Name: in vitro assay of bacterial adhesion onto mammalian epithelial cells
Uploaded: 2011-05-16T14:00:00
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Trabajo en los laboratorios de los autores es apoyado por becas de las Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá, el Instituto de Investigación en Salud de Canadá, y el programa de Cátedras de Investigación de Canadá. JL es apoyado por una beca del Groupe d&#39;Étude des Membranaires Protéines (GEPROM) a través de la financiación del Fonds de Recherche en Santé du Québec.

1. Preliminar: Cepas bacterianas y células epiteliales. Manipulaciones de las células y las bacterias se realizado de forma aséptica, bajo una campana de flujo laminar. <ol><li> Recién aislar el E. coli 2787, 2787Δ Aida, y C600 de las existencias de caldo de glicerol Lisogenia (LB) placas de agar (1 triptona%, 0,5% de cloruro sódico, un 0,5% de extracto de levadura, 1,5% de agar) y crecer a 37 ° C. Para minimizar la variabilidad en el ensayo, se aconseja utilizar s...

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	<li>Kline, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+adhesins+in+host-microbe+interactions.">Bacterial adhesins in host-microbe interactions.</a> Cell Host Microbe. 5, 580-580 (2009).</li><li>Cossart, P., Boquet, P., Normark, S., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+microbiology+emerging.">Cellular microbiology emerging.</a> Science. 271, 315-315 (1996).</li><li>Elsinghorst, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+invasion+by+gentamicin+resistance.">Measurement of invasion by gentamicin resistance.</a> Methods Enzymol. 236, 405-405 (1994).</li><li>Pizarro-Cerda, J., Lecuit, M., Cossart, P., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cellular Microbiology. , 161-161 (2002).</li><li>Srivastava, A., Isberg, R. R., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cellular Microbiology. , 179-179 (2002).</li><li>Benz, I., Schmidt, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+expression+of+an+adhesin+(AIDA-I)+involved+in+diffuse+adherence+of+enteropathogenic+Escherichia+coli.">Cloning and expression of an adhesin (AIDA-I) involved in diffuse adherence of enteropathogenic Escherichia coli.</a> Infect Immun. 57, 1506-1506 (1989).</li><li>Charbonneau, M. E., Berthiaume, F., Mourez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolytic+processing+is+not+essential+for+multiple+functions+of+the+Escherichia+coli+autotransporter+adhesin+involved+in+diffuse+adherence+(AIDA-I).">Proteolytic processing is not essential for multiple functions of the Escherichia coli autotransporter adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I).</a> J Bacteriol. 188, 8504-8504 (2006).</li><li>Jacques, M., Paradis, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesin-receptor+interactions+in+Pasteurellaceae.">Adhesin-receptor interactions in Pasteurellaceae.</a> FEMS Microbiol Rev. 22, 45-45 (1998).</li><li>Auger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+of+Actinobacillus+pleuropneumoniae+with+porcine+lung+and+tracheal+epithelial+cells.">Host-pathogen interactions of Actinobacillus pleuropneumoniae with porcine lung and tracheal epithelial cells.</a> Infect Immun. 77, 1426-1426 (2009).</li><li>Jacques, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+lipo-oligosaccharides+and+lipopolysaccharides+in+bacterial+adherence.">Role of lipo-oligosaccharides and lipopolysaccharides in bacterial adherence.</a> Trends Microbiol. 4, 408-408 (1996).</li><li>Nataro, J. P., Kaper, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diarrheagenic+Escherichia+coli.">Diarrheagenic Escherichia coli.</a> Clin Microbiol Rev. 11, 142-142 (1998).</li><li>Jallat, C., Darfeuille-Michaud, A., Rich, C., Joly, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+of+clinical+isolates+of+diarrhoeogenic+Escherichia+coli:+diffusely+adhering+E.+coli+strains+with+multiple+adhesive+factors.">Survey of clinical isolates of diarrhoeogenic Escherichia coli: diffusely adhering E. coli strains with multiple adhesive factors.</a> Res Microbiol. 145, 621-621 (1994).</li></ol>

Este protocolo describe un ensayo estándar de la adhesión de bacterias que pueden ser modificados para estudiar la invasión (por ejemplo, usando gentamicina ensayo de protección de 3). El recuento de unidades formadoras de colonias permite cuantificar, en comparación con los enfoques de confiar en las técnicas de visualización estándar bajo un microscopio, como la tinción de Giemsa. Este último sólo da una visión cualitativa de la adherencia, pero es a menudo un complemento útil ya que se pueden ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th></tr><tr><td> Elevados de glucosa en DMEM </td><td> GIBCO-Invitrogen </td><td> 12430-054 </td></tr><tr><td> DDPBS </td><td> GIBCO-Invitrogen </td><td> 14190-144 </td></tr><tr><td> Suero de crecimiento bovino </td><td> Hyclone </td><td> SH3054 </td></tr><tr><td> Penicilina / estreptomicina </td><td> GIBCO-Invitrogen </td><td> 15140-148 </td></tr><tr><td> Placas de 24 pocillos </td><td> Corning </td><td> 3337 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP151-100 </td></tr></tbody></table>

in vitro assay of bacterial adhesion onto mammalian epithelial cells

Para causar infecciones, las bacterias deben colonizar su anfitrión. Los patógenos bacterianos expresan diversas moléculas o estructuras capaces de fomentar el apego a las células huésped 1. Estas adhesinas se basan en la interacción con los receptores de superficie de la célula huésped o proteínas solubles que actúan como un puente entre la bacteria y el huésped. La adhesión es un primer paso crítico antes de la invasión y / o la secreción de toxinas, por lo que es un evento clave para ser estudiado en la patogénesis bacteriana. Además, las bacterias adheridas a menudo inducen a exquisitamente afinado la respuesta celular, los estudios de los cuales han dado a luz al campo de la 2 &#39;microbiología celular. Ensayos robusto para la adhesión bacteriana a las células huésped y su invasión por lo tanto, desempeñan un papel clave en los estudios de la patogénesis bacteriana y han sido utilizados en muchos laboratorios pioneros 3,4. Estos ensayos se practica actualmente por la mayoría de los laboratorios que trabajan en la patogénesis bacteriana. Aquí se describe un ensayo de adherencia tipo que ilustren la contribución de un determinado adhesina. Nosotros usamos la cepa de Escherichia coli 2787 5, una cepa patógena humana que expresa la autotransporter Adhesin que participan en la adhesión difusa (AIDA). Como control, se utiliza una cepa mutante que carecen del gen aida, 2787Δ Aida (F. Berthiaume y Mourez M., inédito), y una cepa de laboratorio comercial de E. coli, C600 (New England Biolabs). Las bacterias son de izquierda a adherirse a las células de los comúnmente utilizados HEp-2 la línea humana de células epiteliales. Este ensayo no ha sido tan ampliamente descritas antes de las 6.

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In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

Este protocolo es un ensayo simple adhesión bacteriana consiste en contar el número de unidades formadoras de colonias bacterianas que se adhieren a las células cultivadas. El ensayo es sólida, independiente de la adhesina estudiados, y numerosas variantes se utilizan en la mayoría de los laboratorios que trabajan en la patogénesis bacteriana.

Ensayo in vitro de la adhesión bacteriana a las células epiteliales de mamíferos

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

La aplicación de un ratón ligado Ensayo placas de Peyer asa intestinal para evaluar la absorción por las células bacterianas M

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Investigación

Inmunología e Infección

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

La introducción de la tensión de cizallamiento en el Estudio de la adhesión bacteriana

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Cuantitativo<em&gt; In vitro</em&gt; Ensayo para medir la adhesión de neutrófilos al Activado Primaria células endoteliales microvasculares humanas en condiciones estáticas

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Entérica invasión bacteriana de las células epiteliales intestinales<em&gt; In Vitro</em&gt; Se ha mejorado considerablemente gracias a un modelo de cámara de difusión vertical

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Ensayo de cocultivo para evaluar la migración transepitelial de neutrófilos inducida por patógenos

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Human Neutrophil Flow Chamber Adhesion Assay

Ensayo de adhesión de neutrófilos Cámara de flujo humano

Neutrophil firm adhesion to endothelial cells plays a critical role in inflammation in both health and disease. The process of neutrophil firm adhesion ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

Ensayo de adherencia estática para el Estudio de la integrina activación en linfocitos T

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Electroporation of Functional Bacterial Effectors into Mammalian Cells

La electroporación de efectores bacterianos funcionales en células de mamífero

The study of protein interactions in the context of living cells can generate critical information about localization, dynamics, and interacting partners. ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In vitro e in vivo modelo para estudiar la adhesión bacteriana a la pared del recipiente en condiciones de flujo

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Assay of Adhesion Under Shear Stress for the Study of T Lymphocyte-Adhesion Molecule Interactions

Ensayo de adhesión en condiciones de estrés de cizalla para el Estudio de linfocitos T-molécula de adhesión Interacciones

Overall, T cell adhesion is a critical component of function, contributing to the distinct processes of cellular recruitment to sites of inflammation and ...