Name: preparation of living isolated vertebrate photoreceptor cells for fluorescence imaging
Uploaded: 2011-06-22T13:00:00
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1。 Sylgardに覆われた皿、実験チャンバー、そり及びその刃の準備<ol><li> Sylgardのエラストマーでコーティングさ35ミリメートルファルコンペトリ皿は、単一の視細胞を得るために単離網膜の適切なチョッピングのために必要とされる。エラストマーは、供給者の指示と少量の層で、その底部をカバーするためにそれぞれの皿に注がれるにしたがって調製される。皿はコーティング後にカバー?...

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	<li>Burns, M. E., Arshavsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+Counting+Photons:+Trials+and+Trends+in+Vertebrate+Visual+Transduction.">Beyond Counting Photons: Trials and Trends in Vertebrate Visual Transduction.</a> Neuron. 48, 387-401 (2005).</li><li>Ebrey, T., Koutalos, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertebrate+Photoreceptors.">Vertebrate Photoreceptors.</a> Prog Retin Eye Res. 20, 49-94 (2001).</li><li>Fain, G. L., Matthews, H. R., Cornwall, M. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+Spot+Confocal+Technique+to+Measure+Cytoplasmic+Calcium+Concentration+in+Photoreceptors.">Laser Spot Confocal Technique to Measure Cytoplasmic Calcium Concentration in Photoreceptors.</a> Methods Enzymol. 316, 146-163 (2000).</li><li>Szikra, T., Cusato, K., Thoreson, W. B., Barabas, P., Bartoletti, T. M., Krizaj, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+Calcium+Stores+Regulates+Calcium+Influx+and+Signal+Transmission+in+Rod+Photoreceptors.">Depletion of Calcium Stores Regulates Calcium Influx and Signal Transmission in Rod Photoreceptors.</a> J Physiol. 586, 4859-4875 (2008).</li><li>Krizaj, D., Copenhagen, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalization+of+Calcium+Extrusion+Mechanisms+in+the+Outer+and+Inner+Segments+of+Photoreceptors.">Compartmentalization of Calcium Extrusion Mechanisms in the Outer and Inner Segments of Photoreceptors.</a> Neuron. 21, 249-256 (1998).</li><li>Chen, C., Nakatani, K., Koutalos, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+Magnesium+Concentration+in+Salamander+Photoreceptor+Outer+Segments.">Free Magnesium Concentration in Salamander Photoreceptor Outer Segments.</a> J Physiol. 553, 125-135 (2003).</li><li>Chen, C., Jiang, Y., Koutalos, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Behavior+of+Rod+Photoreceptor+Disks.">Dynamic Behavior of Rod Photoreceptor Disks.</a> Biophys J. 83, 1403-1412 (2002).</li><li>Tsina, E., Chen, C., Koutalos, Y., Ala-Laurila, P., Tsacopoulos, M., Wiggert, B., Crouch, R. K., Cornwall, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+Microfluorometric+Studies+of+Reduction+and+Clearance+of+Retinal+in+Bleached+Rod+Photoreceptors.">Physiological and Microfluorometric Studies of Reduction and Clearance of Retinal in Bleached Rod Photoreceptors.</a> J Gen Physiol. 124, 429-443 (2004).</li><li>Ala-Laurila, P., Kolesnikov, A. V., Crouch, R. K., Tsina, E., Shukolyukov, S. A., Govardovskii, V. I., Koutalos, Y., Wiggert, B., Estevez, M. E., Cornwall, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+Cycle:+Dependence+of+Retinol+Production+and+Removal+on+Photoproduct+Decay+and+Cell+Morphology.">Visual Cycle: Dependence of Retinol Production and Removal on Photoproduct Decay and Cell Morphology.</a> J Gen Physiol. 128, 153-169 (2006).</li><li>Koutalos, Y., Cornwall, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluorometric+Measurement+of+the+Formation+of+All-Trans-Retinol+in+the+Outer+Segments+of+Single+Isolated+Vertebrate+Photoreceptors.">Microfluorometric Measurement of the Formation of All-Trans-Retinol in the Outer Segments of Single Isolated Vertebrate Photoreceptors.</a> Methods Mol Biol. 652, 129-147 (2010).</li><li>Wu, Q., Blakeley, L. R., Cornwall, M. C., Crouch, R. K., Wiggert, B. N., Koutalos, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interphotoreceptor+Retinoid-Binding+Protein+Is+the+Physiologically+Relevant+Carrier+That+Removes+Retinol+from+Rod+Photoreceptor+Outer+Segments.">Interphotoreceptor Retinoid-Binding Protein Is the Physiologically Relevant Carrier That Removes Retinol from Rod Photoreceptor Outer Segments.</a> Biochemistry. 46, 8669-8679 (2007).</li><li>Kolesnikov, A. V., Ala-Laurila, P., Shukolyukov, S. A., Crouch, R. K., Wiggert, B., Estevez, M. E., Govardovskii, V. I., Cornwall, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+Cycle+and+Its+Metabolic+Support+in+Gecko+Photoreceptors.">Visual Cycle and Its Metabolic Support in Gecko Photoreceptors.</a> Vision Res. 47, 363-374 (2007).</li><li>Chen, C., Blakeley, L. R., Koutalos, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+All-Trans+Retinol+after+Visual+Pigment+Bleaching+in+Mouse+Photoreceptors.">Formation of All-Trans Retinol after Visual Pigment Bleaching in Mouse Photoreceptors.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 3589-3595 (2009).</li></ol>

健康な単離された細胞が得られない場合、問題は、網膜の分離や健康状態、またはそのチョッピングのいずれかである。一般的に、眼と硝子体の前部を除去した後、網膜は容易に色素上皮をオフに持ち上げる。表示されない場合は、アイカップの周囲から始まるoffにはがしてみてください。それは分離することは依然として困難である場合は、おそらく可能性は、動物が時間の十分な期間の?...

<table border="1"><tbody><tr><th>の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント</th></tr><tr><td>暗い部屋（100〜150フィート2） </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>レッドライト19 </td><td></td><td></td><td>オンラインストア</td></tr><tr><td>赤外線光源と赤外線画像ビューア</td><td> FJW光システム、（株） </td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡19 </td><td></td><td></td><td>赤外線視聴者が装備</td></tr><tr><td>遮光ケージ19に囲まれた落射蛍光顕微鏡</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖ツール（はさみ、ピンセット、ブレードホルダー） </td><td> Robozまたはファイン科学ツール</td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sylgardエラストマー</td><td>エセックス（シャーロット、ノースカロライナ州） </td><td> Sylgard 184エラストマーキット</td><td></td></tr><tr><td>ポリ- L -オルニチン（0.01％） </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td>ポリ- L -リジン（0.1％） </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> P8920 </td><td> 0.01％に希釈する</td></tr><tr><td>実験チャンバー</td><td>ワーナーインスツルメンツ（ハムデン、コネチカット州） </td><td> D3512P </td><td></td></tr><tr><td>ペトリ皿、プラスチックピペット</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

preparation of living isolated vertebrate photoreceptor cells for fluorescence imaging

脊椎動物の網膜では、光伝達、電気信号に光の変換は、桿体と錐体視細胞1〜4で行われている。桿体は薄暗い光のビジョン、明るい光の円錐形のための責任があります。光伝達は光受容細胞、視色素、一次光検出器の高濃度が含まれている特殊なコンパートメントの外側の部分で行われます。視覚的な色素は、発色団、11で構成されて-タンパク質、オプシンに添付された、 シスレチナール。すべてのトランスへのシス -視覚色素によって吸収された光子は、11から発色団を異性化。この光異性化は、膜電位の変化で絶頂に達すると電気信号に光刺激の伝達をもたらす反応のカスケードを開始する視覚色素のコンフォメーション変化をもたらす。光刺激から細胞の回復は、光によって活性化中間体の不活性化、および膜電位の再確立を行います。のCa 2 +は、光情報伝達に関与する酵素のいくつかの活性を変調し、その濃度は、光刺激により低減されます。この方法では、Ca 2 +は背景光の光刺激とその適応からの細胞の回復において重要な役割を果たしている。 全トランス 5月7日にシス発色団-回復のプロセスの別の本質的な部分はその11の光異性化による光検出の際に破棄されている視覚色素の再生です。この再生は、アポタンパク質のオプシンを残し、光活性化顔料によって全トランスレチナールのリリースから始まります。リリースされたすべてのトランスレチナールは急速に全- トランスレチノールにNADPHを利用する反応で減少し、オプシンは新鮮な11で結合している-視覚的な色素を改革するために外側のセグメントに持ち込まれた網膜シス 。全- トランスレチノールは、専門のキャリアInterphotoreceptorレチノイド結合タンパク質（IRBP）で外側のセグメントで構成し、隣接する細胞へ搬出される。 単一視細胞の蛍光イメージングは​​、それらの生理学および細胞生物学を研究するために使用することができます。 のCa 2 +感受性蛍光色素8月12日だけでなく、内側のセグメントのCa 2の役割のCa 2 +ストアを明るみに詳細に外側のセグメントのCa 2 +の変化と応答の間の相互作用を調べるために使用することができます+ホメオスタシス13,14 。蛍光染料はまたのMg 2を測定するために使用することができます+濃度15、pHを、水性および膜のコンパートメント16のトレーサーとして。最後に、全- トランスレチノール（ビタミンA）の固有蛍光が単一の視細胞17から19で、その形成と除去の速度を監視するために使用することができます。

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Preparation of Living Isolated Vertebrate Photoreceptor Cells for Fluorescence Imaging

方法は、蛍光イメージングのための別の脊椎動物種から単生きた光受容細胞の調製のために説明されています。方法は、画像にそのようなNADHやビタミンAなどの内因性蛍光体の蛍光を使用し、又はCaに敏感な外因的に添加蛍光色素のことができる<sup&gt; 2 +</sup&gt;または他の要因。

蛍光イメージングのための生活絶縁脊椎動物視細胞の調製

In the vertebrate retina, phototransduction, the conversion of light to an electrical signal, is carried out by the rod and cone photoreceptor cells1-4.  ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

An Isolated Retinal Preparation to Record Light Response from Genetically Labeled Retinal Ganglion Cells

遺伝的に標識された網膜神経節細胞からの光は応答を記録するために隔離された網膜の準備

The first steps in vertebrate vision take place when light stimulates the rod and cone photoreceptors of the retina 1.  This information is then ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

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無傷の感覚器官の前駆細胞の生細胞イメージングショウジョウバエ蛹

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

内在性NADH蛍光の二光子イメージングによるマウス大脳皮質におけるMicroregional低酸素の検出

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

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カルシウムイメージングの急性脳室下帯スライスの調製

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An Isolated Semi-intact Preparation of the Mouse Vestibular Sensory Epithelium for Electrophysiology and High-resolution Two-photon Microscopy

電気生理学および高分解能二光子顕微鏡用マウス前庭感覚上皮の切り抜き半無傷準備

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Visualization of Endosome Dynamics in Living Nerve Terminals with Four-dimensional Fluorescence Imaging

4次元蛍光イメージングと住んでいる神経末端におけるエンドソームダイナミクスの可視化

Four-dimensional (4D) light imaging has been used to study behavior of small structures within motor nerve terminals of the thin transversus abdominis ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

ビブラトームセクショニングマウス網膜は、感光体文化を準備する

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

イメージングカルシウム<sup&gt; 2+</supマウス網膜の光受容コーン軸索末端で&gt;ダイナミクス

Retinal cone photoreceptors (cones) serve daylight vision and are the basis of color discrimination. They are subject to degeneration, often leading to ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

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Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

Millisecond Hydrogen/Deuterium-Exchange Mass Spectrometry for the Study of Alpha-Synuclein Structural Dynamics Under Physiological Conditions

生理学的条件下でのα-シヌクレイン構造ダイナミクスの研究のためのミリ秒水素/重水素交換質量分析

Alpha-synuclein (aSyn) is an intrinsically disordered protein whose fibrillar aggregates are abundant in Lewy bodies and neurites, which are the hallmarks ...