Name: analysis of dendritic spine morphology in cultured cns neurons
Uploaded: 2011-07-13T12:00:00
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हम सावधान संपादन के लिए केली जोन्स धन्यवाद. अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन Postdoctoral फैलोशिप (डीपीएस); यह काम NIH अनुदान R01MH 071316, अल्जाइमर एसोसिएशन, एक प्रकार का पागलपन और अवसाद (NARSAD) पर अनुसंधान के लिए नेशनल एलायंस, और Autism अनुसंधान के लिए नेशनल एलायंस (NAAR) (पीपी) द्वारा समर्थित किया गया अमेरिकी हार्ट एसोसिएशन predoctoral फैलोशिप (KMW).

यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल किसी भी प्राथमिक सभ्य प्रणाली में वृक्ष के समान रीढ़ की हड्डी और आकारिकी गतिशीलता की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. 1. प्राथमिक cortical न्यूरॉन संस्कृतियों की तै...

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	<li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developments+in+neuronal+cell+culture.">Developments in neuronal cell culture.</a> Nature. 336, 185-186 (1988).</li><li>Xie, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kalirin-7+controls+activity-dependent+structural+and+functional+plasticity+of+dendritic+spines.">Kalirin-7 controls activity-dependent structural and functional plasticity of dendritic spines.</a> Neuron. 56, 640-656 (2007).</li><li>Spear, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+adolescent+development+and+alcohol+use+in+animals.">Modeling adolescent development and alcohol use in animals.</a> Alcohol Res Health. 24, 115-123 (2000).</li><li>Srivastava, D. P., Woolfrey, K. M., Liu, F., Brandon, N. J., Penzes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+ss+activity+modulates+synaptic+signaling+and+structure.">Estrogen receptor ss activity modulates synaptic signaling and structure.</a> J Neurosci. 30, 13454-13460 (2010).</li><li>Srivastava, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enhancement+of+two-step+wiring+plasticity+by+estrogen+and+NMDA+receptor+activity.">Rapid enhancement of two-step wiring plasticity by estrogen and NMDA receptor activity.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 105, 14650-14655 (2008).</li><li>Woolfrey, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epac2+induces+synapse+remodeling+and+depression+and+its+disease-associated+forms+alter+spines.">Epac2 induces synapse remodeling and depression and its disease-associated forms alter spines.</a> Nat Neurosci. 12, 1275-1284 (2009).</li><li>Allison, D. W., Gelfand, V. I., Spector, I., Craig, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+actin+in+anchoring+postsynaptic+receptors+in+cultured+hippocampal+neurons:+differential+attachment+of+NMDA+versus+AMPA+receptors.">Role of actin in anchoring postsynaptic receptors in cultured hippocampal neurons: differential attachment of NMDA versus AMPA receptors.</a> J Neurosci. 18, 2423-2436 (1998).</li><li>Harms, K. J., Tovar, K. R., Craig, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse-specific+regulation+of+AMPA+receptor+subunit+composition+by+activity.">Synapse-specific regulation of AMPA receptor subunit composition by activity.</a> J Neurosci. 25, 6379-6388 (2005).</li><li>Xie, Z., Huganir, R. L., Penzes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+dendritic+spine+structural+plasticity+is+regulated+by+small+GTPase+Rap1+and+its+target+AF-6.">Activity-dependent dendritic spine structural plasticity is regulated by small GTPase Rap1 and its target AF-6.</a> Neuron. 48, 605-618 (2005).</li><li>Jones, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+modulation+of+spine+morphology+by+the+5-HT2A+serotonin+receptor+through+kalirin-7+signaling.">Rapid modulation of spine morphology by the 5-HT2A serotonin receptor through kalirin-7 signaling.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 106, 19575-19580 (1957).</li><li>Dunaevsky, A., Tashiro, A., Majewska, A., Mason, C., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+spine+motility+in+the+mammalian+central+nervous+system.">Developmental regulation of spine motility in the mammalian central nervous system.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 96, 13438-13443 (1999).</li><li>Lichtman, J. W., Conchello, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+microscopy.">Fluorescence microscopy.</a> Nat Methods. 2, 910-919 (2005).</li><li>Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+spines+and+dendrites+distribute+dye+evenly.">Do spines and dendrites distribute dye evenly.</a> Trends Neurosci. 27, 445-446 (2004).</li></ol>

तकनीक वृक्ष के समान रीढ़ आकारिकी, रैखिक और या तो निश्चित या जीने प्राथमिक cortical न्यूरॉन्स में घनत्व गतिशीलता की विस्तृत मात्रात्मक विश्लेषण के लिए ऊपर वर्णित बाद synaptic तंत्र है कि neuropathologies करने के लिए योगदान...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </th></tr><tr><td> 18 मिमी दौर कवर गिलास 1.5 सं. </td><td> वार्नर उपकरण </td><td> 64-0714 (CS-18R15) </td><td></td></tr><tr><td> 22 मिमी वर्ग कवर गिलास 1.5 सं. </td><td> वार्नर उपकरण </td><td> 64-0721 (CS-22S15) </td><td></td></tr><tr><td> पाली-D-Lysine </td><td> सिग्मा </td><td> पी - 0,899 </td><td> मेगावाट 70 ~ 150 केडीए </td></tr><tr><td> Neurobasal मीडिया </td><td> Invitrogen </td><td> 21103049 </td><td></td></tr><tr><td> B27 </td><td> Invitrogen </td><td> 17504044 </td><td></td></tr><tr><td> Glutamine </td><td> Invitrogen </td><td> 21051024 </td><td></td></tr><tr><td> पेनिसिलिन - स्ट्रेप्टोमाइसिन </td><td> Invitrogen </td><td> 15140148 </td><td></td></tr><tr><td> डी, एल APV (एपी 5) </td><td> चढ़ाई वैज्ञानिक </td><td> ASC-004 </td><td></td></tr><tr><td> 2000 Lipofectamine </td><td> Invitrogen </td><td> 11668019 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 11965092 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> MediaTech Cellgro </td><td> 1 25 060--सी </td><td> 1M, 7 पीएच </td></tr><tr><td> Formaldehyde समाधान </td><td> ईएमडी रसायन </td><td> FX0415-5 </td><td> 36%, प्रोटोकॉल ग्रेड </td></tr><tr><td> सामान्य बकरी सीरम </td><td> VWR </td><td> 100188-514 </td><td> जैक्सन Immunoresearch लैब्स </td></tr><tr><td> Triton एक्स - 100 </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> AC21568-2500 </td><td> Acros ऑर्गेनिक्स </td></tr><tr><td> एलेक्सा 488 विरोधी माउस बकरी (एच एल +) अत्यधिक आईजीजी पार adsorbed Fluor </td><td> Invitrogen </td><td> एक - 11,029 </td><td></td></tr><tr><td> एलेक्सा 488 बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी (एच एल +) अत्यधिक * पार adsorbed * Fluor </td><td> Invitrogen </td><td> एक - 11,034 </td><td></td></tr><tr><td> गोल्ड antifade अभिकर्मक लम्बा </td><td> Invitrogen </td><td> P36934 </td><td> विशेष पैकेजिंग </td></tr><tr><td> संलग्न इमेजिंग मंच कक्ष </td><td> वार्नर </td><td> आर सी 30HV </td><td></td></tr><tr><td> तापमान नियंत्रक इकाई </td><td> वार्नर </td><td> TC-344B </td><td></td></tr><tr><td> MetaMorph </td><td> यूनिवर्सल इमेजिंग </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of dendritic spine morphology in cultured cns neurons

मस्तिष्क के भीतर उत्तेजक कनेक्शन के बहुमत के वृक्ष के समान spines साइटों रहे हैं, और synapses के बाद synaptic डिब्बे फार्म. इन संरचनाओं actin में धनी होते हैं और अत्यधिक गतिशील होना दिखाया गया है. शास्त्रीय Hebbian के रूप में अच्छी तरह के रूप में plasticity के neuromodulatory संकेतों के जवाब में, वृक्ष के समान spines के आकार और संख्या है, जो तंत्रिका सर्किट के शोधन और प्रसंस्करण और मस्तिष्क के भीतर सूचना के भंडारण के लिए महत्वपूर्ण माना जाता है बदल सकते हैं. वृक्ष के समान spines के भीतर, प्रोटीन का एक जटिल नेटवर्क actin के वृक्ष के समान रीढ़ morphology और संख्या के नियंत्रण के लिए अनुमति cyctoskeleton के साथ कोशिकी संकेतों लिंक. Neuropathological अध्ययन दिखा दिया है कि रोग राज्यों के एक नंबर, autism स्पेक्ट्रम विकारों के लिए एक प्रकार का पागलपन से लेकर, असामान्य वृक्ष के समान रीढ़ आकारिकी या संख्याएँ प्रदर्शित. इसके अलावा, हाल ही में आनुवंशिक अध्ययन कई जीन है कि synaptic प्रोटीन सांकेतिक शब्दों में बदलना में परिवर्तन की पहचान की है, सुझाव है कि इन प्रोटीनों न्यायपालिका रीढ़ plasticity है कि, भाग में, इन विकारों के pathophysiology आबाद करने के लिए योगदान कर सकते हैं करने के लिए अग्रणी. आदेश में वृक्ष के समान रीढ़ morphologies / संख्या को नियंत्रित करने में इन प्रोटीनों की संभावित भूमिका का अध्ययन करने के लिए, सुसंस्कृत cortical न्यूरॉन्स के उपयोग के कई लाभ प्रदान करता है. सबसे पहले, इस प्रणाली तय कोशिकाओं में वृक्ष के समान spines के उच्च संकल्प इमेजिंग के रूप में के रूप में अच्छी तरह से जीवित कोशिकाओं के समय चूक इमेजिंग के लिए अनुमति देता है. दूसरे, इन विट्रो प्रणाली में इस उत्परिवर्ती प्रोटीन, shRNA constructs द्वारा पछाड़ना या औषधीय उपचार की अभिव्यक्ति के द्वारा प्रोटीन समारोह के आसान हेरफेर के लिए अनुमति देता है. इन तकनीकों में शोधकर्ताओं रोग जुड़े प्रोटीन की भूमिका काटना और भविष्यवाणी करने के लिए कैसे इन प्रोटीनों की म्यूटेशनों vivo में कार्य कर सकते हैं शुरू करने के लिए अनुमति देते हैं.

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Analysis of Dendritic Spine Morphology in Cultured CNS Neurons

कई हाल ही के अध्ययन synaptic प्रोटीन मस्तिष्क की विकृतियों के साथ जुड़े में म्यूटेशन की पहचान की है. प्राथमिक सुसंस्कृत cortical न्यूरॉन्स वृक्ष के समान रीढ़ morphology और गतिशीलता पर इन रोग से जुड़े प्रोटीन के प्रभाव की जांच करने में महान लचीलापन प्रदान करते हैं.

संवर्धित सीएनएस न्यूरॉन्स में वृक्ष के समान रीढ़ आकृति विज्ञान के विश्लेषण

Dendritic spines are the sites of the majority of excitatory connections within the brain, and form the post-synaptic 
compartment of synapses. These ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Automated Sholl Analysis of Digitized Neuronal Morphology at Multiple Scales

एकाधिक लीब्रा डिजीटल Neuronal आकृति विज्ञान के स्वचालित Sholl विश्लेषण

Neuronal morphology plays a significant role in determining how neurons function and communicate1-3.  Specifically, it affects the ability of neurons to ...

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

Fluorescence Recovery After Photobleaching FRAP of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

Photobleaching के बाद प्रतिदीप्ति रिकवरी (FRAP) संवर्धित hippocampal न्यूरॉन्स के वृक्ष के समान spines में प्रतिदीप्ति प्रोटीन के टैग की गईं

FRAP has been used to quantify the mobility of GFP-tagged proteins. Using a strong excitation laser, the fluorescence of a GFP-tagged protein is bleached ...

Quantitative Analysis of Synaptic Vesicle Pool Replenishment in Cultured Cerebellar Granule Neurons using FM Dyes

संवर्धित अनुमस्तिष्क ग्रेन्युल न्यूरॉन्स एफएम रंगों का उपयोग करने में Synaptic पुटिका पूल पुनःपूर्ति के मात्रात्मक विश्लेषण

After neurotransmitter release in central nerve terminals, SVs are rapidly retrieved by endocytosis.  Retrieved SVs are then refilled with ...

Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons

संवर्धित सहानुभूति न्यूरॉन्स में वृक्ष के समान विकास उत्प्रेरण

The shape of the dendritic arbor determines the total synaptic input a neuron can receive 1-3, and influences the types and distribution of these inputs ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

Organotypic टुकड़ा संस्कृतियों में Purkinje सेल वृक्ष के समान आकृति विज्ञान के विश्लेषण

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

संवर्धित वयस्क पृष्ठीय रूट नाड़ीग्रन्थि न्यूरॉन्स साथ Axon पुनर्जनन की आनुवंशिक अध्ययन

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

ग्लूटामेट और गाबा की फास्ट माइक्रो योणोगिनेसिस: Synaptic एकता की जांच के लिए एक उपयोगी उपकरण

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Imaging Dendritic Spines of Rat Primary Hippocampal Neurons using Structured Illumination Microscopy

संरचित रोशनी माइक्रोस्कोपी का उपयोग चूहा प्राथमिक hippocampal न्यूरॉन्स के वृक्ष के समान spines इमेजिंग

Dendritic spines are protrusions emerging from the dendrite of a neuron and represent the primary postsynaptic targets of excitatory inputs in the brain. ...

An Engulfment Assay: A Protocol to Assess Interactions Between CNS Phagocytes and Neurons

एक घिराव परख: सीएनएस फ़ैगोसाइट और न्यूरॉन्स के बीच बातचीत का आकलन करने के लिए एक प्रोटोकॉल

Phagocytosis is a process in which a cell engulfs material (entire cell, parts of a cell, debris, etc.) in its surrounding extracellular environment and ...

Analyzing Dendritic Morphology in Columns and Layers

कॉलम और परतों में वृक्ष के समान आकृति विज्ञान का विश्लेषण

In many regions of the central nervous systems, such as the fly optic lobes and the vertebrate cortex, synaptic circuits are organized in layers and ...