Name: evisceration of mouse vitreous and retina for proteomic analyses
Uploaded: 2011-04-03T15:00:00
Duration: 2 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses at JoVE.com

وقدم التمويل من جانب النضال من أجل البصر والبحوث للوقاية من العمى.

1. الجزء الأمامي للتشريح. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> واستوعب الأنسجة الصلبة الخلفي لحوف مع forcep 0،22 والعالم (كرة العين) واستقرت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويستخدم شفرة المجهرية لإجراء شق طولي في القرنية من حوف الى حوف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم استخدام A 0.12 COLIBRI forcep لفهم في شق القرنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم امتصاص السائل الغرفة الأمامية مع الرمح ويك - سيل الجراحية. </li></ol> 2. عدسة نزع الأحشاء. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويستخدم 0.12 COLIBRI forcep استيعاب القرنية لتحقيق الاستقرار في العالم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم إدخال الإبرة غرامة صاحب المنحني (أو منحنية ملقط خلع الملابس) وراء العدسة باتجاه الجانب الخلفي من الكرة الأرضية. مغلق جزئيا حامل الإبرة ، وانسحبت إلى الأمام. يتم تطبيق الضغط باستخدام ملقط على السطح الخارجي للالصلبة ، والذي يدفع إلى الأمام من خلال عدسة شق القرنية بينما يترك جدار العين سليمة. ويظهر على شكل زجاجي شفاف والجل هو ملتصق جزئيا إلى العدسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم وضع عدسة النسيج الزجاجي الطرد المركزي في أنبوب تصفية تحتوي على 20 microliters من الكوكتيل مثبط البروتياز (روش) الذائب في برنامج تلفزيوني. </li></ol> 3. نزع الأحشاء الشبكية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستمرار في تحقيق الاستقرار في العالم مع 0،12 ملقط COLIBRI استيعاب شق القرنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع غرامة حامل إبرة مقوسة (منحنية أو ملقط خلع الملابس) والخلفي بكثير من العالم ممكن ، بالقرب من العصب البصري. مغلق جزئيا حامل الإبرة ، وانسحبت إلى الأمام. يتم تطبيق الضغط باستخدام ملقط على السطح الخارجي للالصلبة ، والتي يدفع الشبكية إلى الأمام من خلال شق القرنية. ويظهر على شكل زجاجي شفاف هلام ملتصق على شبكية العين. شبكية العين هي بمثابة تصور الأنسجة الصفراء أوعية دموية. يمكن مقشر أي شرائط من النسيج المصطبغة بعيدا بالملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم وضع نسيج الشبكية ، في الأنبوب الزجاجي الطرد المركزي تصفيته الأنسجة التي تحتوي على عدسة الزجاجي. </li></ol> 4. تصفية الطرد المركزي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع أنبوب الطرد المركزي التي تمت تصفيتها في جهاز للطرد المركزي الفوق. تدور G 14000 س لمدة 12 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح في eluant من مجلس النواب ، والذي هو الزجاجي. شبكية العين يبقى في الغرفة العليا. ويمكن استخدام هذه العينات لدراسات البروتين. </li></ol> 5. ممثل النتائج وقد تم تحليل عينات الزجاجي بواسطة SDS - PAGE (الشكل 2). كما استخدمت عينات لفحص النشاط الأنزيمي (الشكل 3). <img src="/files/ftp_upload/2795/2795fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. ماوس مخطط العين. مستعرضة التخطيطي للعين البشرية والفأر يظهر حجم أصغر نسبيا الزجاجي في العين بسبب العدسة الماوس الأكبر. <img src="/files/ftp_upload/2795/2795fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2. أحد الأبعاد SDS - PAGE من الماوس الزجاجي والشبكية. ملامح من البروتين الزجاجي الماوس ، 13.6 ملغ / مل (حارة 1) ، وشبكية العين ، 11.35 ملغ / مل (حارة 2). تم تنفيذ الكهربائي للهلام في 150 كيلو فولت لمدة 45 دقيقة ، وصمة عار ملطخة فلامنغو هلام الفلورسنت وتصور باستخدام نظام التصوير VersaDoc (BioRad ، هرقل ، كاليفورنيا). <img src="/files/ftp_upload/2795/2795fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3. نشاط انزيم ديسموتاز الفائق (الاحمق) في الماوس والزجاجي الإنسان. وقد أجريت قياس النشاط SOD الإجمالي (SOD النشاط اللونية aasay عدة ، # AB65354 ، Abcam ، المؤتمر الوطني العراقي ، كامبريدج ، MA) في الجسم الزجاجي والشبكية التي جمعتها سلب من الفئران البيضاء وديسيبل. وتمت مقارنة هذا النشاط في الهيئة العامة للسدود الإنسان الأساسية الزجاجي والشبكية البشرية التي جمعت من تشريح العين البشرية المانحة لتحديد نشاط نسبي. وقد يستنشق يدويا مخفف عينات الزجاجي باستخدام إبرة عيار 23 و 11 و تم جمعها من قبل شبكية العين المزهرة العين وقطع النسيج بعيدا عن التعقيد RPE / المشيمية. على الرغم من أن الفحص لا يميز بين الأشكال الإسوية الهيئة العامة للسدود ، ونشاط الهيئة العامة للسدود الزجاجي ومن المرجح أن تعكس SOD3 ، لأنه هو الوحيد خارج الخلية شكل الإسوي 12 SOD شبكية العين والنشاط من المرجح أن تعكس جميع الأشكال الإسوية الهيئة العامة للسدود الثلاثة : SOD1 داخل الخلايا ، SOD2 الميتوكوندريا ، وخارج الخلية SOD3 12 للحصول على المقايسات الأنزيمية حساسة للغاية ، بما في ذلك هذا الاختبار الهيئة العامة للسدود ، وإمكانية التلوث المتبادل من البروتينات غير ممكن ، ويتطلب مزيدا من الدراسة. أشرطة الخطأ تمثل SEM.

<ol>
	<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel.">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Prog. Retin. Eye Res. 19, 323-344 (2000).</li><li>Gao, B. B., Chen, X., Timothy, N., Aiello, L. P. &. a. m. p. ;. a. m. p., Feener, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+vitreous+proteome+in+diabetes+without+diabetic+retinopathy+and+diabetes+with+proliferative+diabetic+retinopathy.">Characterization of the vitreous proteome in diabetes without diabetic retinopathy and diabetes with proliferative diabetic retinopathy.</a> J. Proteome Res. 7, 2516-2525 (2008).</li><li>Izuta, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+SOD+and+VEGF+are+increased+in+vitreous+bodies+from+proliferative+diabetic+retinopathy+patients.">Extracellular SOD and VEGF are increased in vitreous bodies from proliferative diabetic retinopathy patients.</a> Mol. Vis. 15, 2663-2672 (2009).</li><li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+pharmacologic+vitreolysis.">Molecular biology of pharmacologic vitreolysis.</a> Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 103, 473-494 (2005).</li><li>Smith, R. S., Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Systematic evaluation of the mouse eye: Anatomy, pathology, and biomethods. , 161-195 (2002).</li><li>Ihanamaki, T., Metsaranta, M., Rintala, M., Vuorio, E., Sandberg-Lall, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+abnormalities+in+transgenic+mice+harboring+mutations+in+the+type+II+collagen+gene.">Ocular abnormalities in transgenic mice harboring mutations in the type II collagen gene.</a> Eur. J. Ophthalmol. 6, 427-435 (1996).</li><li>Kaarniranta, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+Stickler's+syndrome:+ocular+phenotype+of+mice+carrying+a+targeted+heterozygous+inactivation+of+type+II+(pro)collagen+gene+(Col2a1.">A mouse model for Stickler's syndrome: ocular phenotype of mice carrying a targeted heterozygous inactivation of type II (pro)collagen gene (Col2a1.</a> Exp. Eye Res. 83, 297-303 (2006).</li><li>Marneros, A. G. &. a. m. p. ;. a. m. p., Olsen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+iris+abnormalities+in+collagen+XVIII/endostatin+deficient+mice+with+similarities+to+human+pigment+dispersion+syndrome.">Age-dependent iris abnormalities in collagen XVIII/endostatin deficient mice with similarities to human pigment dispersion syndrome.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 2367-2372 (2003).</li><li>Martin, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+persistent+hyperplastic+primary+vitreous+in+mice+lacking+the+arf+tumor+suppressor+gene.">Pathogenesis of persistent hyperplastic primary vitreous in mice lacking the arf tumor suppressor gene.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 3387-3396 (2004).</li><li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy.">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene. Ther. Mol. Biol. 11B, 229-262 (2007).</li><li>Skeie, J. M., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Human+Vitreous+Body+Elements+for+Proteomic+Analysis.">Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis.</a> J Vis Exp. , (2011).</li><li>Ciechanowski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+synthesis+is+not+the+reason+for+decreased+activity+of+extracellular+superoxide+dismutase+in+patients+with+diabetes.">Impaired synthesis is not the reason for decreased activity of extracellular superoxide dismutase in patients with diabetes.</a> Arch Med Res. 36, 148-153 (2005).</li></ol>

وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للرابطة للبحوث والرؤية في بيان العيون لاستخدام الحيوانات في البحوث البصريات والرؤية.

الفئران المعدلة وراثيا تشكل نموذجا هاما للتحقيق في مرض شبكية العين والشبكية. 60-10 الجسم الزجاجي الماوس ، ولكن ، وتضم نسبة أصغر بكثير من العين بالمقارنة مع الزجاجي الإنسان نظرا لعدسة العين الكبيرة في الماوس. وهذا يجعل من 5 من الصعب عزل وتنقية الجسم الزجاجي الماوس. وفهم التغيرات المرتبطة بروتين الجسم الزجاجي خلال أمراض مثل اعتلال الشبكية السكري التكاثري ، المرتبطة بالعمر الضمور البقعي ، التهاب القزحية ، وانفصال الشبكية تعطي نظرة ثاقبة الآليات التي من خلالها التقدم. تصور هذا البروتوكول التجريبي يوفر وسيلة للحصول على وتنقية الجسم الزجاجي الماوس ، مع تعظيم العائد لتحليل البروتين الأنزيمي والبروتين.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم </th><th> شركة </th><th> رقم كتالوج </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> 15 درجة ، BD بيفر المجهرية بليد </td><td> بيكتون ديكنسون ، </td><td> 374881 </td><td></td></tr><tr><td> برنامج تلفزيوني ، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td></td></tr><tr><td> 0.22 - الجميلة Castroviejo التخييط الملقط </td><td> STORZ Ophthalmics </td><td> E1805 </td><td></td></tr><tr><td> 0.12 COLIBRI ملقط </td><td> STORZ Ophthalmics </td><td> 2 / 132 </td><td></td></tr><tr><td> Microcon الطرد المركزي تصفية Ultracel YM YM - 100 أو 50 </td><td> ميليبور </td><td> 42412 ، 42415 </td><td></td></tr><tr><td> SOD كيت نشاط الفحص اللونية </td><td> Abcam </td><td> Ab65354 </td><td></td></tr><tr><td> ويك ، سل الرماح الجراحية </td><td> ميدترونيك </td><td> 0008680 </td><td></td></tr><tr><td> مثبط البروتياز الكوكتيل </td><td> روش </td><td> 11 836 170 001 </td><td></td></tr><tr><td> فلامنغو الفلورية هلام وصمة عار </td><td> الحيوي راد </td><td> 161-04910 </td><td></td></tr></tbody></table>

evisceration of mouse vitreous and retina for proteomic analyses

في حين برز الماوس الشبكية كنموذج وراثي لمرض الشبكية الهامة الموروثة ، والزجاجي الماوس لا يزال يتعين استكشافها. والزجاجي هو مصفوفة مائي كبير خارج الخلية التي تغمر فيها العين الشبكية وكذلك البروتينات خارج المقلة تتراكم أثناء المرض. التفاعلات بين الشاذ 1-3 الزجاجي والشبكية تكمن وراء العديد من الأمراض مثل انفصال الشبكية ، اعتلال الشبكية السكري التكاثري ، التهاب القزحية ، وvitreoretinopathy التكاثري. 1 (4) ، والماوس الزجاجي النسبية حجم أصغر بكثير من الزجاجي الإنسان (الشكل 1) ، منذ ما يقرب من عدسة الماوس تحتل 75 ٪ من العين في 5 وهذا جعل من الدراسات البيوكيميائية الزجاجي الماوس الصعبة. في هذه المقالة الفيديو ، نقدم تقنية لتشريح وعزل الماوس الزجاجي من شبكية العين ، مما سيتيح استخدام نماذج الماوس المعدلة وراثيا بشكل أكثر وضوحا لتحديد دور هذه المصفوفة خارج الخلية في تطور أمراض الشبكية.

Watch this Scientific Journal Video about Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses at JoVE.com

Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses

تقنية يوضح تشريح استئصاله من الجسم الزجاجي والشبكية ، وعدسة العين من الماوس ، والفصل عن طريق الطرد المركزي ، وتوصيف المقايسات مع البروتين.

نزع الأحشاء من الشبكية والسائل الزجاجي ماوس للتحليلات البروتين

While the mouse retina has emerged as an important genetic model for inherited retinal disease, the mouse vitreous remains to be explored. The vitreous is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Horizontal Slice Preparation of the Retina

إعداد شريحة الأفقي للشبكية

Traditionally the vertical slice and the whole-mount preparation of the retina have been used to study the function of retinal circuits. However, many of ...

Electrophoretic Separation of Proteins

الكهربي فصل البروتينات

Electrophoresis is used to separate complex mixtures of proteins (e.g., from cells, subcellular fractions, column fractions, or immunoprecipitates), to ...

Immunoblot Analysis

تحليل طخة مناعية

Immunoblotting (western blotting) is a rapid and sensitive assay for the detection and characterization of proteins that works by exploiting the ...

Staining Proteins in Gels

تلطيخ البروتينات في الهلام

Following separation by electrophoretic methods, proteins in a gel can be detected by several staining methods. This unit describes protocols for ...

Digital Microfluidics for Automated Proteomic Processing

الرقمية على microfluidics لتصنيع البروتين الآلي

Clinical proteomics has emerged as an important new discipline, promising the discovery of biomarkers that will be useful for early diagnosis and ...

Toxin Induction and Protein Extraction from Fusarium spp. Cultures for Proteomic Studies

Toxin Induction and Protein Extraction from Fusarium spp. Cultures for Proteomic Studies

التعريفي واستخراج السم من البروتين فيوزاريوم النيابة. الثقافات للدراسات البروتين

Fusaria are filamentous fungi able to produce different toxins. Fusarium mycotoxins such as deoxynivalenol, nivalenol, T2, zearelenone, fusaric acid, ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

في الجسم الحي التصوير والعلاجات العلاجية في الفأر نموذج مثلي من سرطان المبيض

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Isolation of Translating Ribosomes Containing Peptidyl-tRNAs for Functional and Structural Analyses

عزلة ريبوسوم ترجمة المتضمن ببتيديل - tRNAs للتحليلات الوظيفية والهيكلية

Recently, structural and biochemical studies have detailed many of the molecular events that occur in the ribosome during inhibition of protein synthesis ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

في الجسم الحي من Electroporation Morpholinos في شبكية العين اسماك الزرد الكبار

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

Trajectory Data Analyses for Pedestrian Space-time Activity Study

مسار مشي لبيانات التحاليل دراسة النشاط الفضائي في الوقت

It is well recognized that human movement in the  spatial and temporal dimensions has direct influence on disease transmission1-3.  An infectious disease ...