Name: immuno-fluorescence assay of leptospiral surface-exposed proteins
Uploaded: 2011-07-01T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immuno-fluorescence Assay of Leptospiral Surface-exposed Proteins at JoVE.com

وأيد هذه الدراسة من قبل دائرة الصحة العامة منحة AI - 34431 (لداه) من المعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية وزارة شؤون المحاربين القدامى صناديق البحوث الطبية (لداه).

1. التثبيت من البريمية على الشرائح الزجاجية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البريمية interrogans هي فئة BSL2 الممرض. العمل مع الخلايا الحية فإنه يتطلب معالجة مناسبة ، مثل ارتداء القفازات ، معطف المختبر والخطوات pipetting في غطاء العقيمة. </li><li style=";text-align:right;...

<ol>
	<li>Achouak, W., Heulin, T., Pages, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+facets+of+bacterial+porins.">Multiple facets of bacterial porins.</a> FEMS Microbiol Lett. 199, 1-7 (2001).</li><li>Haake, D. A., Matsunaga, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+leptospiral+outer+membrane+and+description+of+three+novel+leptospiral+membrane+proteins.">Characterization of the leptospiral outer membrane and description of three novel leptospiral membrane proteins.</a> Infect Immun. 70, 4936-4945 (2002).</li><li>Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+surface+of+Leptospira+interrogans+serovar+grippotyphosa+during+in+vitro+cultivation.">Changes in the surface of Leptospira interrogans serovar grippotyphosa during in vitro cultivation.</a> Infect Immun. 59, 1131-1140 (1991).</li><li>Nally, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+proteomic+analysis+of+outer+membrane+vesicles+from+a+clinical+isolate+of+Leptospira+interrogans+serovar+Copenhageni.">Purification and proteomic analysis of outer membrane vesicles from a clinical isolate of Leptospira interrogans serovar Copenhageni.</a> Proteomics. 5, 144-152 (2005).</li><li>Zuerner, R. L., Knudtson, W., Bolin, C. A., Trueba, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+outer+membrane+and+secreted+proteins+of+Leptospira+interrogans+serovar+pomona.">Characterization of outer membrane and secreted proteins of Leptospira interrogans serovar pomona.</a> Microb Pathog. 10, 311-322 (1991).</li><li>Cullen, P. A., Haake, D. A., Adler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outer+membrane+proteins+of+pathogenic+spirochetes.">Outer membrane proteins of pathogenic spirochetes.</a> FEMS Microbiol Rev. 28, 291-318 (2004).</li><li>Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spirochaetal+lipoproteins+and+pathogenesis.">Spirochaetal lipoproteins and pathogenesis.</a> Microbiology. 146, 1491-1504 (2000).</li><li>Koebnik, R., Locher, K. P., Gelder, P. V. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+bacterial+outer+membrane+proteins:+barrels+in+a+nutshell.">Structure and function of bacterial outer membrane proteins: barrels in a nutshell.</a> Mol Microbiol. 37, 239-253 (2000).</li><li>Schulz, G., Benz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The structures of general porins. , (2004).</li><li>Pinne, M., Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+approach+to+identification+of+surface-exposed,+outer+membrane-spanning+proteins+of+Leptospira+interrogans.">A comprehensive approach to identification of surface-exposed, outer membrane-spanning proteins of Leptospira interrogans.</a> PLoS One. 4, e6071-e6071 (2009).</li><li>Johnson, R. C., Rogers, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolism+of+leptospires.+II.+The+action+of+8-azaguanine.">Metabolism of leptospires. II. The action of 8-azaguanine.</a> Can J Microbiol. 13, 1621-1629 (1967).</li><li>Cullen, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surfaceome+of+Leptospira+spp.">Surfaceome of Leptospira spp.</a> Infect Immun. 73, 4853-4863 (2005).</li><li>Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+and+sequence+analysis+of+the+gene+encoding+OmpL1,+a+transmembrane+outer+membrane+protein+of+pathogenic+Leptospira+spp.">Molecular cloning and sequence analysis of the gene encoding OmpL1, a transmembrane outer membrane protein of pathogenic Leptospira spp.</a> J Bacteriol. 175, 4225-4234 (1993).</li><li>Hefty, P. S., Jolliff, S. E., Caimano, M. J., Wikel, S. K., Akins, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+temporal+and+spatial+patterns+of+outer+surface+lipoprotein+expression+generate+population+heterogeneity+and+antigenic+diversity+in+the+Lyme+disease+spirochete,+Borrelia+burgdorferi.">Changes in temporal and spatial patterns of outer surface lipoprotein expression generate population heterogeneity and antigenic diversity in the Lyme disease spirochete, Borrelia burgdorferi.</a> Infect Immun. 70, 3468-3478 (2002).</li><li>Noppa, L., &#214;stberg, Y., Lavrinovicha, M., Bergstr&#246;m, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P13+an+integral+membrane+protein+of+Borrelia+burgdorferi,+is+C-terminally+processed+and+contains+surface-exposed+domains.">P13 an integral membrane protein of Borrelia burgdorferi, is C-terminally processed and contains surface-exposed domains.</a> Infect Immun. 69, 3323-3334 (2001).</li><li>Parveen, N., Leong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+candidate+glycosaminoglycan-binding+adhesin+of+the+Lyme+disease+spirochete+Borrelia+burgdorferi.">Identification of a candidate glycosaminoglycan-binding adhesin of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi.</a> Mol Microbiol. 35, 1220-1234 (2000).</li><li>Ristow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+OmpA-like+protein+Loa22+is+essential+for+leptospiral+virulence.">The OmpA-like protein Loa22 is essential for leptospiral virulence.</a> PLoS Pathog. 3, e97-e97 (2007).</li></ol>

أسلوبنا ايفا سطح مماثلة لتلك التي تستخدم للتدليل على سطح التعرض borrelial مختلفة 15 و 16 و البريميات 12 و 17 من البروتينات. وصف تفاصيل السطح ايفا الأسلوب هنا صممت للحد من التلاعب في الخلايا وذلك في محاولة للحفاظ على سلامة الغشاء الخارجي مع الاستفادة من اتجاه...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> استمرت كذلك الشرائح غرفة الزجاج </td><td> مختبر تيك </td><td> 177380 </td><td></td></tr><tr><td> مصل الأرنب </td><td> Immunochemicals روكلاند </td><td> D209 - 00-0100 </td><td></td></tr><tr><td> البريمية التخصيب EMJH </td><td> دينار بحريني Difco </td><td> 279510 </td><td></td></tr><tr><td> الكسا فلور 488 الماعز المضادة للأرنب مفتش (H + L) </td><td> Invitrogen / المسابر الجزيئية </td><td> A - 11034 </td><td></td></tr><tr><td> الكسا فلور 488 الماعز المضادة للمفتش الماوس (H + L) </td><td> Invitrogen / المسابر الجزيئية </td><td> A - 11029 </td><td></td></tr><tr><td> 4&#39;6 - diamidino - 2 - فينيل الأندول هيدروكلوريد (دابي) </td><td> Invitrogen / المسابر الجزيئية </td><td> D1306 </td><td></td></tr><tr><td> إطالة الذهب لمكافحة تصاعد تتلاشى المتوسطة </td><td> Invitrogen / المسابر الجزيئية </td><td> P36930 </td><td> يوازن إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام </td></tr><tr><td> Fisherfinest زجاج الغطاء بريميوم </td><td> الصياد </td><td> 12-544-14 </td><td></td></tr><tr><td> مضان المجهر </td><td> زايس </td><td> Axioskop 40 </td><td></td></tr></tbody></table>

immuno-fluorescence assay of leptospiral surface-exposed proteins

وتشارك البروتينات السطحية الجرثومي في اتصال مباشر مع الخلايا المضيفة وامتصاص المغذيات من البيئة 1. لهذا السبب ، لا يمكن توطين الخلوية توفير نظرة ثاقبة لدور وظيفي من البروتينات البكتيرية. توطين سطح البروتينات البكتيرية هي خطوة مهمة نحو تحديد عوامل الفوعة تشارك في آليات المرضية. قد طرق تجزئة البريميات الأغشية 2-5 تكون انتقائية لفئة معينة من الغشاء الخارجي ، البروتينات (خطط إدارة المكاتب) ، مثل البروتينات الدهنية عبر الغشاء مقابل خطط إدارة المكاتب ، وتؤدي بالتالي إلى الخطأ في التصنيف. هذا هو الأرجح بسبب الاختلافات الهيكلية ، وكيف أنها ترتبط إلى الغشاء الخارجي. وترتبط مع البروتينات الدهنية الأغشية عن طريق التفاعل بين مسعور شاردة الدهن N - الطرفي (ثلاثة أحماض الدهنية) ، والدهون الفوسفاتية طبقة ثنائية الدهن 6 ، 7. في المقابل ، عادة ما يتم دمج خطط إدارة المكاتب عبر الغشاء في طبقة ثنائية المادة الدهنية التي متقابلة الزمر β - ترتيب الأوراق في بنية برميل مثل 8 و 9. بالإضافة إلى ذلك ، وجود بروتين في الغشاء الخارجي ، لا يضمن بالضرورة أن يتعرض للبروتين أو المجالات على السطح. ومن المعروف الأغشية الخارجي ملتوياتي أن تكون أساليب هشة ، وبالتالي تنطوي على تلاعب لطيف تتطلب من الخلايا وإدراج الفرعي سطح البروتين ضوابط لتقييم سلامة الغشاء الخارجي. هنا ، ونحن تقديم مقايسة التألق المناعي (IFA) طريقة لتقييم التعرض مباشرة على سطح البروتينات leptospires سليمة. ويستند هذا الأسلوب على الاعتراف البروتينات السطحية البريميات بواسطة أضداد المستضد محددة. هنا ، هي أجسام مضادة محددة لdetetcted OmpL54 10 aftero ملزمة لأصلي الحواتم السطح ، وعرضة للخطر. مقارنة تفاعل الأجسام المضادة لخلايا سليمة مقابل permeabilized تمكن تقييم توزيع الخلوية وجود أو عدم وجود البروتين بشكل انتقائي على سطح البريميات. وينبغي تقييم سلامة الغشاء الخارجي باستخدام أجسام مضادة لبروتين واحد أو أكثر تحت سطح الأرض ، وتقع يفضل أن تكون في الجبلة المحيطية. ويمكن استخدام أسلوب تحليل ايفا سطح سطح التعرض لأي بروتين البريميات التي أضداد محددة متاحة. كلا من فائدة والحد من الأسلوب يعتمد على ما إذا كانت الأجسام المضادة المستخدمة قادرة على ربط الحواتم الأصلي. ربما منذ الأضداد غالبا ما تثار ضد بروتينات المؤتلف ، الحواتم الأصلي من البروتينات السطحية المعرضة لل، لا يمكن الاعتراف بها. ومع ذلك ، فإن الأسلوب ايفا السطح هو أداة قيمة لدراسة مكونات الأسطح البكتيرية سليمة. ويمكن تطبيق هذا الأسلوب ليس فقط ولكن أيضا لleptospires اللولبيات الأخرى والبكتيريا سالبة الجرام. أقوى الاستنتاجات المتعلقة سطح التعرض للخطط إدارة المكاتب ، فمن المستحسن اتباع نهج شامل تشترك فيه عدة طرق توطين الخلية 10.

Watch this Scientific Journal Video about Immuno-fluorescence Assay of Leptospiral Surface-exposed Proteins at JoVE.com

Immuno-fluorescence Assay of Leptospiral Surface-exposed Proteins

وصفت وسيلة فعالة لتقييم التعرض سطح البروتينات البريميات. وهو مصمم خصيصا لطريقة لتجنب اضطراب الغشاء الخارجي للخلايا هشة البريميات. هذا الأسلوب يتطلب العمل من الضوابط سلبية عديدة لتقييم سلامة الغشاء الخارجي ونوعية رد فعل الأجسام المضادة.

المناعية مضان الفحص من البروتينات السطحية المعرضة للالبريميات

Bacterial surface proteins are involved in direct contact with host cells and in uptake of nutrients from the environment 1. For this reason, cellular ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A TIRF Microscopy Technique for Real-time, Simultaneous Imaging of the TCR and its Associated Signaling Proteins

تقنية الفحص المجهري للTIRF التصوير، في الوقت الحقيقي في وقت واحد من TCR وما يرتبط بها من البروتينات اشارة

Signaling is initiated through the T Cell Receptor (TCR) when it is engaged by antigenic peptide fragments bound by Major Histocompatibility Complex ...

Plaque Assay for Murine Norovirus

الفحص وحة لنوروفيروس الفئران

Murine norovirus (MNV) is the only member of the Norovirus genus that efficiently grows in tissue culture 1, 2. Cell lysis and cytopathic effect (CPE) are ...

Methodology for the Efficient Generation of Fluorescently Tagged Vaccinia Virus Proteins

منهجية لتوليد كفاءة من البروتينات فيروس Vaccinia الموسومة الفلورية

Tagging of viral proteins with fluorescent  proteins has proven an indispensable approach to furthering our understanding  of virus-host interactions. ...

Using Fluorescent Proteins to Monitor Glycosome Dynamics in the African Trypanosome

باستخدام البروتينات الفلورية لرصد ديناميات Glycosome في المثقبيات الأفريقي

Trypanosoma brucei is a kinetoplastid parasite that causes human African trypanosomiasis (HAT), or sleeping sickness, and a wasting disease, nagana, in ...

Phage Phenomics: Physiological Approaches to Characterize Novel Viral Proteins

Phenomics فج: مقاربات الفسيولوجية لتوصيف رواية الفيروسية البروتينات

Current investigations into phage-host interactions are dependent on extrapolating knowledge from (meta)genomes. Interestingly, 60 - 95% of all phage ...

Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment

الفحص حساس للغاية لقياس مرفق الفيروسة الرملية خلية

Arenaviruses are a family of enveloped RNA viruses that cause severe human disease. The first step in the arenavirus life cycle is attachment of viral ...

Optimization of a Quantitative Micro-neutralization Assay

الاستفادة المثلى من الكمية الصغيرة تحييد الفحص

The micro-neutralization (MN) assay is a standard technique for measuring the infectivity of the influenza virus and the inhibition of virus replication. ...

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

تحديد تسلسل التعريب بلاسموديسمال في البروتينات في بﻻنتا

Plasmodesmata (Pd) are cell-to-cell connections that function as gateways through which small and large molecules are transported between plant cells. ...

Targeting Cysteine Thiols for in Vitro Site-specific Glycosylation of Recombinant Proteins

Targeting Cysteine Thiols for in Vitro Site-specific Glycosylation of Recombinant Proteins

استهداف ثيولس سيستين في المختبر جليكوسيليشن الخاصة بالموقع من البروتينات المؤتلف

Stromal interaction molecule-1 (STIM1) is a type-I transmembrane protein located on the endoplasmic reticulum (ER) and plasma membranes (PM). ER-resident ...

Purification of Viral DNA for the Identification of Associated Viral and Cellular Proteins

تنقية الحمض النووي الفيروسي للتعرف على البروتينات الفيروسية والخلوية المرتبطة بها

The goal of this protocol is to isolate herpes simplex virus type 1 (HSV-1) DNA from infected cells for the identification of associated viral and ...