Name: in vitro reconstitution of the active t. castaneum telomerase
Uploaded: 2011-07-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase at JoVE.com

قدم هذا البحث هنا كان مدعوما من قبل وزارة الصحة ولاية بنسلفانيا ، واليسون الطبية ، والخامس والأسس والزمرد.

1. التعبير عن المؤتلف TERT التكنيشيوم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطعيم 6 لتر من وسائل الاعلام 2YT (6 × 2 لتر حير قوارير مخروطي يحتوي على 1 لتر من مرق 2YT في كل) من ست لوحات جديدة من الخلايا تحولت pLysS روزيتا (DE3) التي تحتوي على البلازميد TERT التكنيشيوم<...

<ol>
	<li>Gillis, A. J., Schuller, A. P., Skordalakes, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+the+Tribolium+castaneum+telomerase+catalytic+subunit+TERT.">Structure of the Tribolium castaneum telomerase catalytic subunit TERT.</a> Nature. 455, 633-637 (2008).</li><li>Greider, C. W., Blackburn, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+specific+telomere+terminal+transferase+activity+in+Tetrahymena+extracts.">Identification of a specific telomere terminal transferase activity in Tetrahymena extracts.</a> Cell. 43, 405-413 (1985).</li><li>Harley, C. B., Futcher, A. B., Greider, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeres+shorten+during+ageing+of+human+fibroblasts.">Telomeres shorten during ageing of human fibroblasts.</a> Nature. 345, 458-460 (1990).</li><li>Hayflick, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Limited+in+vitro+Lifetime+of+Human+Diploid+Cell+Strains.">The Limited in vitro Lifetime of Human Diploid Cell Strains.</a> Exp Cell Res. 37, 614-636 (1965).</li><li>Blackburn, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeres:+no+end+in+sight.">Telomeres: no end in sight.</a> Cell. 77, 621-623 (1994).</li><li>Kim, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+association+of+human+telomerase+activity+with+immortal+cells+and+cancer.">Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer.</a> Science. 266, 2011-2015 (1994).</li><li>Bodnar, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extension+of+life-span+by+introduction+of+telomerase+into+normal+human+cells.">Extension of life-span by introduction of telomerase into normal human cells.</a> Science. 279, 349-352 (1998).</li><li>Greider, C. W., Blackburn, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+telomere+terminal+transferase+of+Tetrahymena+is+a+ribonucleoprotein+enzyme+with+two+kinds+of+primer+specificity.">The telomere terminal transferase of Tetrahymena is a ribonucleoprotein enzyme with two kinds of primer specificity.</a> Cell. 51, 887-898 (1987).</li><li>Greider, C. W., Blackburn, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+telomeric+sequence+in+the+RNA+of+Tetrahymena+telomerase+required+for+telomere+repeat+synthesis.">A telomeric sequence in the RNA of Tetrahymena telomerase required for telomere repeat synthesis.</a> Nature. 337, 331-337 (1989).</li><li>Jacobs, S. A., Podell, E. R., Cech, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+the+essential+N-terminal+domain+of+telomerase+reverse+transcriptase.">Crystal structure of the essential N-terminal domain of telomerase reverse transcriptase.</a> Nat Struct Mol Biol. 13, 218-225 (2006).</li><li>Rouda, S., Skordalakes, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+the+RNA-binding+domain+of+telomerase:+implications+for+RNA+recognition+and+binding.">Structure of the RNA-binding domain of telomerase: implications for RNA recognition and binding.</a> Structure. 15, 1403-1412 (2007).</li><li>Mitchell, M., Gillis, A., Futahashi, M., Fujiwara, H., Skordalakes, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+telomerase+catalytic+subunit+TERT+binding+to+RNA+template+and+telomeric+DNA.">Structural basis for telomerase catalytic subunit TERT binding to RNA template and telomeric DNA.</a> Nat Struct Mol Biol. 17, 513-518 (2010).</li></ol>

الطريقة المعروضة هنا يسمح لإنتاج كميات كبيرة من الوحيدات الحفاز T. castaneum TERT تيلوميراز في الشكل ، وذوبان نشطة للدراسات الهيكلية والبيوكيميائية. طريقة TERT التكنيشيوم الإفراط في التعبير هي حساسة لبعض التغييرات الطفيفة في درجات الحرارة أو الكثافة خلية من تلك ال...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم الكاشف </th><th> شركة </th><th> رقم كتالوج </th></tr><tr><td> رشيد (DE3) خلايا plysS </td><td> Novagen </td><td> 70956 </td></tr><tr><td> 2YT مرق </td><td> Teknova </td><td> Y0215 </td></tr><tr><td> IPTG </td><td> الذهب التكنولوجيا الحيوية </td><td> I2481C </td></tr><tr><td> MISONIX Sonicator 3000 </td><td> Qsonica ، ذ. </td><td></td></tr><tr><td> ÄKTA منقيات FPLC </td><td> GE العلوم الحياتية </td><td></td></tr><tr><td> NI - NTA Superflow الراتنج </td><td> Qiagen </td><td> 30410 </td></tr><tr><td> Amicon الترا - 15 جهاز الطرد المركزي فلتر </td><td> ميليبور </td><td> UFC903008 </td></tr><tr><td> بوروس 50 HS تبادل الأيونات الموجبة التعبئة القوية </td><td> تطبيق النظم البيولوجية </td><td> 1-3359-06 </td></tr><tr><td> بوروس 50 HQ تبادل الأيونات الموجبة التعبئة القوية </td><td> تطبيق النظم البيولوجية </td><td> 1-2559-06 </td></tr><tr><td> Superdex 10/300 200 الحجم استبعاد العمود </td><td> GE العلوم الحياتية </td><td> 17-5175-01 </td></tr><tr><td> الفينول : الكلوروفورم : Isoamyl 25:24:1 مع تريس 10MM ، ودرجة الحموضة 8 ، 1MM EDTA </td><td> سيغما </td><td> P3803 - 100ML </td></tr><tr><td> RNaseZap </td><td> Ambion </td><td> AM9780 </td></tr><tr><td> المؤتلف المانع Rnasin ريبونوكلياز </td><td> Promega </td><td> N251B </td></tr><tr><td> RNeasy ميني كيت </td><td> Qiagen </td><td> 74104 </td></tr><tr><td> الحمض النووي [أليغنوكليوتيد] </td><td> المتكاملة للتقنيات الحمض النووي </td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro reconstitution of the active t. castaneum telomerase

الجهود المبذولة لعزل الوحيدات الحفاز تيلوميراز ، TERT بكميات تكفي لدراسات الهيكلية ، وقد اجتمع مع نجاح محدود لأكثر من عقد من الزمان. هنا ، نقدم طرائق عزل TERT المؤتلف castaneum خنفساء الدقيق (TC TERT) ، وإعادة تشكيل T. نشط castaneum تيلوميراز بروتين نووي ريبوزي (RNP) المعقدة في المختبر. تيلوميراز هو الناسخ العكسي المتخصصة (1) الذي يضيف تكرار الحمض النووي قصيرة ، ودعا التيلومير ، لانهاء 3 &#39;من الكروموزومات 2 الخطية التي تعمل على حمايتهم من نهاية إلى نهاية الانصهار وتدهورها. بعد تكرار الحمض النووي ، يتم فقدان قطعة قصيرة في نهاية الكروموسومات (3) ودون تيلوميراز ، مواصلة تقسيم الخلايا حتى يصل في النهاية على حد Hayflick 4. بالإضافة إلى ذلك ، هي نائمة تيلوميراز في الخلايا الجسمية 5 في معظم البالغين ، ولكنه نشط في الخلايا السرطانية 6 حيث أنه يعزز الخلود الخلية 7. انزيم تيلوميراز الحد الأدنى من المكونات الأساسية يتكون من اثنين : الوحيدات البروتين (TERT) ، الذي يتألف من الوحيدات الحفاز للانزيم وعنصرا لا يتجزأ الحمض النووي الريبي (تير) ، والذي يحتوي على TERT القالب يستخدم لتجميع التيلوميرات 8،9. قبل 2008 ، قد تم حلها فقط عن هياكل المجالات تيلوميراز الفردية 10،11. وجاء تقدم كبير في هذا المجال من تحديد التركيب البلوري لل12 نشاطا ، الوحيدات الحفاز T. castaneum تيلوميراز ، TC TERT 1. هنا ، فإننا نقدم طرق لإنتاج كميات كبيرة من النشطة ، TERT التكنيشيوم ذوبان للدراسات الهيكلية والبيوكيميائية ، وإعادة تشكيل لتيلوميراز معقدة RNP في المختبر لفحوصات نشاط التيلوميراز. ويظهر لمحة عامة عن الطرق التجريبية المستخدمة في الشكل 1.

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase at JoVE.com

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

الجهود المبذولة لعزل الوحيدات الحفاز تيلوميراز ، TERT بكميات تكفي لدراسات الهيكلية ، وقد اجتمع مع نجاح محدود لأكثر من عقد من الزمان. هنا ، نقدم طرائق عزل TERT المؤتلف castaneum خنفساء الدقيق (<em&gt; التكنيشيوم</em&gt; TERT) ، وإعادة تشكيل نشط<em&gt; T. castaneum</em&gt; بروتين نووي ريبوزي تيلوميراز (RNP) معقدة<em&gt; في المختبر</em&gt;.

إعادة إعماره في المختبر من أحدث T. castaneum تيلوميراز

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity DTH in Rats

الاستقراء والرصد من أحدث نوع فرط الحساسية المتأخرة (DTH) في الفئران

Delayed type hypersensitivity (DTH) is an inflammatory reaction mediated by CCR7- effector memory T lymphocytes that infiltrate the site of injection of ...

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية

Quantification of &gamma;H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

Quantification of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

الكمي بؤر γH2AX في الاستجابة للإشعاع المؤين

DNA double-strand breaks (DSBs), which are induced by either endogenous metabolic processes or by exogenous sources, are one of the most critical DNA ...

Evaluation of the Spatial Distribution of &gamma;H2AX following Ionizing Radiation

Evaluation of the Spatial Distribution of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX following Ionizing Radiation

تقييم التوزيع المكاني للγH2AX التالية الإشعاعات المؤينة

An early molecular response to DNA double-strand breaks (DSBs) is phosphorylation of the Ser-139 residue within the terminal SQEY motif of the histone ...

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

تحليل شفان نجمية طريق التفاعلات في المختبر فحوصات

Schwann cells are one of the commonly used cells in repair strategies following spinal cord injuries. Schwann cells are capable of supporting axonal ...

Telomere Length and Telomerase Activity; A Yin and Yang of Cell Senescence

التيلومير طول ونشاط تيلوميراز؛ A الين واليانغ من الشيخوخة الخلية

Telomeres  are repeating DNA sequences at the tip ends of the chromosomes that are diverse  in length and in humans can reach a length of 15,000 base ...

Analysis of RNA Processing Reactions Using Cell Free Systems: 3' End Cleavage of Pre-mRNA Substrates in vitro

Analysis of RNA Processing Reactions Using Cell Free Systems: 3' End Cleavage of Pre-mRNA Substrates in vitro

تحليل الحمض النووي الريبي معالجة ردود الفعل عن طريق خلية نظم الحرة: 3 &#39;نهاية الشق من قبل مرنا ركائز<em&gt; في المختبر</em

The 3&#8217; end of mammalian mRNAs is not formed by abrupt termination of transcription by RNA polymerase II (RNPII). Instead, RNPII synthesizes ...

Reconstitution Of &#946;-catenin Degradation In Xenopus Egg Extract

Reconstitution Of ÃƒÅ½Ã‚Â²-catenin Degradation In Xenopus Egg Extract

إعادة تشكيل β-catenin تدهور في<em&gt; القيطم</em&gt; مستخلصات البيض

Xenopus laevis egg extract is a well-characterized, robust system for studying the biochemistry of diverse cellular processes. Xenopus egg extract has ...

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

إنتاج فرداني الزرد الأجنة عن طريق<em&gt; في المختبر</em&gt; التسميد

The zebrafish has become a mainstream vertebrate model that is relevant for many disciplines of scientific study. Zebrafish are especially well suited for ...

In Vitro Reconstitution of Light-harvesting Complexes of Plants and Green Algae

In Vitro Reconstitution of Light-harvesting Complexes of Plants and Green Algae

في المختبر إعادة تشكيل مجمعات خفيفة حصاد النباتات والطحالب الخضراء

In plants and green algae, light is captured by the light-harvesting complexes (LHCs), a family of integral membrane proteins that coordinate chlorophylls ...