Name: in vitro assay of bacterial adhesion onto mammalian epithelial cells
Uploaded: 2011-05-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells at JoVE.com

Kanada Doğal Bilimler ve Mühendislik Araştırma Kurumu, Kanada Sağlık Araştırma Enstitüsü ve Kanada Araştırma Sandalyeler programı hibe yazarların laboratuarlarda çalışmalar desteklenmektedir. JL Viyana de Recherche en Sante du Quebec fon yoluyla Groupe d&#39;Etüt des Protéines Membranaires (GEPROM) bir burs ile desteklenmektedir.

1. Ön: Bakteriyel suşlar ve epitel hücreleri. Hücre ve bakteri manipülasyonlar laminer akış kaputu altında aseptik yapılmaktadır. <ol><li> Taze E. izole coli suşlarının 2787, 2787Δ aida C600 gliserol stokları Lysogeny Broth (LB) agar plakları (% 1 Tripton,% 0.5 sodyum klorür,% 0.5 maya özü,% 1.5 agar) ve 37 büyümeye ° C Tayininde değişkenliği en aza indirmek için, taze kaplama suşlar her zaman kullanmak ve sadece birkaç hafta maksimum ...

<ol>
	<li>Kline, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+adhesins+in+host-microbe+interactions.">Bacterial adhesins in host-microbe interactions.</a> Cell Host Microbe. 5, 580-580 (2009).</li><li>Cossart, P., Boquet, P., Normark, S., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+microbiology+emerging.">Cellular microbiology emerging.</a> Science. 271, 315-315 (1996).</li><li>Elsinghorst, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+invasion+by+gentamicin+resistance.">Measurement of invasion by gentamicin resistance.</a> Methods Enzymol. 236, 405-405 (1994).</li><li>Pizarro-Cerda, J., Lecuit, M., Cossart, P., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cellular Microbiology. , 161-161 (2002).</li><li>Srivastava, A., Isberg, R. R., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cellular Microbiology. , 179-179 (2002).</li><li>Benz, I., Schmidt, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+expression+of+an+adhesin+(AIDA-I)+involved+in+diffuse+adherence+of+enteropathogenic+Escherichia+coli.">Cloning and expression of an adhesin (AIDA-I) involved in diffuse adherence of enteropathogenic Escherichia coli.</a> Infect Immun. 57, 1506-1506 (1989).</li><li>Charbonneau, M. E., Berthiaume, F., Mourez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolytic+processing+is+not+essential+for+multiple+functions+of+the+Escherichia+coli+autotransporter+adhesin+involved+in+diffuse+adherence+(AIDA-I).">Proteolytic processing is not essential for multiple functions of the Escherichia coli autotransporter adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I).</a> J Bacteriol. 188, 8504-8504 (2006).</li><li>Jacques, M., Paradis, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesin-receptor+interactions+in+Pasteurellaceae.">Adhesin-receptor interactions in Pasteurellaceae.</a> FEMS Microbiol Rev. 22, 45-45 (1998).</li><li>Auger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+of+Actinobacillus+pleuropneumoniae+with+porcine+lung+and+tracheal+epithelial+cells.">Host-pathogen interactions of Actinobacillus pleuropneumoniae with porcine lung and tracheal epithelial cells.</a> Infect Immun. 77, 1426-1426 (2009).</li><li>Jacques, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+lipo-oligosaccharides+and+lipopolysaccharides+in+bacterial+adherence.">Role of lipo-oligosaccharides and lipopolysaccharides in bacterial adherence.</a> Trends Microbiol. 4, 408-408 (1996).</li><li>Nataro, J. P., Kaper, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diarrheagenic+Escherichia+coli.">Diarrheagenic Escherichia coli.</a> Clin Microbiol Rev. 11, 142-142 (1998).</li><li>Jallat, C., Darfeuille-Michaud, A., Rich, C., Joly, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+of+clinical+isolates+of+diarrhoeogenic+Escherichia+coli:+diffusely+adhering+E.+coli+strains+with+multiple+adhesive+factors.">Survey of clinical isolates of diarrhoeogenic Escherichia coli: diffusely adhering E. coli strains with multiple adhesive factors.</a> Res Microbiol. 145, 621-621 (1994).</li></ol>

Bu protokol işgali çalışma (gentamisin koruma tahlil 3 kullanarak) modifiye edilebilir bir standart bakteriyel aderans deneyi açıklar. Koloni oluşturan birim sayma, Giemsa boyama gibi yaklaşımlar, mikroskop altında standart görselleştirme teknikleri dayanarak ile karşılaştırıldığında, ölçme sağlar. İkincisi, sadece yapışma niteliksel bir görünüm verir ama yapışma çeşitli desenler farklılaştırmak ve mechanistical anlayışlar vermek 9 yılından bu yana sık sık ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktif </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> Yüksek glikoz DMEM </td><td> Gibco-Invitrogen </td><td> 12430-054 </td></tr><tr><td> DDPBS </td><td> Gibco-Invitrogen </td><td> 14190-144 </td></tr><tr><td> Bovine Büyüme Serumu </td><td> Hyclone </td><td> SH3054 </td></tr><tr><td> Penisilin / Streptomisin </td><td> Gibco-Invitrogen </td><td> 15140-148 </td></tr><tr><td> 24 kuyucuğu </td><td> Corning </td><td> 3337 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP151-100 </td></tr></tbody></table>

in vitro assay of bacterial adhesion onto mammalian epithelial cells

Enfeksiyonlara neden, bakteri, ev sahibi kolonize gerekir. Bakteriyel patojenler, hücreleri 1 barındırmak için ek teşvik etmek için mümkün olan çeşitli moleküller veya yapıları ifade eder. Bu adhezinleri konak hücre yüzey reseptörleri veya bakteri ve ev sahibi arasında bir köprü olarak hareket çözünür proteinler ile etkileşim güveniyor. Yapışma işgali ve / veya toksin salgılanması önce kritik bir ilk adım, bu nedenle bakteriyel patogenezi incelenmesi gereken önemli bir olay. Ayrıca, uyulması bakteri genellikle zarif ince ayar hücresel yanıtları, &#39;cep mikrobiyoloji&#39; 2 alanına doğum yapmış olan çalışmalar neden. Bakteriyel konak hücrelerine yapışma ve istila için sağlam testler, bu nedenle bakteriyel patogenezi çalışmalarda kilit rol oynayan ve uzun birçok öncü laboratuarlar 3,4 kullanılmıştır . Bu testler bakteriyel patogenezi üzerinde çalışan laboratuvarlar tarafından uygulanmaktadır. Burada, belirli bir adhesin katkıları gösteren standart bir bağlılık tahlil açıklar. Biz, Escherichia coli suşu 2787 5, Diffüz bağlılık (AIDA) ile ilgilendim Autotransporter Adhesin ifade eden bir insan patojenik kullanın . Kontrol olarak, Aida gen, 2787Δ aida (F. Berthiaume ve M. Mourez, yayınlanmamış), ve E. ticari bir laboratuvar suşu yoksun bir mutant suşu coli, C600 (New England Biolabs). Bakteriler yaygın olarak kullanılan HEp-2 insan epitel hücre hattı hücrelerinde uymak bırakılır. Bu testte, 6 önce, daha az yoğun tarif edilmiştir .

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells at JoVE.com

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

Bu protokol, kültür hücreleri üzerine yapıştırılır birimler oluşturan bakteri kolonisi sayısının sayma oluşan basit bir bakteriyel yapışma testtir. Testin sağlam, adhesin bağımsız olarak okudu ve çeşitli varyasyonlar bakteriyel patogenezi üzerinde çalışan çoğu laboratuvarlarda kullanılır.

Bakteriyel Yapışma Memeli Epitel Hücreleri üzerine In Vitro Testi

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Fare Uygulama M hücreleri tarafından Bakteriyel Alımı değerlendirin Peyer Patch Bağırsak Loop Testi bağlandı

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Bakteriyel Yapışma Çalışma Kesme Stres Tanıtımı

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Nicel<em&gt; In vitro</emStatik Koşullarında Account İlköğretim İnsan mikrovasküler endotel hücreleri için Nötrofil yapışma Tedbir&gt; Testi

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Bağırsak Epitel Hücreleri Of Enterik Bakteriyel Invasion<em&gt; In Vitro</em&gt; Dramatik bir Dikey Difüzyon Odası Modeli Geliştirilmiş mı

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Tüp bebek Patojen Kaynaklı Nötrofil Trans-epitel Göçünü Değerlendirmek için Coculture Tahlili

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Human Neutrophil Flow Chamber Adhesion Assay

İnsan nötrofil Akış odası Yapışma Deneyi

Neutrophil firm adhesion to endothelial cells plays a critical role in inflammation in both health and disease. The process of neutrophil firm adhesion ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

T Lenfositlerindeki Integrin Aktivasyonunun Çalışması için statik Adezyon Deneyi

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Electroporation of Functional Bacterial Effectors into Mammalian Cells

Memeli Hücreleri içinde fonksiyonel Bakteriyel Efektör elektroporasyonu

The study of protein interactions in the context of living cells can generate critical information about localization, dynamics, and interacting partners. ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro ve İn Vivo Modeli Gemi Duvar Altında Akış Koşulları Bakteriyel Yapışma Eğitim için

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Assay of Adhesion Under Shear Stress for the Study of T Lymphocyte-Adhesion Molecule Interactions

T Lenfosit-Yapışma Molekülü Etkileşimleri Çalışmaları Yapışma Altında Kesme Stres Testi

Overall, T cell adhesion is a critical component of function, contributing to the distinct processes of cellular recruitment to sites of inflammation and ...