Name: whole mount in situ hybridization of e8.5 to e11.5 mouse embryos
Uploaded: 2011-10-10T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R21MH082360 (BGC) وR01HD056315 (إدارة الموارد الطبيعية)، وكذلك في جامعة جورجيا.

1. الجيل Riboprobe عبر النسخ في المختبر <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد المنتجات PCR لفي قوالب النسخ المختبر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصميم الاشعال PCR مع تسلسل النسخ بالعاثية المروج بنتيجة 5 في بلدانهم....

<ol>
	<li>Divjak, M., Glare, E. M., Walters, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+non-radioactive+in+situ+hybridization+in+human+airway+tissues:+use+of+PCR-generated+templates+for+synthesis+of+probes+and+an+antibody+sandwich+technique+for+detection+of+hybridization.">Improvement of non-radioactive in situ hybridization in human airway tissues: use of PCR-generated templates for synthesis of probes and an antibody sandwich technique for detection of hybridization.</a> J. Histochem. Cytochem. 50, 541-548 (2002).</li><li>Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 361-373 (1993).</li><li>Logel, J., Dill, D., Leonard, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+cRNA+probes+from+PCR-generated+DNA.">Synthesis of cRNA probes from PCR-generated DNA.</a> Biotechniques. 13, 604-610 (1992).</li><li>Maddox, D. M., Condie, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+expression+of+a+glutamate+decarboxylase+gene+in+multiple+non-neural+tissues+during+mouse+development.">Dynamic expression of a glutamate decarboxylase gene in multiple non-neural tissues during mouse development.</a> BMC Dev Biol. 1, 1-1 (2001).</li><li>Conlon, R. A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exogenous+retinoic+acid+rapidly+induces+anterior+ectopic+expression+of+murine+Hox-2+genes+in+vivo.">Exogenous retinoic acid rapidly induces anterior ectopic expression of murine Hox-2 genes in vivo.</a> Development. 116, 357-368 (1992).</li><li>Krauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+pax[zf-a]:+a+paired+box-containing+gene+expressed+in+the+neural+tube.">Zebrafish pax[zf-a]: a paired box-containing gene expressed in the neural tube.</a> EMBO J. 10, 3609-3619 (1991).</li><li>Hemmati-Brivanlou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+specific+mRNAs+in+Xenopus+embryos+by+whole-mount+in+situ+hybridization.">Localization of specific mRNAs in Xenopus embryos by whole-mount in situ hybridization.</a> Development. 110, 325-330 (1990).</li><li>Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization:+an+improved+whole-mount+method+for+Xenopus+embryos.">In situ hybridization: an improved whole-mount method for Xenopus embryos.</a> Methods Cell Biol. 36, 685-695 (1991).</li><li>Herrmann, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+pattern+of+the+Brachyury+gene+in+whole-mount+TWis/TWis+mutant+embryos.">Expression pattern of the Brachyury gene in whole-mount TWis/TWis mutant embryos.</a> Development. 113, 913-917 (1991).</li><li>Conlon, R. A., Herrmann, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+postimplantation+embryo+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to postimplantation embryo whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 373-383 (1993).</li><li>Parr, B. A., Shea, M. J., Vassileva, G., McMahon, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Wnt+genes+exhibit+discrete+domains+of+expression+in+the+early+embryonic+CNS+and+limb+buds.">Mouse Wnt genes exhibit discrete domains of expression in the early embryonic CNS and limb buds.</a> Development. 119, 247-261 (1993).</li><li>Rosen, B., Beddington, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-mount+in+situ+hybridization+in+the+mouse+embryo:+gene+expression+in+three+dimensions.">Whole-mount in situ hybridization in the mouse embryo: gene expression in three dimensions.</a> Trends Genet. 9, 162-167 (1993).</li><li>Quiring, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+expression+screening+by+automated+whole-mount+in+situ+hybridization.">Large-scale expression screening by automated whole-mount in situ hybridization.</a> Mech. Dev. 121, 971-976 (2004).</li><li>Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+in+situ+screen+provides+molecular+evidence+for+the+induction+of+eye+anterior+segment+structures+by+the+developing+lens.">A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens.</a> Dev. Biol. 231, 63-76 (2001).</li><li>Neidhardt, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+screen+for+genes+controlling+mammalian+embryogenesis,+using+high-throughput+gene+expression+analysis+in+mouse+embryos.">Large-scale screen for genes controlling mammalian embryogenesis, using high-throughput gene expression analysis in mouse embryos.</a> Mech. Dev. 98, 77-94 (2000).</li><li>Gordon, J., Bennett, A. R., Blackburn, C. C., Manley, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gcm2+and+Foxn1+mark+early+parathyroid-+and+thymus-specific+domains+in+the+developing+third+pharyngeal.">Gcm2 and Foxn1 mark early parathyroid- and thymus-specific domains in the developing third pharyngeal.</a> 103, 141-143 (2001).</li></ol>

وقد تم تكييف الأساليب المبينة في هذا البروتوكول من عدد من المصادر المختلفة والأمثل لجبل كله E8.5-E11.5 الأجنة اليوم الماوس القديمة. طرق جبل بأكمله في الموقع التهجين الأجنة الفقارية وأول ما ظهرت في 1990s في وقت مبكر 2،5-12. وقد تم تكييف هذا البروتوكول أساسا من الطرق ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم </th><th> نوع </th><th> شركة </th><th> كتالوج رقم </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> Digoxigenin-11-يوريدين-5&#39;-ثلاثي الفوسفات </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 11209256910 </td><td></td></tr><tr><td> ريبونوكليوزيد ثلاثي الفوسفات مجموعة </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 11277057001 </td><td></td></tr><tr><td> أعمدة الدوران السريع لتنقية RNA رديولبلد </td><td> تزويد </td><td> روش </td><td> 11274015001 </td><td></td></tr><tr><td> T7 بوليميريز RNA </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 10881767001 </td><td></td></tr><tr><td> SP6 الحمض النووي الريبي بوليميراز </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 10810274001 </td><td></td></tr><tr><td> T3 RNA بوليميراز </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 11031163001 </td><td></td></tr><tr><td> CTP، [α-32P] - 800Ci/mmol 10mCi/ml، 250 μCi </td><td> كاشف </td><td> بيركن إلمر </td><td> BLU008X250UC </td><td></td></tr><tr><td> الدناز I المؤتلف، ريبونوكلياز خالية </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 4716728001 </td><td></td></tr><tr><td> اليوريا، عديم اللون إلى الأبيض بلورات أو مسحوق بلوري </td><td> كاشف </td><td> الصياد </td><td> BP169-500 </td><td></td></tr><tr><td> هلام العازلة تحميل </td><td> كاشف </td><td> Ambion </td><td> AM8547 </td><td></td></tr><tr><td> Hybond-N +، أميرشام </td><td> تزويد </td><td> GE للرعاية الصحية </td><td> RPN82B </td><td></td></tr><tr><td> UV Stratalinker 2400 </td><td> معدات </td><td> Stratagene </td><td></td><td></td></tr><tr><td> اثيل pyrocarbonate </td><td> كاشف </td><td> سيجما </td><td> D5758-100ML </td><td></td></tr><tr><td> الهيبارين الصوديوم </td><tد&gt; الكاشف </td><td> أكروس </td><td> 41121-0010 </td><td></td></tr><tr><td> بيروكسيد الهيدروجين في الماء 30٪ </td><td> كاشف </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP2633-500 </td><td></td></tr><tr><td> Gluteraldehyde، 8٪ EM الصف </td><td> كاشف </td><td> Polysciences </td><td> 0/710 </td><td> استخدام بحذر وفقا لتعليمات تصنيع لل </td></tr><tr><td> منع كاشف </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 11096176001 </td><td> جعل الأسهم في 5٪ وتخزينها في -20 درجة مئوية </td></tr><tr><td> بروتين K </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 3115852001 </td><td></td></tr><tr><td> ريبونوكلياز A </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 10109142001 </td><td> جعل إلى 10 مغ / مل الأسهم وتخزينها في -20 درجة C. </td></tr><tr><td> ريبونوكلياز T1 </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 10109193001 </td><td></td></tr><tr><td> ULtrapure الفورماميد </td><td> كاشف </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15515-026 </td><td></td></tr><tr><td> الليفاميزول هيدروكلوريد </td><td> كاشف </td><td> ICN Biomedicals. المؤتمر الوطني العراقي </td><td> 155228 </td><td></td></tr><tr><td> حمض النووي الريبي من الخميرة المستخفية، نوع VI </td><td> كاشف </td><td> سيجما </td><td> R6625 </td><td> الفينول / كلوروفورم استخراج عدة مرات وعجلت، معلق في DEPC-dH2O وتخزينها في -20 ° C </td></tr><tr><td> مكافحة Digoxigenin-AP شظايا فاب </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 11093274910 </td><td></td></tr><tr><td> BM الركيزة AP الأرجواني، مما عجل. الجاهزة للاستخدام الحل. </td><td> كاشف </td><td> روش </td><td> 11 442 074 001 </td><td></td></tr><tr><td> ، واضح 4mL، مغلق الأعلى فيال التخزين، راحة كيت </td><td> تزويد </td><td> العلمية الوطنية </td><td> B7800-2 </td><td></td></tr><tr&gt; <td> يهز N فرن خبز التهجين </td><td> معدات </td><td> Boekel العلمية </td><td> 136400 </td><td></td></tr><tr><td> خزعة متأكد تك </td><td> تزويد </td><td> Fisherbrand </td><td> 15-200-402C </td><td></td></tr><tr><td> Paraplast تضمين النسيج زائد المتوسطة </td><td> كاشف </td><td> Fisherbrand </td><td> 23-021-400 </td><td></td></tr><tr><td> قشر-A-طريقة التخلص منها تضمين قوالب البلاستيك النسيج </td><td> تزويد </td><td> Polysciences </td><td> 18646A </td><td></td></tr><tr><td> Colorfrost الشرائح بالاضافة الى مجهر </td><td> تزويد </td><td> Fisherbrand </td><td> 12-550-17 </td><td></td></tr><tr><td> الأحمر سريع النووية </td><td> كاشف </td><td> سيجما </td><td> N8002 </td><td></td></tr><tr><td> Cytoseal 60 </td><td> كاشف </td><td> ريتشارد ألان-العلمية </td><td> 8310-16 </td><td></td></tr></tbody></table>

whole mount in situ hybridization of e8.5 to e11.5 mouse embryos

جبل بأكمله في الموقع التهجين هو نهج مفيدة للغاية لتحديد أنماط التعبير الجيني في الأجنة. والإجراءات في الموقع التهجين هي طويلة وتطالب تقنيا مع خطوات هامة المتعددة التي تسهم مجتمعة في نوعية النتيجة النهائية. يصف هذا البروتوكول في العديد من التفاصيل الخطوات الرئيسية لتحسين مراقبة الجودة ووضع العلامات التحقيق الأداء. عموما، لدينا بروتوكول يقدم وصفا مفصلا من الخطوات الحاسمة اللازمة للحصول على نتائج عالية الجودة بتكاثر. أولا، نحن تصف جيل من (DIG) تحقيقات digoxygenin RNA صفت في النسخ عن طريق المختبر من القوالب التي تم إنشاؤها بواسطة الحمض النووي PCR. نحن وصف ثلاثة فحوصات مراقبة الجودة الحرجة لتحديد مقدار والنزاهة والنشاط المحدد للتحقيقات DIG-المسمى. هذه الخطوات مهمة لتوليد تحقيقا للحساسية كافية لكشف mRNAs والمحلية في جنين فأر كله.وبالإضافة إلى ذلك، نحن تصف طرق لتثبيت وتخزين الأجنة اليوم E8.5-E11.5 الماوس القديمة في الموقع التهجين. ثم، نحن تصف طرق مفصلة لعملية الهضم محدودة K بروتين من الأجنة ميهت تليها تفاصيل عن ظروف التهجين، يغسل بعد التهجين والعلاج لإزالة ريبونوكلياز غير محددة التهجين التحقيق. يتم استخدام الأجسام المضادة AP-مترافق لتصور المسمى التحقيق والكشف عن نمط التعبير من نص الذاتية. وتظهر نتائج ممثلة من التجارب الناجحة والتجارب دون المستوى الأمثل نموذجية.

Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos at JoVE.com

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

هذا كله جبل<em&gt; في الموقع</em&gt; بروتوكول التهجين يناقش الخطوات الحاسمة التي تضمن نتائج ذات جودة عالية للتكرار للدراسات التعبير الجيني في الأجنة اليوم E8.5-E11.5 الماوس القديمة.

جبل كله<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين من E8.5 لأجنة الفئران E11.5

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Research

JoVE Journal

Biology

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

الجامعة جبل مزدوجة في الموقع التهجين لافراخ الدجاج في وقت مبكر

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

طريقة لتلطيخ جسم الجامع في جبل الفرخ

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

الزرد الجامع جبل الرفيع قرار مزدوج نيون في الموقع التهجين

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

جبل به الجامعة في الموقع تهجين ارتباط البيولوجيا الجزيئية والعضوي

Whole mount in situ hybridization (WISH) is a common technique in molecular biology laboratories used to study gene expression through the localization of ...

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

إنتاجية عالية في الموقع أسلوب التهجين لتوصيف أنماط التعبير مرنا في الفأر الجنينية السفلى المسالك البولي التناسلي

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

كله جبل RNA نيون<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأجنة

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين في الأجنة جبل الجامعة وعلم الأنسجة الخلية مقتبس عن Elasmobranchs البحرية

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

التصور والتحليل من جزيئات الرنا المرسال عن طريق الإسفار<em&gt; في الموضع</em&gt; التهجين في<em&gt; خميرة الخباز</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

ارتفاع القرار جبل بأكمله<em&gt; في الموضع</em&gt; التهجين داخل الأجنة الزرد لدراسة التعبير الجيني وظيفة

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...