Name: visualization of the interstitial cells of cajal (icc) network in mice
Uploaded: 2011-07-27T12:00:00
Duration: 9 min 45 s
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यह काम राष्ट्रीय कैंसर संस्थान (K08CA140946, YC के लिए), (5F32CA130372, पीसी के लिए), (R01CA102774 और R01HL055748 पंजाब), रक्षा विभाग (PC094302 YC), जिस्ट अनुसंधान के लिए शुमन परिवार फंड (करने के लिए द्वारा समर्थित किया गया पीसी), और स्टार कैंसर कंसोर्टियम (पीसी के लिए, YC, CLS और पीबी). हम Katia Manova, Ning फैन, और MSKCC आण्विक कोशिका विज्ञान कोर सुविधा के Mesurh Turkekul cryosectioning और immunostaining के साथ मदद के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा.

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	<li>Sanders, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+case+for+interstitial+cells+of+Cajal+as+pacemakers+and+mediators+of+neurotransmission+in+the+gastrointestinal+tract.">A case for interstitial cells of Cajal as pacemakers and mediators of neurotransmission in the gastrointestinal tract.</a> Gastroenterology. 111, 492-515 (1996).</li><li>Ward, S. M., Sanders, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+and+pathophysiology+of+the+interstitial+cell+of+Cajal:+from+bench+to+bedside.+I.+Functional+development+and+plasticity+of+interstitial+cells+of+Cajal+networks.">Physiology and pathophysiology of the interstitial cell of Cajal: from bench to bedside. I. Functional development and plasticity of interstitial cells of Cajal networks.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 281, 602-611 (2001).</li><li>Komuro, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+organization+of+interstitial+cells+of+Cajal+in+the+gastrointestinal+tract.">Structure and organization of interstitial cells of Cajal in the gastrointestinal tract.</a> J Physiol. 576, 653-658 (2006).</li><li>Sanders, K. M., Ordog, T., Koh, S. D., Torihashi, S., Ward, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+plasticity+of+interstitial+cells+of+Cajal.">Development and plasticity of interstitial cells of Cajal.</a> Neurogastroenterol Motil. 11, 311-338 (1999).</li><li>Ward, S. M., Burns, A. J., Torihashi, S., Sanders, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutation+of+the+proto-oncogene+c-kit+blocks+development+of+interstitial+cells+and+electrical+rhythmicity+in+murine+intestine.">Mutation of the proto-oncogene c-kit blocks development of interstitial cells and electrical rhythmicity in murine intestine.</a> J Physiol. 480, 91-97 (1994).</li><li>Huizinga, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=W/kit+gene+required+for+interstitial+cells+of+Cajal+and+for+intestinal+pacemaker+activity.">W/kit gene required for interstitial cells of Cajal and for intestinal pacemaker activity.</a> Nature. 373, 347-349 (1995).</li><li>Rubin, B. P., Heinrich, M. C., Corless, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+stromal+tumour.">Gastrointestinal stromal tumour.</a> Lancet. 369, 1731-1741 (2007).</li><li>Hirota, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gain-of-function+mutations+of+c-kit+in+human+gastrointestinal+stromal+tumors.">Gain-of-function mutations of c-kit in human gastrointestinal stromal tumors.</a> Science. 279, 577-580 (1998).</li><li>Chi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV1+is+a+lineage-specific+survival+factor+in+Gastrointestinal+Stromal+Tumour+(GIST).">ETV1 is a lineage-specific survival factor in Gastrointestinal Stromal Tumour (GIST).</a> Nature. , (2010).</li><li>Kwon, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+structure+and+function+of+ICC+networks+in+ICC+hyperplasia+and+gastrointestinal+stromal+tumors.">Changes in the structure and function of ICC networks in ICC hyperplasia and gastrointestinal stromal tumors.</a> Gastroenterology. 136, 630-639 (2009).</li><li>Hwang, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+anoctamin+1/TMEM16A+by+interstitial+cells+of+Cajal+is+fundamental+for+slow+wave+activity+in+gastrointestinal+muscles.">Expression of anoctamin 1/TMEM16A by interstitial cells of Cajal is fundamental for slow wave activity in gastrointestinal muscles.</a> J Physiol. 587, 4887-4904 (2009).</li><li>Gomez-Pinilla, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ano1+is+a+selective+marker+of+interstitial+cells+of+Cajal+in+the+human+and+mouse+gastrointestinal+tract.">Ano1 is a selective marker of interstitial cells of Cajal in the human and mouse gastrointestinal tract.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 296, G1370-G1381 (2009).</li><li>Sommer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+stromal+tumors+in+a+mouse+model+by+targeted+mutation+of+the+Kit+receptor+tyrosine+kinase.">Gastrointestinal stromal tumors in a mouse model by targeted mutation of the Kit receptor tyrosine kinase.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 6706-6711 (2003).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Cajal के बीचवाला कोशिकाओं शुरू सैंटियागो Ramóón y Cajal द्वारा ठीक एक सदी पहले विशेषता methylene नीले और चांदी जठरांत्र पेशीकला के chromate दाग का उपयोग कर. Cajal शुरू सोचा था कि आईसीसी उनकी प्रक्रियाओं के आधार पर न्यूरॉन्स कि axons और dendrites की याद ताजा कर रहे हैं. कई आगामी वर्षों में, आईसीसी जीव विज्ञान के अध्ययन है कि किट की खोज न केवल आईसीसी में व्यक्त किया है जब तक विशिष्ट मार्करों की कमी के द्वारा सीमित किया गया है, लेकिन यह भी अपने विकास के लिए 6 आवश्यक है. तब से, किट immunofluorescence व्यापक रूप से किया गया है आईसीसी जीव विज्ञान के अध्ययन में प्रयोग किया जाता है और भी मूत्राशय के रूप में अन्य सिकुड़ा अंगों में आईसीसी की सराहना करने के लिए नेतृत्व. हाल ही में, ANO1 एक दूसरे विश्वसनीय आईसीसी मार्कर के रूप में पहचान की गई है. Immunofluorescence का उपयोग करने के लिए आईसीसी की पहचान विभिन्न निर्धारण और बढ़ते तकनीकों का उपयोग पिछले 15 साल से अधिक कई प्रकाशनों किया गया है. हमारे हाथ में &quot;निर्धारित जमी&quot; cryosections कि paraformaldehyde और संरक्षित sucrose के साथ लगाया गया है सबसे अच्छा या cryosectioning बाद पोस्ट - निर्धारण paraformaldehyde एसीटोन की तुलना में काम करता है. पूरे mounts के लिए, हमने पाया है कि एसीटोन निर्धारण mucosal विच्छेदन के बाद सबसे मजबूत परिणाम देता है. ऐतिहासिक, ACK-2 माउस आईसीसी पहचान के लिए पसंद की किट एंटीबॉडी किया गया है. यह एक मोनोक्लोनल चूहा है कि कोशिकी डोमेन पहचानता है और यह भी एक अवरुद्ध एंटीबॉडी कि आन्त्रावरोध का कारण बनता है जब चूहों को जीने के लिए दिया है. हालांकि, मिलान ACK-2 धीरे धीरे paraformaldehyde निर्धारण द्वारा नष्ट हो जाता है और मानक प्रतिजन पुनर्प्राप्ति विधियों द्वारा बचाया नहीं है. हमने पाया है कि मिलान ACK-4 paraformaldehyde निर्धारण के लिए प्रतिरोधी है. आकारिकी तय जमे हुए ब्लॉक और वर्गों, आयल एम्बेडेड ब्लॉक और वर्गों की तुलना में बेहतर बरकरार रखता है और अधिक लंबे शब्द संग्रह (चित्रा 4) के लिए उत्तरदायी है. न तो ACK-2 और न ही ACK-4 सफलतापूर्वक किया गया है पैराफिन वर्गों में प्रयोग किया जाता है. हम विशेषता है कि D13A2, एक नया खरगोश मोनोक्लोनल एंटीबॉडी, GI पथ के दोनों तय स्थिर और आयल वर्गों में असाधारण अच्छी तरह से काम करता है. किट melanocytes, hematopoietic कोशिकाओं, जर्म कोशिकाओं, और विशेष रूप से मस्तूल कोशिकाओं में जो भी GI पथ में पाया जाता है सहित कई अन्य प्रकार की कोशिकाओं में व्यक्त किया है. सौभाग्य से, सबसे मस्तूल कोशिकाओं पाए जाते हैं और पेशीकला में नहीं mucosa है. खरगोश विरोधी Ano1 और चूहे विरोधी किट के साथ डबल प्रत्येक एंटीबॉडी का धुंधला धुंधला गैर विशिष्ट (चित्रा 4) को समाप्त कर सकते हैं. यह भी ध्यान देने योग्य बात है कि किट और Ano1 आईसीसी के उपवर्गों के बीच के रिश्तेदार अभिव्यक्ति अलग लगता है लायक है. उदाहरण के लिए, छोटी आंत में, किट धुंधला गहरी मांसपेशी जाल के आईसीसी की तुलना में जबकि Ano1 धुंधला तुलनीय है myenteric आईसीसी में ज्यादा तीव्र है.

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </th></tr><tr><td> चूहे विरोधी किट एंटीबॉडी (क्लोन ACK-2) </td><td> eBioscience </td><td> 14-1172 </td><td> 2μg/ml पर प्रयोग करें. मिलान overfixation के साथ खो दिया है. </td></tr><tr><td> चूहे विरोधी किट एंटीबॉडी (क्लोन ACK 4) </td><td> Cedarlane </td><td> CL8936AP </td><td> 2μg/ml पर प्रयोग करें. </td></tr><tr><td> खरगोश विरोधी किट एंटीबॉडी (D13A2 क्लोन) </td><td> सेल संकेतन </td><td> 3074 </td><td> 1:100 कमजोर पड़ने पर प्रयोग करें. केवल प्रतिरक्षी यहाँ सूचीबद्ध है कि पैराफिन वर्गों में अच्छी तरह से काम करता है. </td></tr><tr><td> खरगोश प्रतिरक्षी विरोधी Pgp9.5 </td><td> Abcam </td><td> ab10404 </td><td> लेबल neuronal सेल cytoplasm. Myenteric जाल के न्यूरॉन्स अंकन के लिए उपयोगी है. 1:1000 कमजोर पड़ने पर प्रयोग करें. </td></tr><tr><td> खरगोश प्रतिरक्षी विरोधी - Ano1 </td><td> Abcam </td><td> ab53212 </td><td> 2μg/ml में प्रयोग </td></tr><tr><td> एलेक्सा Fluor 594 बकरी आईजीजी विरोधी चूहा </td><td> Invitrogen </td><td> एक - 11,007 </td><td> 2μg/ml में प्रयोग </td></tr><tr><td> एलेक्सा Fluor 488 बकरी आईजीजी विरोधी खरगोश </td><td> Invitrogen </td><td> A-११,००८ </td><td> 2μg/ml में प्रयोग </td></tr><tr><td> पशु दूध पिलाने की सुई </td><td> मछुआ </td><td> 01-208-87 </td><td> सिलिकॉन सुई वयस्क चूहों के GI पथ निस्तब्धता के लिए उपयोगी इत्तला दे दी </td></tr><tr><td> मुँहफट सुई </td><td> Becton Dickison </td><td> 305180 </td><td> मुँहफट सुई पूर्व weaned पिल्ले के GI पथ निस्तब्धता के लिए उपयोगी </td></tr><tr><td> DAPI के साथ गोल्ड antifade अभिकर्मक लम्बा </td><td> Invitrogen </td><td> पी - 36,931 </td><td> DAPI साथ वैकल्पिक हार्ड बढ़ते मीडिया की स्थापना का उपयोग कर सकते हैं </td></tr><tr><td> ऊतक - टेक Cryomold </td><td> ऊतक टेक </td><td> 4557 </td><td></td></tr><tr><td> अक्टूबर ऊतक - टेक </td><td> ऊतक टेक </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> 32% Paraformaldehyde (10ml सील ampoule) </td><td> EM विज्ञान </td><td> 15714 </td><td> ओपन सील और उपयोग करने से पहले बस पतला करने के लिए 4% ampoule </td></tr><tr><td> बफर अवरुद्ध </td><td></td><td></td><td> 5% बकरी सीरम, 0.1% पीबीएस में X-100 ट्राइटन </td></tr></tbody></table>

visualization of the interstitial cells of cajal (icc) network in mice

Cajal (आईसीसी) के बीचवाला कोशिकाओं mesenchymal व्युत्पन्न जठरांत्र (सैनिक) पथ है कि सहज धीमी peristalsis के लिए आवश्यक तरंगों को पैदा करते हैं और आंतों का तंत्रिका system1 से neuronal इनपुट मध्यस्थता के &quot;पेसमेकर कोशिकाओं&quot; हैं. आईसीसी के विभिन्न उपप्रकारों सैनिक पथ 2,3 के पेशीकला में अलग नेटवर्क के रूप में. हानि या इन नेटवर्कों को चोट गतिशीलता 4 विकारों के एक नंबर के साथ जुड़ा हुआ है. आईसीसी कोशिकाओं प्लाज्मा झिल्ली और किट immunostaining पिछले 15 वर्षों के लिए इस्तेमाल किया गया है आईसीसी नेटवर्क 5,6 लेबल पर किट रिसेप्टर tyrosine kinase व्यक्त करते हैं . महत्वपूर्ण बात, सामान्य किट गतिविधि आईसीसी 5,6 विकास के लिए आवश्यक है . आईसीसी गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल stromal ट्यूमर में कोशिकाओं परिणाम (जिस्ट), कि बार - बार लाभ के समारोह किट 7,8 म्यूटेशनों बंदरगाह के neoplastic परिवर्तन. हमने हाल ही में पता चला कि ETV1 एक वंश विशेष के अस्तित्व आईसीसी / जिस्ट वंश में व्यक्त कारक है और एक मास्टर transcriptional और जिस्ट 9 tumorigenesis के लिए दोनों सामान्य आईसीसी नेटवर्क के गठन के लिए आवश्यक नियामक है . हम आगे दिखाना है कि यह tumorigenesis में किट म्यूटेशनों को सक्रिय के साथ सहयोग. यहाँ, हम चूहों में आईसीसी के नेटवर्क के दृश्य के लिए, मोटे तौर पर पहले प्रकाशित 10,11 प्रोटोकॉल पर आधारित विधियों का वर्णन. हाल ही में, क्लोराइड चैनल 1 anoctamin (ANO1) भी 11,12 आईसीसी की एक विशिष्ट झिल्ली मार्कर के रूप में लक्षण वर्णन किया गया है . अपने प्लाज्मा झिल्ली स्थानीयकरण के कारण, दोनों प्रोटीन के immunofluorescence आईसीसी नेटवर्क कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यहाँ, हम निश्चित जमी cyrosections और पूरे माउंट तैयारी द्वारा आईसीसी के नेटवर्क के दृश्य का वर्णन.

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Visualization of the Interstitial Cells of Cajal ICC Network in Mice

Cajal (आईसीसी) के बीचवाला कोशिकाओं जठरांत्र संबंधी मार्ग (जीआई) के पेसमेकर की कोशिकाओं रहे हैं. वे चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं और बाद ganglionic neuronal सैनिक सिकुड़ना विनियमित फाइबर के बीच जटिल नेटवर्क के रूप में. यहाँ, हम immunofluorescence पार के अनुभागीय तरीकों और पूरे माउंट murine आईसीसी नेटवर्क के दृश्य प्रस्तुत करते हैं.

चूहे में Cajal नेटवर्क (आईसीसी) के बीचवाला कक्ष के दृश्य

The interstitial cells of Cajal (ICC) are mesenchymal derived "pacemaker cells" of the gastrointestinal (GI) tract that generate spontaneous slow waves ...

Research

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Biology

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