Name: quantitative analyses of all influenza type a viral hemagglutinins and neuraminidases using universal antibodies in simple slot blot assays
Uploaded: 2011-04-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays at JoVE.com

Yazarların Bayan Monika Tocchi yazının içerik incelemesi için teşekkür etmek istiyorum. AMH, Kanada, Suudi Arabistan Kültür Bürosu aracılığıyla, Kral Abdülaziz Üniversitesi Burs tarafından desteklenmektedir.

1. Reaktifler ve ekipmanların hazırlanması <ol><li> Yuvası leke işlemine başlamadan önce, Tris-tamponlu salin (20 mM Tris, 137 mM NaCl, pH 7.6) (TBS)% 0.01 hemaglutinin HA, yuva leke, ya da 20_mls Zwittergent 4M üre çözeltisi 20_mls hazırlamak TBS, nöraminidaz veya NA, yuvası leke çözüm. 4M üre her zaman taze olarak hazırlanması gerekir iken,% 10 Zwittergent dH 2 O bir stok solüsyonu oda sıcaklığında en az 6 ay için kararlı ve bu nedenle her bir deney önce TBS içinde% 0.01 seyrel...

<ol>
	<li>Webster, R. G., Bean, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+influenza+virus.">Genetics of influenza virus.</a> Annu Rev Genet. 12, 415-431 (1978).</li><li>Skehel, J. J., Wiley, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+binding+and+membrane+fusion+in+virus+entry:+the+influenza+hemagglutinin.">Receptor binding and membrane fusion in virus entry: the influenza hemagglutinin.</a> Annu Rev Biochem. 69, 531-569 (2000).</li><li>Wood, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+the+host+cell+on+standardisation+of+influenza+vaccine+potency.">The influence of the host cell on standardisation of influenza vaccine potency.</a> Dev Biol Stand. 98, 183-188 (1999).</li><li>Sylte, M. J., Suarez, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+neuraminidase+as+a+vaccine+antigen.">Influenza neuraminidase as a vaccine antigen.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 333, 227-241 (2009).</li><li>Bright, R. A., Neuzil, K. M., Pervikov, Y., Palkonyay, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+meeting+on+the+role+of+neuraminidase+in+inducing+protective+immunity+against+influenza+infection.">WHO meeting on the role of neuraminidase in inducing protective immunity against influenza infection.</a> Vaccine. 27, 6366-6369 (2008).</li><li>Chun, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+antibodies+and+their+applications+to+the+quantitative+determination+of+virtually+all+subtypes+of+the+influenza+A+viral+hemagglutinins.">Universal antibodies and their applications to the quantitative determination of virtually all subtypes of the influenza A viral hemagglutinins.</a> Vaccine. 26, 6068-6076 (2008).</li><li>Gravel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualitative+and+quantitative+analyses+of+virtually+all+subtypes+of+influenza+A+and+B+viral+neuraminidases+using+antibodies+targeting+the+universally+conserved+sequences.">Qualitative and quantitative analyses of virtually all subtypes of influenza A and B viral neuraminidases using antibodies targeting the universally conserved sequences.</a> Vaccine. 28, 5774-5784 (2010).</li><li>Li, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+slot+blot+for+the+detection+of+virtually+all+subtypes+of+the+influenza+A+viral+hemagglutinins+using+universal+antibodies+targeting+the+fusion+peptide.">A simple slot blot for the detection of virtually all subtypes of the influenza A viral hemagglutinins using universal antibodies targeting the fusion peptide.</a> Nat Protoc. 5, 14-19 (2010).</li><li>Harvey, R., Wheeler, J. X., Wallis, C. L., Robertson, J. S., Engelhardt, O. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+haemagglutinin+in+H5N1+influenza+viruses+reveals+low+haemagglutinin+content+of+vaccine+virus+NIBRG-14+(H5N1).">Quantitation of haemagglutinin in H5N1 influenza viruses reveals low haemagglutinin content of vaccine virus NIBRG-14 (H5N1).</a> Vaccine. 26, 6550-6554 (2008).</li><li>Li, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+deglycosylation+and+electrophoresis+to+the+quantification+of+influenza+viral+hemagglutinins+facilitating+the+production+of+2009+pandemic+influenza+(H1N1)+vaccines+at+multiple+manufacturing+sites+in+China.">Application of deglycosylation and electrophoresis to the quantification of influenza viral hemagglutinins facilitating the production of 2009 pandemic influenza (H1N1) vaccines at multiple manufacturing sites in China.</a> Biologicals. 38, 284-289 (2010).</li><li>Johansson, B. E., Pokorny, B. A., Tiso, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supplementation+of+conventional+trivalent+influenza+vaccine+with+purified+viral+N1+and+N2+neuraminidases+induces+a+balanced+immune+response+without+antigenic+competition.">Supplementation of conventional trivalent influenza vaccine with purified viral N1 and N2 neuraminidases induces a balanced immune response without antigenic competition.</a> Vaccine. 20, 1670-1674 (2002).</li><li>Hashem, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+antibodies+against+the+highly+conserved+influenza+fusion+peptide+cross-neutralize+several+subtypes+of+influenza+A+virus.">Universal antibodies against the highly conserved influenza fusion peptide cross-neutralize several subtypes of influenza A virus.</a> Biochem Biophys Res Comm. , (2010).</li></ol>

Influenza virüs HA ve NA, bu iki yüzey proteinleri bağışıklık yanıtlarını 6-11 indükleyen en önemli viral bileşenler olduğundan kantitatif tayin aşı araştırma ve geliştirme için kritik öneme sahiptir . Daha önce bu proteinlerin tespiti için rapor immünolojik yöntemler, gerginlik spesifik antikorların gerektirir. Antikorlar, sadece evrensel korunmuş epitoplar 6-8 farkındayız beri HA ve NA antijenleri burada açıklanan ölçmek için, basit, tekrarlanabilir ve hızlı yu...

An author's affiliation was omitted from the publication of <a href="http://www.jove.com/video/2784">Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays</a>.

Erratum: Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktif veya ekipman Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> Bio-Dot SF Mikrofiltrasyon Aparatı </td><td> Bio-Rad </td><td> 170-6542 </td><td></td></tr><tr><td> Bio-Nokta SF Filtre kağıdı </td><td> Bio-Rad </td><td> 162-0161 </td><td></td></tr><tr><td> Immobilon-FL transfer membran (PVDF) </td><td> Millipore </td><td> IPFL00010 </td><td></td></tr><tr><td> Vakum pompası </td><td> Millipore </td><td> WP6111560 </td><td></td></tr><tr><td> Kemilüminesans BioMax Işık Film </td><td> Kodak </td><td> 178 8207 </td><td></td></tr><tr><td> FluorChem Jel Dökümantasyon Sistemi </td><td> Alpha Innotech </td><td> 29-008-1896X </td><td></td></tr><tr><td> Evrensel tavşan HA ve NA antijenlere karşı antikorlar </td><td></td><td> Uni-1 (HA) HCA-2, HCA-3 (NA) </td><td> Antikorlar MTA mevcuttur ya da daha önce 6,7 açıklanan prosedürlere göre ilgilenen araştırmacılar tarafından oluşturulmuş olabilir. </td></tr><tr><td> Grip aşısı referans antijen </td><td> CBER / FDA veya NIBSC </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Grip aşısı örnekleri </td><td></td><td></td><td> Pek çok ülkede yaygın olarak bulunan </td></tr><tr><td> Üre </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> U1250 </td><td></td></tr><tr><td> Zwittergent 3-14 Deterjan </td><td> Calbiochem </td><td> 693017 </td><td></td></tr><tr><td> Tween-20 </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP337-500 </td><td></td></tr><tr><td> Blot Sınıf Engelleyicisi Yağsız kuru süt </td><td> Bio-Rad </td><td> 170-6404 </td><td></td></tr><tr><td> ImmunoPure Keçi anti-tavşan IgG, (H + L), Konjuge Peroksidaz </td><td> Thermo Scientific </td><td> 31460 </td><td></td></tr><tr><td> SuperSignal Batı Dura Genişletilmiş Süre Yüzey </td><td> Thermo Scientific </td><td> 34075 </td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative analyses of all influenza type a viral hemagglutinins and neuraminidases using universal antibodies in simple slot blot assays

Hemaglutinin (HA) ve nöraminidaz (NA), viral bir yaşam döngüsü ve koruyucu immün yanıtları 1,2 indüksiyonu önemli rol oynadığı bilinmektedir grip virüsleri iki yüzey proteinleri. HA nötralize edici antikorlar için ana hedef olarak, şu anda grip aşısı potens belirteci olarak kullanılır ve tek radyal immunodiffüzyon (SRID) 3 ile ölçülür . Ancak, ilgili alt tip spesifik antiserumlar durumu SRID bağımlılığı her yeni aşı serbest bırakılması için en az 2-3 ay gecikme neden olur. Ayrıca, NA da, koruyucu bağışıklığı 4, influenza aşılarının NA miktarını uygun reaktifler analitik yöntem 5 eksikliği nedeniyle henüz standart değil uyardığı kanıtlara rağmen . Böylece, HA ve NA antijenleri nicel kapasitesine sahip basit bir alternatif yöntemler hızlı serbest bırakılması ve influenza aşıları daha iyi kalite kontrol için arzu edilir. Mevcut tüm influenza A HA ve NA dizileri Evrensel korunmuş bölgelerde 6-7 biyoinformatik analizleri ile tespit edilmiştir. Bir dizisi (Uni-1 olarak belirlenen), iki korunmuş dizileri, enzimatik aktif sitesine yakın (HCA-2 olarak belirlenmiş) ve nöraminidaz tespit ise, füzyon peptid 6 HA, sadece evrensel korunmuş epitop tespit edildi N-terminalindeki diğer yakın (HCA-3 olarak belirlenmiş) 7. Bu amino asit dizileri ile Peptitler sentezlenen ve antikor üretimi için tavşan bağışıklık kullanılır. HA Uni-1 epitop karşı antikor HCA-2 ve HCA-3 bölge (NA) karşı antikorlar 9 NA alt tipi bağlama kapasitesine sahip iken 13 alt tipi influenza A HA (H1-H13) bağlamak mümkün oldu. Tüm antikorlar allantoik proteinlere karşı çapraz reaktivite tespit edildiğini gözlem kanıtladığı gibi viral dizileri karşı olağanüstü özgüllük gösterdi. Bu evrensel antikorlar daha sonra spesifik antiserumlar 7,8 gerek kalmadan aşılar influenza A HA ve NA ölçmek için slot blot testleri geliştirmek için kullanılmıştır. Aşı örnekleri çeşitli konsantrasyonlarda seyreltilmiş referans standartları ile birlikte bir yuva leke aparatı kullanarak PVDF membran üzerine uygulandı. HA tespiti için, örnekler ve standart ilk seyreltilmiş edildi Tris tamponlu salin (TBS), NA ölçümü için% 0,01 olarak Zwittergent bu koşulları içeren TBS seyreltilmiş iken 4M üre içeren algılama hassasiyetini önemli ölçüde geliştirilmiş. HA ve NA antijenleri kendi evrensel antikorlar ile immün tespiti sonrasında, sinyal intensitesi dansitometrisi tarafından ölçüldü. HA ve NA aşıların miktarları daha sonra çeşitli konsantrasyonlarda kullanılan referanslar sinyal intensitesi ile kurulmuş bir standart eğrisi kullanılarak hesaplanmıştır. Bu antikorların, HA ve NA evrensel epitoplar bağlamak göz önüne alındığında, ilgilenen araştırmacılar sadece slot leke dışında immunoassay araştırma araçları olarak kullanabilirsiniz.

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays at JoVE.com

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

En korunmuş dizileri biyoinformatik analizleri ile tespit hedefleyen evrensel bir antikor kullanarak influenza virüs hemaglutinin ve nöraminidaz miktarının tayini için basit bir yuva blot yöntemi geliştirilmiştir. Bu yenilikçi yaklaşım, tüm viral hemaglutinin ve nöraminidaz kantitatif tayini için kullanışlı bir alternatif sunabilir.

Tüm Influenza Kantitatif Analiz Basit Slot Blot Tahliller Evrensel Antikorlar kullanarak Viral Hemagglutinins ve nöraminidaz yazın

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Yılları arasında sinerjistik Araştırma Bioluminescent Görüntüleme kullanma Streptococcus pneumoniae Bebek Fare ve İnfluenza A Virüsü

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

Using a Pan-Viral Microarray Assay Virochip to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

Viral Patojenler Klinik Örnekler Ekranına bir Pan-Viral Mikroarray Testi (Virochip)

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

Vaccinia Reporter Viruses for Quantifying Viral Function at All Stages of Gene Expression

Gen İfade Tüm Dönemlerinde Viral Fonksiyonu sayısallaştırabilmek için vaksiniya Reporter Virüsler

Poxviruses are a family of double stranded DNA viruses that include active human pathogens such as monkeypox, molluscum contagiousum, and Contagalo virus. ...

Viral Concentration Determination Through Plaque Assays: Using Traditional and Novel Overlay Systems

Kullanımı Geleneksel Hikaye ve Roman Yerleşimi Sistemleri: Plak Tahliller sayesinde viral Konsantrasyon Tayini

Plaque assays remain one of the most accurate methods for the direct quantification of infectious virons and antiviral substances through the counting of ...

Early Viral Entry Assays for the Identification and Evaluation of Antiviral Compounds

Erken Viral Giriş Tespiti için Tahliller ve Antiviral Bileşiklerin Değerlendirilmesi

Cell-based systems are useful for discovering antiviral agents. Dissecting the viral life cycle, particularly the early entry stages, allows a mechanistic ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

Nitel ve Nicel Saptanması için Tahliller ve Protein Antimikrobiyal karakterizasyonu

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

A Miniaturized Glycan Microarray Assay for Assessing Avidity and Specificity of Influenza A Virus Hemagglutinins

Influenza A Virüsü hemaglutininler aviditesi ve özgünlüğünün değerlendirilmesi için Minyatür Glycan Mikroarray Testi

Influenza A virus (IAV) hemagglutinins recognize sialic acids on the cell surface as functional receptors to gain entry into cells. Wild waterfowl are the ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

Enzim-linked Lektin Testi tarafından Grip Nöraminidaz İnhibisyon antikor titreleri Ölçme

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Grip A virüs enfeksiyonu bir fare modeli çalışmalarda

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Grip virüsü monoklonal antikorları nötralize kaçış türevleri üretimi

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...