Name: activation of apoptosis by cytoplasmic microinjection of cytochrome c
Uploaded: 2011-06-29T13:00:00
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이 작품은 MD에 NIH 부여 NS042197에 의해 지원되었다. AJK는 보조금 T32GM008719와 F30NS068006 지원했다.

1. Microinjection 니들스 생산 <ol><li> 사전 조립 microinjection의 바늘은 상업적으로 사용할 수 있습니다 (예. Eppendorf에서 Femtotips)와 하나 microinjections 많은 수의를 수행하지 않은 경우 유용합니다. 그러나, microinjecting위한 장기적인 기능을 구축하고자하는 사람들을 위해, 대안은 얇은 벽 borosilicate 유리 모세관과 상업 바늘 풀러를 사용하여 실험실에서 microinjection의 바늘을 생산하는 것입니다. 이?...

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	<li>Danial, N. N., Korsmeyer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death:+critical+control+points.">Cell death: critical control points.</a> Cell. 116, 205-219 (2004).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expanding+role+of+mitochondria+in+apoptosis.">The expanding role of mitochondria in apoptosis.</a> Genes Dev. 15, 2922-2933 (2001).</li><li>Hengartner, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biochemistry+of+apoptosis.">The biochemistry of apoptosis.</a> Nature. 407, 770-776 (2000).</li><li>Fuentes-Prior, P., Salvesen, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+protein+structures+that+shape+caspase+activity,+specificity,+activation+and+inhibition.">The protein structures that shape caspase activity, specificity, activation and inhibition.</a> Biochem. J. 384, 201-232 (2004).</li><li>Tait, S. W., Green, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+cell+death:+outer+membrane+permeabilization+and+beyond.">Mitochondria and cell death: outer membrane permeabilization and beyond.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 11, 621-632 (2010).</li><li>Brustugun, O. T., Fladmark, K. E., Doskeland, S. O., Orrenius, S., Zhivotovsky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induced+by+microinjection+of+cytochrome+c+is+caspase-dependent+and+is+inhibited+by+Bcl-2.">Apoptosis induced by microinjection of cytochrome c is caspase-dependent and is inhibited by Bcl-2.</a> Cell Death Differ. 5, 660-668 (1998).</li><li>Li, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+induction+of+apoptosis+by+microinjection+of+cytochrome+c.+Bcl-XL+has+activity+independent+of+cytochrome+c+release.">Cell-specific induction of apoptosis by microinjection of cytochrome c. Bcl-XL has activity independent of cytochrome c release.</a> J. Biol. Chem. 272, 30299-30305 (1997).</li><li>Deshmukh, M., Johnson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+a+novel+event+during+neuronal+death:+development+of+competence-to-die+in+response+to+cytoplasmic+cytochrome+c.">Evidence of a novel event during neuronal death: development of competence-to-die in response to cytoplasmic cytochrome c.</a> Neuron. 21, 695-705 (1998).</li><li>Vaughn, A. E., Deshmukh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+metabolism+inhibits+apoptosis+in+neurons+and+cancer+cells+by+redox+inactivation+of+cytochrome+c.">Glucose metabolism inhibits apoptosis in neurons and cancer cells by redox inactivation of cytochrome c.</a> Nat. Cell Biol. 10, 1477-1483 (2008).</li><li>Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+apoptosis+by+Bcl-2:+release+of+cytochrome+c+from+mitochondria+blocked.">Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome c from mitochondria blocked.</a> Science. 275, 1129-1132 (1997).</li><li>Gonzales, D. H., Neupert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis+of+mitochondrial+c-type+cytochromes.">Biogenesis of mitochondrial c-type cytochromes.</a> J Bioenerg Biomembr. 22, 753-768 (1990).</li><li>Ellerby, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+cell-free+system+of+neuronal+apoptosis+-+comparison+of+premitochondrial,+mitochondrial,+and+postmitochondrial+phases.">Establishment of a cell-free system of neuronal apoptosis - comparison of premitochondrial, mitochondrial, and postmitochondrial phases.</a> J. Neurosci. 17, 6165-6178 (1997).</li><li>Neame, S. J., Rubin, L. L., Philpott, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+cytochrome+c+activity+within+intact+neurons+inhibits+apoptosis.">Blocking cytochrome c activity within intact neurons inhibits apoptosis.</a> J. Cell Biol. 142, 1583-1593 (1998).</li><li>Potts, P. R., Singh, S., Knezek, M., Thompson, C. B., Deshmukh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+function+of+endogenous+XIAP+in+regulating+caspase+activation+during+sympathetic+neuronal+apoptosis.">Critical function of endogenous XIAP in regulating caspase activation during sympathetic neuronal apoptosis.</a> J. Cell Biol. 163, 789-799 (2003).</li><li>Estus, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+gene+expression+in+neurons+during+programmed+cell+death:+identification+of+c-jun+as+necessary+for+neuronal+apoptosis.">Altered gene expression in neurons during programmed cell death: identification of c-jun as necessary for neuronal apoptosis.</a> J. Cell Biol. 127, 1717-1727 (1994).</li></ol>

직접 세포의 세포질에 시토크롬 C의 microinjection은 apoptosis의 포스트 mitochondrial 규제 연구 수있는 독특하고 강력한 도구입니다. 중요한 것은,이 기술은 셀룰러 또는 mitochondrial 손상을 에이전트를 사용하지 않고 mitochondria의 apoptosis 하류의 직접적인 활성화를 위해 수 있습니다. 이 프로토콜은 apoptosis에 대한 연구 시토크롬 C의 microinjection에 초점을 맞춘 반면, 여기?...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> DM IRE2 인버티드 현미경 </td><td> Leica </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PC - 10 Microinjection 니들 풀러 </td><td> Narishige </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MWO - 202 Micromanipulator </td><td> Narishige </td><td></td><td></td></tr><tr><td> FemtoJet Microinjector </td><td> Eppendorf </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microfilament와 얇은 벽 Boroscilicate 모세관 유리 </td><td> AM 시스템 </td><td> 615000 </td><td> 4 인치 길이, 1.00 mm 외경, 0.75 mm 내경 </td></tr><tr><td> Rhodamine B isothiocyanate - Dextran </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> R9379 </td><td> 평균 분자량 70,000 ~ 다 </td></tr><tr><td> 보빈 시토크롬 C의 단백질 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> C3131 </td><td></td></tr></tbody></table>

activation of apoptosis by cytoplasmic microinjection of cytochrome c

Apoptosis 또는 프로그램된 세포 죽음은 세포가 1 죽게하는 보존과 높은 규제 경로입니다. 세포가 세포 독성 스트레스의 다양한 발생하는 경우 Apoptosis가 발생하실 수 있습니다. 이러한 모욕 궁극적으로 mitochondrial intermembrane 공간에서 세포질 2 시토크롬 C의 릴리스의 원인이 신호 폭포를 시작합니다. mitochondria에서 시토크롬 C의 릴리스는 caspases, 궁극적으로 3-4 세포 죽음을 실행할 핵심 세포 프로 테아제의 급속한 활성화를 유발하는 핵심 이벤트입니다. apoptosis의 경로는 mitochondria 5 시토크롬 C 릴리스의 상류와 하류 지점에 규제입니다. caspase 활성화의 포스트 mitochondrial 규제를 공부하기 위해 많은 조사가 holocytochrome C (헴 연결된) 전지 6-9로 단백질의 직접적인 세포질 microinjection로 설정되어 있습니다. 시토크롬 C는 일반적으로 헴 그룹의 첨부 파일은 10-11 apoptosis 활성화하도록하는 데 필요한 어디 mitochondria에 언어입니다. 따라서 직접 caspases를 활성화하기 위해서는 cDNA 구조에서 시토크롬 C의 표현이 mitochondrial 타겟팅 및 헴 첨부집니다 동안 그것 cytosolic caspases에서 분리된 것입니다 때문에 holocytochrome C 단백질 대신 자사의 cDNA를 삽입하는 것이 필요합니다. 따라서 정화 헴 연결된 시토크롬 C 단백질의 직접 cytosolic microinjection은 셀룰러 및 mitochondrial 손상을 독성이 모욕을 사용하지 않고 mitochondrial 시토크롬 C 자료 및 apoptosis를 모방하는 유용한 도구입니다. 이 문서에서는, 우리는 마우스 배아 섬유아 세포의 (MEFs)와 예에서 볼 수 있듯이 기본 교감 신경을 사용하여 세포로 시토크롬 C 단백질의 microinjection을위한 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 apoptosis의 수사 시토크롬 C의 주입에 초점을 맞춘 반면, 여기에 나와있는 기술도 쉽게 관심을 다른 단백질의 microinjection에 대해 적용할 수 있습니다.

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Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

이 프로토콜에서는, 우리는 시토크롬의 직접적인 세포질 microinjection을 설명<em&gt; C</em섬유아 세포 및 기본 교감 신경으로&gt; 단백질. 이 기술은 시토크롬의 도입을 허용<em&gt; C</em세포 및 일일 시토크롬의 릴리스의 세포질에&gt; 단백질<em&gt; C</em&gt; mitochondria에서, 이것은 apoptosis 동안 발생합니다.

시토크롬의 세포질 Microinjection 의한 Apoptosis의 활성화 C</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Research

JoVE Journal

Biology

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Interview: Glycolipid Antigen Presentation by CD1d and the Therapeutic Potential of NKT cell Activation

CD1d에 의해 Glycolipid의 항원 프레 젠 테이션 및 NKT 세포 활성화의 치료 가능성 : 인터뷰

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연구

생물학

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Microinjection을 사용하여 안정적인 트렌스​​ 제닉 C. 엘레간스의 생성

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

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