Name: activation of apoptosis by cytoplasmic microinjection of cytochrome c
Uploaded: 2011-06-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة لمنح NS042197 MD. وأيد AJK من المنح وT32GM008719 F30NS068006.

1. إنتاج إبر Microinjection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإبر microinjection الجاهزة متوفرة تجاريا (على سبيل المثال. Femtotips من إيبندورف) ومفيدة إذا كان أحد لا يؤدي عدد كبير من microinjections. ومع ذلك ، بالنسبة لأولئك الذين يرغبون في اقامة علاقات طويلة الاجل لقدرات...

<ol>
	<li>Danial, N. N., Korsmeyer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death:+critical+control+points.">Cell death: critical control points.</a> Cell. 116, 205-219 (2004).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expanding+role+of+mitochondria+in+apoptosis.">The expanding role of mitochondria in apoptosis.</a> Genes Dev. 15, 2922-2933 (2001).</li><li>Hengartner, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biochemistry+of+apoptosis.">The biochemistry of apoptosis.</a> Nature. 407, 770-776 (2000).</li><li>Fuentes-Prior, P., Salvesen, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+protein+structures+that+shape+caspase+activity,+specificity,+activation+and+inhibition.">The protein structures that shape caspase activity, specificity, activation and inhibition.</a> Biochem. J. 384, 201-232 (2004).</li><li>Tait, S. W., Green, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+cell+death:+outer+membrane+permeabilization+and+beyond.">Mitochondria and cell death: outer membrane permeabilization and beyond.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 11, 621-632 (2010).</li><li>Brustugun, O. T., Fladmark, K. E., Doskeland, S. O., Orrenius, S., Zhivotovsky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induced+by+microinjection+of+cytochrome+c+is+caspase-dependent+and+is+inhibited+by+Bcl-2.">Apoptosis induced by microinjection of cytochrome c is caspase-dependent and is inhibited by Bcl-2.</a> Cell Death Differ. 5, 660-668 (1998).</li><li>Li, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+induction+of+apoptosis+by+microinjection+of+cytochrome+c.+Bcl-XL+has+activity+independent+of+cytochrome+c+release.">Cell-specific induction of apoptosis by microinjection of cytochrome c. Bcl-XL has activity independent of cytochrome c release.</a> J. Biol. Chem. 272, 30299-30305 (1997).</li><li>Deshmukh, M., Johnson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+a+novel+event+during+neuronal+death:+development+of+competence-to-die+in+response+to+cytoplasmic+cytochrome+c.">Evidence of a novel event during neuronal death: development of competence-to-die in response to cytoplasmic cytochrome c.</a> Neuron. 21, 695-705 (1998).</li><li>Vaughn, A. E., Deshmukh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+metabolism+inhibits+apoptosis+in+neurons+and+cancer+cells+by+redox+inactivation+of+cytochrome+c.">Glucose metabolism inhibits apoptosis in neurons and cancer cells by redox inactivation of cytochrome c.</a> Nat. Cell Biol. 10, 1477-1483 (2008).</li><li>Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+apoptosis+by+Bcl-2:+release+of+cytochrome+c+from+mitochondria+blocked.">Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome c from mitochondria blocked.</a> Science. 275, 1129-1132 (1997).</li><li>Gonzales, D. H., Neupert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis+of+mitochondrial+c-type+cytochromes.">Biogenesis of mitochondrial c-type cytochromes.</a> J Bioenerg Biomembr. 22, 753-768 (1990).</li><li>Ellerby, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+cell-free+system+of+neuronal+apoptosis+-+comparison+of+premitochondrial,+mitochondrial,+and+postmitochondrial+phases.">Establishment of a cell-free system of neuronal apoptosis - comparison of premitochondrial, mitochondrial, and postmitochondrial phases.</a> J. Neurosci. 17, 6165-6178 (1997).</li><li>Neame, S. J., Rubin, L. L., Philpott, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+cytochrome+c+activity+within+intact+neurons+inhibits+apoptosis.">Blocking cytochrome c activity within intact neurons inhibits apoptosis.</a> J. Cell Biol. 142, 1583-1593 (1998).</li><li>Potts, P. R., Singh, S., Knezek, M., Thompson, C. B., Deshmukh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+function+of+endogenous+XIAP+in+regulating+caspase+activation+during+sympathetic+neuronal+apoptosis.">Critical function of endogenous XIAP in regulating caspase activation during sympathetic neuronal apoptosis.</a> J. Cell Biol. 163, 789-799 (2003).</li><li>Estus, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+gene+expression+in+neurons+during+programmed+cell+death:+identification+of+c-jun+as+necessary+for+neuronal+apoptosis.">Altered gene expression in neurons during programmed cell death: identification of c-jun as necessary for neuronal apoptosis.</a> J. Cell Biol. 127, 1717-1727 (1994).</li></ol>

وmicroinjection من ج السيتوكروم مباشرة في سيتوبلازم الخلايا هي أداة فريدة وقوية والذي يسمح للدراسات من اللائحة بعد الميتوكوندريا من موت الخلايا المبرمج. الأهم من ذلك ، تسمح هذه التقنية لتفعيل المصب مباشرة لموت الخلايا المبرمج من الميتوكوندريا من دون استخدام العوامل ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> DM IRE2 مجهر مقلوب </td><td> لايكا </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PC - 10 إبرة Microinjection بولير </td><td> Narishige </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MWO - 202 Micromanipulator </td><td> Narishige </td><td></td><td></td></tr><tr><td> FemtoJet Microinjector </td><td> إيبندورف </td><td></td><td></td></tr><tr><td> رقيقة الجدار Boroscilicate زجاج شعرية مع Microfilament </td><td> نظم AM </td><td> 615000 </td><td> 4 طول بوصة ، 1.00 القطر الخارجي ملم ، 0.75 ملم القطر الداخلي </td></tr><tr><td> B - رودامين ثيوسيانات ديكستران </td><td> سيغما الدريخ </td><td> R9379 </td><td> الوزن الجزيئي المتوسط ​​~ دا 70000 </td></tr><tr><td> البقري بروتين السيتوكروم ج </td><td> سيغما الدريخ </td><td> C3131 </td><td></td></tr></tbody></table>

activation of apoptosis by cytoplasmic microinjection of cytochrome c

موت الخلايا المبرمج ، أو موت الخلية المبرمج ، هو مسار الحفظ ودرجة عالية من التنظيم من قبل الخلايا التي تموت 1. يمكن أن تسبب موت الخلايا المبرمج عندما تصادف خلايا طائفة واسعة من الضغوط السامة للخلايا. هذه الإهانات بدء شلالات الإشارات التي تسبب في نهاية المطاف اطلاق سراح ج السيتوكروم من مساحة intermembrane الميتوكوندريا إلى السيتوبلازم 2. إطلاق سراح ج السيتوكروم من الميتوكوندريا هي الحدث الرئيسي الذي يقوم بتشغيل التنشيط السريع للcaspases ، والبروتياز الرئيسية الخلوية التي تنفذ في نهاية المطاف موت الخلية 3-4. وينظم المسار من موت الخلايا المبرمج في نقاط المنبع والمصب للإفراج ج السيتوكروم من الميتوكوندريا 5. من أجل دراسة اللائحة بعد الميتوكوندريا تفعيل caspase ، تحولت العديد من المحققين إلى microinjection هيولي مباشرة holocytochrome ج (الهيم المرفقة) البروتين في الخلايا 6-9. عادة يكون موضعيا ج السيتوكروم إلى الميتوكوندريا حيث تعلق مجموعة الهيم هو ضروري لتمكينها من تنشيط الخلايا 10-11. لذلك ، لتنشيط caspases مباشرة ، فمن الضروري لحقن البروتين ج holocytochrome بدلا من [كدنا] ، وذلك لأن في حين أن التعبير عن السيتوكروم ج من يبني [كدنا] سيؤدي في استهداف الميتوكوندريا والتعلق الهيم ، وسيتم عزلها فإنه من caspases عصاري خلوي. وبالتالي ، فإن microinjection المباشر عصاري خلوي من الهيم المرفقة تنقية البروتين ج السيتوكروم هو أداة مفيدة لتقليد الميتوكوندريا الافراج ج السيتوكروم وموت الخلايا المبرمج من دون استخدام الشتائم السامة التي تسبب تلف الخلايا والميتوكوندريا. في هذه المقالة ، نحن تصف طريقة لmicroinjection ج السيتوكروم من البروتين في الخلايا ، وذلك باستخدام الخلايا الليفية الماوس الجنينية (MEFs) والخلايا العصبية المتعاطفة الابتدائية ، والأمثلة على ذلك. في حين يركز هذا البروتوكول على حقن ج السيتوكروم من أجل التحقيق في موت الخلايا المبرمج ، ويمكن أيضا التقنيات المعروضة هنا يمكن تكييفها بسهولة للmicroinjection من البروتينات الأخرى ذات الاهتمام.

Watch this Scientific Journal Video about Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c at JoVE.com

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

في هذا البروتوكول ، ونحن تصف microinjection مباشرة من هيولي السيتوكروم<em&gt; ج</em&gt; البروتين في الخلايا الليفية والخلايا العصبية المتعاطفة الابتدائي. هذه التقنية تتيح لإدخال السيتوكروم<em&gt; ج</em&gt; البروتين في الخلايا والسيتوبلازم يحاكي الافراج عن السيتوكروم<em&gt; ج</em&gt; من الميتوكوندريا ، والذي يحدث أثناء موت الخلايا المبرمج.

تفعيل موت الخلايا المبرمج من قبل Microinjection هيولي من السيتوكروم ج</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Research

JoVE Journal

Biology

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Interview: Glycolipid Antigen Presentation by CD1d and the Therapeutic Potential of NKT cell Activation

مقابلة : شحمي سكري تقديم المستضد بواسطة CD1d والعلاجية المحتملة لتنشيط الخلايا NKT

Natural Killer T cells (NKT) are critical determinants of the immune response to cancer, regulation of autioimmune disease, clearance of infectious ...

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

توليد مستقرة ايليجانس جيم المعدلة وراثيا عن طريق Microinjection

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Microinjection من البويضات المورق القيطم

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation

Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation

جيل المعدلة وراثيا C. ايليجانس عن طريق تحويل Biolistic

The number of laboratories using the free living nematode C. elegans is rapidly growing. The popularity of this biological model is attributed to a rapid ...

Analysis of mRNA Nuclear Export Kinetics in Mammalian Cells by Microinjection

تحليل حركية مرنا الصادرات النووية في خلايا الثدييات التي Microinjection

In eukaryotes, messenger RNA (mRNA) is transcribed in the nucleus and must be exported into the cytoplasm to access the translation machinery. Although ...

Analyzing the Function of Small GTPases by Microinjection of Plasmids into Polarized Epithelial Cells

تحليل وظيفة GTPases الصغيرة التي Microinjection من البلازميدات إلى الخلايا الظهارية المستقطب

Epithelial cells polarize their plasma membrane into biochemically and functionally distinct apical and basolateral domains where the apical domain faces ...

Visualization of Mitochondrial Respiratory Function using Cytochrome C Oxidase / Succinate Dehydrogenase (COX/SDH) Double-labeling Histochemistry

Visualization of Mitochondrial Respiratory Function using Cytochrome C Oxidase / Succinate Dehydrogenase COX/SDH Double-labeling Histochemistry

تصور وظيفة الجهاز التنفسي الميتوكوندريا باستخدام السيتوكروم C أوكسيديز / سكسينات نازعة (كوكس / SDH) مزدوجة وضع العلامات الكيمياء النسيجية

Mitochondrial DNA (mtDNA) defects are an important cause of disease and may underlie aging and aging-related alterations 1,2. The mitochondrial theory of ...

Synthesis of an In vivo MRI-detectable Apoptosis Probe

Synthesis of an In vivo MRI-detectable Apoptosis Probe

توليف لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; دقق في موت الخلايا المبرمج التصوير بالرنين المغناطيسي للكشف

Cellular apoptosis is a prominent feature of many diseases, and this programmed cell death typically occurs before clinical manifestations of disease are ...

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage (CoTrAC)

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage CoTrAC

واحدة جزيء التصوير من تنظيم الجينات<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; استخدام التنشيط بواسطة Cotranslational انشقاق (CoTrAC)

We describe a fluorescence microscopy method, Co-Translational Activation by Cleavage (CoTrAC) to image the production of protein molecules in live cells ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...