Name: activation of apoptosis by cytoplasmic microinjection of cytochrome c
Uploaded: 2011-06-29T13:00:00
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1. Microinjection सुइयों के उत्पादन <ol><li> पूर्व गढ़े microinjection सुइयों व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं (जैसे Eppendorf से Femtotips) और उपयोगी होते हैं अगर एक microinjections की एक बड़ी संख्या में प्रदर्शन नहीं कर रहा है . हालांकि, जो microinjecting के ल...

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	<li>Danial, N. N., Korsmeyer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death:+critical+control+points.">Cell death: critical control points.</a> Cell. 116, 205-219 (2004).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expanding+role+of+mitochondria+in+apoptosis.">The expanding role of mitochondria in apoptosis.</a> Genes Dev. 15, 2922-2933 (2001).</li><li>Hengartner, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biochemistry+of+apoptosis.">The biochemistry of apoptosis.</a> Nature. 407, 770-776 (2000).</li><li>Fuentes-Prior, P., Salvesen, G. 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O., Orrenius, S., Zhivotovsky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induced+by+microinjection+of+cytochrome+c+is+caspase-dependent+and+is+inhibited+by+Bcl-2.">Apoptosis induced by microinjection of cytochrome c is caspase-dependent and is inhibited by Bcl-2.</a> Cell Death Differ. 5, 660-668 (1998).</li><li>Li, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+induction+of+apoptosis+by+microinjection+of+cytochrome+c.+Bcl-XL+has+activity+independent+of+cytochrome+c+release.">Cell-specific induction of apoptosis by microinjection of cytochrome c. Bcl-XL has activity independent of cytochrome c release.</a> J. Biol. Chem. 272, 30299-30305 (1997).</li><li>Deshmukh, M., Johnson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+a+novel+event+during+neuronal+death:+development+of+competence-to-die+in+response+to+cytoplasmic+cytochrome+c.">Evidence of a novel event during neuronal death: development of competence-to-die in response to cytoplasmic cytochrome c.</a> Neuron. 21, 695-705 (1998).</li><li>Vaughn, A. E., Deshmukh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+metabolism+inhibits+apoptosis+in+neurons+and+cancer+cells+by+redox+inactivation+of+cytochrome+c.">Glucose metabolism inhibits apoptosis in neurons and cancer cells by redox inactivation of cytochrome c.</a> Nat. Cell Biol. 10, 1477-1483 (2008).</li><li>Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+apoptosis+by+Bcl-2:+release+of+cytochrome+c+from+mitochondria+blocked.">Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome c from mitochondria blocked.</a> Science. 275, 1129-1132 (1997).</li><li>Gonzales, D. H., Neupert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis+of+mitochondrial+c-type+cytochromes.">Biogenesis of mitochondrial c-type cytochromes.</a> J Bioenerg Biomembr. 22, 753-768 (1990).</li><li>Ellerby, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+cell-free+system+of+neuronal+apoptosis+-+comparison+of+premitochondrial,+mitochondrial,+and+postmitochondrial+phases.">Establishment of a cell-free system of neuronal apoptosis - comparison of premitochondrial, mitochondrial, and postmitochondrial phases.</a> J. Neurosci. 17, 6165-6178 (1997).</li><li>Neame, S. J., Rubin, L. L., Philpott, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+cytochrome+c+activity+within+intact+neurons+inhibits+apoptosis.">Blocking cytochrome c activity within intact neurons inhibits apoptosis.</a> J. Cell Biol. 142, 1583-1593 (1998).</li><li>Potts, P. R., Singh, S., Knezek, M., Thompson, C. B., Deshmukh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+function+of+endogenous+XIAP+in+regulating+caspase+activation+during+sympathetic+neuronal+apoptosis.">Critical function of endogenous XIAP in regulating caspase activation during sympathetic neuronal apoptosis.</a> J. Cell Biol. 163, 789-799 (2003).</li><li>Estus, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+gene+expression+in+neurons+during+programmed+cell+death:+identification+of+c-jun+as+necessary+for+neuronal+apoptosis.">Altered gene expression in neurons during programmed cell death: identification of c-jun as necessary for neuronal apoptosis.</a> J. Cell Biol. 127, 1717-1727 (1994).</li></ol>

कोशिकाओं के cytoplasm में सीधे साइटोक्रोम ग के microinjection एक अद्वितीय और शक्तिशाली उपकरण है जो apoptosis के बाद mitochondrial विनियमन के अध्ययन के लिए अनुमति देता है. महत्वपूर्ण बात, इस तकनीक mitochondria की apoptosis बहाव के एजेंटों जो से?...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियाँ </th></tr><tr><td> डीएम उल्टे माइक्रोस्कोप IRE2 </td><td> Leica </td><td></td><td></td></tr><tr><td> पीसी-10 Microinjection सुई डांड़ी </td><td> Narishige </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MWO-202 micromanipulator </td><td> Narishige </td><td></td><td></td></tr><tr><td> FemtoJet Microinjector </td><td> Eppendorf </td><td></td><td></td></tr><tr><td> पतली दीवार के साथ Microfilament Boroscilicate केशिका ग्लास </td><td> AM सिस्टम </td><td> 615000 </td><td> 4 इंच की लंबाई, 1.00 मिमी की बाहरी व्यास, 0.75 मिमी भीतरी व्यास </td></tr><tr><td> Rhodamine आइसोथियोसाइनेट Dextran बी </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> R9379 </td><td> औसत आणविक ~ ७०,००० दा वजन </td></tr><tr><td> गोजातीय साइटोक्रोम ग प्रोटीन </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> C3131 </td><td></td></tr></tbody></table>

activation of apoptosis by cytoplasmic microinjection of cytochrome c

Apoptosis, या क्रमादेशित कोशिका मृत्यु, एक संरक्षित और उच्च विनियमित मार्ग है जिसके द्वारा कोशिकाओं मर जाते हैं 1. Apoptosis जब कोशिकाओं साइटोटोक्सिक तनाव की एक विस्तृत श्रृंखला का सामना करने के लिए ट्रिगर किया जा सकता है. ये अपमान cascades संकेत है कि अंततः साइटोक्रोम ग के mitochondrial intermembrane अंतरिक्ष से 2 cytoplasm के लिए रिहाई के कारण आरंभ करें. mitochondria से साइटोक्रोम ग की रिहाई एक महत्वपूर्ण घटना है कि caspases, कुंजी सेलुलर proteases जो अंततः कोशिका मृत्यु 3-4 निष्पादित की तेजी सक्रियण चलाता है. apoptosis के मार्ग 5 mitochondria से साइटोक्रोम ग रिलीज के अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम बिंदुओं पर विनियमित है. आदेश में बाद mitochondrial कस्पासे सक्रियण के नियमन का अध्ययन करने के लिए, कई जांचकर्ताओं holocytochrome (heme संलग्न) 6-9 कोशिकाओं में प्रोटीन ग के प्रत्यक्ष cytoplasmic microinjection में बदल गया है. साइटोक्रोम ग सामान्य mitochondria जहां एक heme समूह के अनुलग्नक यह 10-11 apoptosis को सक्रिय करने के लिए सक्षम करने के लिए आवश्यक है के लिए स्थानीयकृत है. इसलिए, सीधे caspases को सक्रिय करने के लिए, यह आवश्यक है holocytochrome ग के बजाय अपने सीडीएनए प्रोटीन इंजेक्षन, क्योंकि जबकि सीडीएनए constructs से साइटोक्रोम ग की अभिव्यक्ति mitochondrial लक्ष्यीकरण और heme अनुलग्नक में परिणाम देगा, यह साइटोसोलिक caspases से तनहा हो जाएगा. इस प्रकार, शुद्ध heme संलग्न साइटोक्रोम ग प्रोटीन के प्रत्यक्ष साइटोसोलिक microinjection विषाक्त अपमान जो सेलुलर और mitochondrial क्षति के कारण के उपयोग के बिना mitochondrial साइटोक्रोम ग रिलीज और apoptosis की नकल के लिए एक उपयोगी उपकरण है. इस अनुच्छेद में, हम कोशिकाओं में साइटोक्रोम ग प्रोटीन की microinjection के लिए एक विधि का वर्णन, माउस भ्रूणीय (MEFs) fibroblasts और उदाहरण के रूप में प्राथमिक सहानुभूति न्यूरॉन्स का उपयोग. हालांकि यह प्रोटोकॉल apoptosis की जांच के लिए साइटोक्रोम ग के इंजेक्शन पर केंद्रित है, यहाँ दिखाया तकनीक भी ब्याज की अन्य प्रोटीन की microinjection के लिए आसानी से कर सकते हैं अनुकूलित किया जा.

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Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

इस प्रोटोकॉल में, हम साइटोक्रोम के प्रत्यक्ष cytoplasmic microinjection वर्णन<em&gt; ग</em&gt; Fibroblasts और प्राथमिक सहानुभूति न्यूरॉन्स में प्रोटीन. इस तकनीक साइटोक्रोम की शुरूआत के लिए अनुमति देता है<em&gt; ग</emकोशिकाओं और साइटोक्रोम के रिलीज mimics के cytoplasm में प्रोटीन&gt;<em&gt; ग</emMitochondria से, जो apoptosis के दौरान होता है.

Apoptosis साइटोक्रोम के cytoplasmic Microinjection द्वारा सक्रियकरण ग</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Research

JoVE Journal

Biology

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Interview: Glycolipid Antigen Presentation by CD1d and the Therapeutic Potential of NKT cell Activation

CD1d द्वारा Glycolipid एंटीजन प्रस्तुति और NKT सेल सक्रियण के संभावित चिकित्सीय: साक्षात्कार

Natural Killer T cells (NKT) are critical determinants of the immune response to cancer, regulation of autioimmune disease, clearance of infectious ...

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Synthesis of an In vivo MRI-detectable Apoptosis Probe

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एक के संश्लेषण<em&gt; Vivo में</em&gt; Apoptosis एमआरआई detectable जांच

Cellular apoptosis is a prominent feature of many diseases, and this programmed cell death typically occurs before clinical manifestations of disease are ...

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage (CoTrAC)

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जीन विनियमन के एकल अणु इमेजिंग<em&gt; Vivo में</em&gt; विखंडन द्वारा Cotranslational सक्रियकरण (CoTrAC) का उपयोग

We describe a fluorescence microscopy method, Co-Translational Activation by Cleavage (CoTrAC) to image the production of protein molecules in live cells ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

सक्रिय कस्पासे 3 का पता लगाने के लिए पूरे माउंट immunofluorescence द्वारा zebrafish भ्रूण में apoptosis के विश्लेषण

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...