끗한 준비를 분리 높은 사출 기술의 정확성과 생리 식염수 대신에 항응고제 버퍼를 사용하여 재관류의 단순 결합 모기 hemolymph를 수집하는 우리의 방법을 보여줍니다.

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A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A는 설명 모기 hemocytes를 수집하고 얼룩 아직 정확한 방법을 단순화. 우리의 방법은 Aedes 모기에 hemocytes의 깨끗한 준비를 분리 높은 사출 기술의 정확성과 재관류의 단순 결합. 이 방법은 연구가 필요한 hemocytes의 유형에 대한 지식과 풍부한을 용이하게합니다.

옐로 피버 모스키토에서 Hemocytes를 수집 및 스테 이닝을위한 프로토콜 Aedes aegypti</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

Protocol for Production of a Genetic Cross of the Rodent Malaria Parasites

쥐 말라리아 기생충의 유전자 크로스의 생산을위한 프로토콜

Variation in response to antimalarial drugs and in pathogenicity of malaria parasites is of biologic and medical importance. Linkage mapping has led to ...

연구

면역학 및 감염병학

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito (Aedes aegypti) and Tick (Rhipicephalus microplus) G Protein-coupled Receptors

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito Aedes aegypti and Tick Rhipicephalus microplus G Protein-coupled Receptors

모기의 기능 분석을 위해 칼슘 Bioluminescence 분석 ( Aedes aegypti)와 틱 ( Rhipicephalus microplus) G 단백질 결합 수용체

Arthropod hormone receptors are potential targets for novel pesticides as they regulate many essential physiological and behavioral processes.  The ...

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

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에서 DNA 추출을위한 간단한 Chelex 프로토콜<em&gt; 아노펠레스</em&gt; 종.

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

Utilization of Capsules for Negative Staining of Viral Samples within Biocontainment

Biocontainment 내 바이러스 샘플의 음성 염색을위한 캡슐의 활용

Transmission electron microscopy (TEM) is used to observe the ultrastructure of viruses and other microbial pathogens with nanometer resolution. Most ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

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미생물 감염 및 분석에 대 한 초파리 melanogaster 애벌레에서 Hemocytes의 추출

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Co-staining Blood Vessels and Nerve Fibers in Adipose Tissue

혈관과 신경 섬유 지방 조직에서 공동 얼룩

Recent studies have highlighted the critical role of angiogenesis and sympathetic innervation in adipose tissue remodeling during the development of ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

광견병 백신 효능을 평가하기 위한 시험관 내 ELISA 테스트

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

지카 바이러스를 사용하여 Aedes aegypti 모기에 벡터 역량 분석

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine ...

Propagation of the Microsporidian Parasite Edhazardia aedis in Aedes aegypti Mosquitoes

Propagation of the Microsporidian Parasite Edhazardia aedis in Aedes aegypti Mosquitoes

Aedes aegypti 모기에서 현미경 포리디안 기생충 에드hazardia aedis의 전파

Edhazardia aedis is a microsporidian parasite of Aedes aegypti mosquitoes, a disease vector that transmits multiple arboviruses which cause millions of ...

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

Aedes aegypti 모기에서 동물 유래 혈액 및 인공 식사 먹이주기 및 정량화

Females of certain mosquito species can spread diseases while biting vertebrate hosts to obtain protein-rich blood meals required for egg development. In ...