Name: in vitro assay of bacterial adhesion onto mammalian epithelial cells
Uploaded: 2011-05-16T14:00:00
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Le travail dans les laboratoires des auteurs est soutenu par des subventions de recherches en sciences naturelles et en génie du Canada, les Instituts de recherche en santé du Canada d&#39;, et le Programme des chaires de recherche du Canada. JL est soutenu par une bourse de la Groupe d&#39;Etude des Protéines Membranaires (GEPROM) grâce au financement du Fonds de Recherche en santé du Québec.

1. Préliminaire: Les souches bactériennes et les cellules épithéliales. Les manipulations des cellules et des bactéries sont réalisées de façon aseptique, sous une hotte à flux laminaire. <ol><li> Fraîchement isoler l&#39;E. coli 2787, 2787Δ Aida et C600 à partir de stocks de glycérol sur bouillon lysogénie (LB) gélose (1% de tryptone, le chlorure de sodium à 0,5%, extrait de levure 0,5%, 1,5% de gélose) et de croître à 37 ° C. Afin de minimiser la var...

<ol>
	<li>Kline, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+adhesins+in+host-microbe+interactions.">Bacterial adhesins in host-microbe interactions.</a> Cell Host Microbe. 5, 580-580 (2009).</li><li>Cossart, P., Boquet, P., Normark, S., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+microbiology+emerging.">Cellular microbiology emerging.</a> Science. 271, 315-315 (1996).</li><li>Elsinghorst, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+invasion+by+gentamicin+resistance.">Measurement of invasion by gentamicin resistance.</a> Methods Enzymol. 236, 405-405 (1994).</li><li>Pizarro-Cerda, J., Lecuit, M., Cossart, P., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cellular Microbiology. , 161-161 (2002).</li><li>Srivastava, A., Isberg, R. R., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cellular Microbiology. , 179-179 (2002).</li><li>Benz, I., Schmidt, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+expression+of+an+adhesin+(AIDA-I)+involved+in+diffuse+adherence+of+enteropathogenic+Escherichia+coli.">Cloning and expression of an adhesin (AIDA-I) involved in diffuse adherence of enteropathogenic Escherichia coli.</a> Infect Immun. 57, 1506-1506 (1989).</li><li>Charbonneau, M. E., Berthiaume, F., Mourez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolytic+processing+is+not+essential+for+multiple+functions+of+the+Escherichia+coli+autotransporter+adhesin+involved+in+diffuse+adherence+(AIDA-I).">Proteolytic processing is not essential for multiple functions of the Escherichia coli autotransporter adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I).</a> J Bacteriol. 188, 8504-8504 (2006).</li><li>Jacques, M., Paradis, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesin-receptor+interactions+in+Pasteurellaceae.">Adhesin-receptor interactions in Pasteurellaceae.</a> FEMS Microbiol Rev. 22, 45-45 (1998).</li><li>Auger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+of+Actinobacillus+pleuropneumoniae+with+porcine+lung+and+tracheal+epithelial+cells.">Host-pathogen interactions of Actinobacillus pleuropneumoniae with porcine lung and tracheal epithelial cells.</a> Infect Immun. 77, 1426-1426 (2009).</li><li>Jacques, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+lipo-oligosaccharides+and+lipopolysaccharides+in+bacterial+adherence.">Role of lipo-oligosaccharides and lipopolysaccharides in bacterial adherence.</a> Trends Microbiol. 4, 408-408 (1996).</li><li>Nataro, J. P., Kaper, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diarrheagenic+Escherichia+coli.">Diarrheagenic Escherichia coli.</a> Clin Microbiol Rev. 11, 142-142 (1998).</li><li>Jallat, C., Darfeuille-Michaud, A., Rich, C., Joly, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+of+clinical+isolates+of+diarrhoeogenic+Escherichia+coli:+diffusely+adhering+E.+coli+strains+with+multiple+adhesive+factors.">Survey of clinical isolates of diarrhoeogenic Escherichia coli: diffusely adhering E. coli strains with multiple adhesive factors.</a> Res Microbiol. 145, 621-621 (1994).</li></ol>

Ce protocole décrit un dosage standard de l&#39;adhérence des bactéries qui peuvent être modifiés pour étudier l&#39;invasion (par exemple en utilisant la gentamicine protection de test 3). Le comptage des unités formant colonie permet la quantification, par comparaison avec les approches s&#39;appuyant sur des techniques de visualisation standard sous un microscope, comme la coloration de Giemsa. Ce dernier ne donne qu&#39;une vue qualitative de l&#39;adhérence, mais est souvent un complément utile ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Réactifs </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th></tr><tr><td> De glucose à haute DMEM </td><td> GIBCO-Invitrogen </td><td> 12430-054 </td></tr><tr><td> DDPBS </td><td> GIBCO-Invitrogen </td><td> 14190-144 </td></tr><tr><td> Sérum de croissance bovine </td><td> Hyclone </td><td> SH3054 </td></tr><tr><td> Pénicilline / streptomycine </td><td> GIBCO-Invitrogen </td><td> 15140-148 </td></tr><tr><td> Plaques de 24 puits </td><td> Corning </td><td> 3337 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP151-100 </td></tr></tbody></table>

in vitro assay of bacterial adhesion onto mammalian epithelial cells

Pour provoquer des infections, les bactéries colonisent doit leur hôte. Les bactéries pathogènes d&#39;exprimer différentes molécules ou de structures capables de favoriser l&#39;attachement aux cellules hôtes 1. Ces adhésines s&#39;appuyer sur les interactions avec les récepteurs de l&#39;hôte à la surface cellulaire ou des protéines solubles agissant comme un pont entre les bactéries et l&#39;hôte. L&#39;adhésion est une première étape essentielle avant l&#39;invasion et / ou la sécrétion de toxines, il est donc un événement clé pour être étudiés dans la pathogénie bactérienne. Par ailleurs, les bactéries induisent souvent respectées délicieusement affiné les réponses cellulaires, les études qui ont donné naissance au domaine de la 2 &#39;microbiologie cellulaire. Dosages robuste pour l&#39;adhérence des bactéries sur les cellules hôtes et leur invasion par conséquent jouer un rôle clé dans la pathogenèse bactérienne et les études ont longtemps été utilisés dans de nombreux laboratoires pionniers 3,4. Ces tests sont maintenant pratiquée par la plupart des laboratoires travaillant sur la pathogenèse bactérienne. Ici, nous décrivons un test standard de l&#39;adhésion illustrant la contribution d&#39;une adhésine spécifique. Nous utilisons la souche d&#39;Escherichia coli 2787 5, une souche pathogène humaine exprimant la Autotransporter impliquées dans l&#39;adhérence diffuse (ACRA) Adhesin. Comme contrôle, on utilise une souche mutante dépourvue du gène aida, 2787Δ aida (F. Berthiaume et M. Mourez, non publié), et une souche de laboratoire commercial de E. coli, C600 (New England Biolabs). Les bactéries sont de gauche à adhérer aux cellules de l&#39;couramment utilisés HEp-2 lignées cellulaires épithéliales humaines. Ce test a été moins largement décrite avant 6.

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In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

Ce protocole est un test simple adhésion bactérienne consistant à compter le nombre de colonies bactériennes formant des unités qui sont collées sur des cellules cultivées. Le test est robuste, indépendante de l&#39;adhésine étudié, et de nombreuses variations sont utilisés dans la plupart des laboratoires travaillant sur la pathogenèse bactérienne.

Test in vitro de l&#39;adhésion bactérienne sur des mammifères cellules épithéliales

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application d&#39;une souris ligaturés Assay Peyer Patch anse intestinale pour évaluer absorption par les cellules bactériennes M

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Recherche

Immunologie et infection

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Présentation de contrainte de cisaillement dans l&#39;étude de l&#39;adhésion bactérienne

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

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Quantitative<em&gt; In vitro</em&gt; Test pour mesurer l&#39;adhésion des neutrophiles à Activé cellules endothéliales microvasculaires humaines primaires dans des conditions statiques

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

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Entérique invasion bactérienne des cellules épithéliales intestinales<em&gt; In Vitro</em&gt; Est considérablement améliorée en utilisant une chambre diffusion verticale du modèle

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

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In vitro Essai de coculture pour évaluer la migration transépithéliale des neutrophiles induite par l’agent pathogène

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Human Neutrophil Flow Chamber Adhesion Assay

Human neutrophiles Chambre flux Essai d&#39;adhésion

Neutrophil firm adhesion to endothelial cells plays a critical role in inflammation in both health and disease. The process of neutrophil firm adhesion ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

Statique Essai d&#39;adhésion pour l&#39;étude de l&#39;intégrine activation dans les lymphocytes T

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Electroporation of Functional Bacterial Effectors into Mammalian Cells

Électroporation d&#39;effecteurs bactériens fonctionnels dans des cellules mammifères

The study of protein interactions in the context of living cells can generate critical information about localization, dynamics, and interacting partners. ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In vitro et in vivo modèle pour étudier l&#39;adhésion bactérienne au navire muraux dans des conditions de débit

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Assay of Adhesion Under Shear Stress for the Study of T Lymphocyte-Adhesion Molecule Interactions

Dosage de Adhérence Sous contrainte de cisaillement pour l&#39;étude des lymphocytes T-Adhesion Molecule Interactions

Overall, T cell adhesion is a critical component of function, contributing to the distinct processes of cellular recruitment to sites of inflammation and ...