Name: identification and analysis of mouse erythroid progenitors using the cd71/ter119 flow-cytometric assay
Uploaded: 2011-08-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay at JoVE.com

نشكر التدفق الخلوي UMass الأساسية : ريتشارد Konz ، Giehl تيد غوسلين باربرا ، قو أوجدتها وKrupoch تامي. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة / NHLBI RO1 HL084168 (MS) ، والمعاهد الوطنية للصحة CA - T32 130807 (JRS). كما استخدمت الموارد الأساسية التي تدعمها أبحاث الغدد الصماء السكري DK32520 منح المركز.

1. حصاد الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد أنابيب تحتوي على 2-5 العازلة مل تلطيخ الباردة (الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مع جيش صرب البوسنة وأضاف 0.2 ٪ والجلوكوز 5mM). إبقاء الأنابيب على الجليد قبل الحصاد الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعدام ا?...

<ol>
	<li>Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+Fas-FasL+coexpression+by+erythropoietin+mediates+erythroblast+expansion+during+the+erythropoietic+stress+response+in.">Suppression of Fas-FasL coexpression by erythropoietin mediates erythroblast expansion during the erythropoietic stress response in.</a> 108, 123-133 (2006).</li><li>Socolovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negative+Autoregulation+by+FAS+Mediates+Robust+Fetal+Erythropoiesis.">Negative Autoregulation by FAS Mediates Robust Fetal Erythropoiesis.</a> PLoS Biol. 5, e252-e252 (2007).</li><li>Krutzik, P. O., Hale, M. B., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+murine+immunological+signaling+network+with+phosphospecific+flow+cytometry.">Characterization of the murine immunological signaling network with phosphospecific flow cytometry.</a> J Immunol. 175, 2366-2373 (2005).</li><li>Socolovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ineffective+erythropoiesis+in+Stat5a(-/-)5b(-/-)+mice+due+to+decreased+survival+of+early+erythroblasts.">Ineffective erythropoiesis in Stat5a(-/-)5b(-/-) mice due to decreased survival of early erythroblasts.</a> Blood. 98, 3261-3273 (2001).</li><li>Guihard, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MAPK+ERK1+is+a+negative+regulator+of+the+adult+steady-state+splenic+erythropoiesis.">The MAPK ERK1 is a negative regulator of the adult steady-state splenic erythropoiesis.</a> Blood. 115, 3686-3694 (2010).</li><li>Yu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+erythroid+chaperone+that+facilitates+folding+of+alpha-globin+subunits+for+hemoglobin+synthesis.">An erythroid chaperone that facilitates folding of alpha-globin subunits for hemoglobin synthesis.</a> J Clin Invest. 117, 1856-1865 (2007).</li><li>Chen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythroid+dysplasia,+megaloblastic+anemia,+and+impaired+lymphopoiesis+arising+from+mitochondrial+dysfunction.">Erythroid dysplasia, megaloblastic anemia, and impaired lymphopoiesis arising from mitochondrial dysfunction.</a> Blood. 114, 4045-4053 (2009).</li><li>Chen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolving+the+distinct+stages+in+erythroid+differentiation+based+on+dynamic+changes+in+membrane+protein+expression+during+erythropoiesis.">Resolving the distinct stages in erythroid differentiation based on dynamic changes in membrane protein expression during erythropoiesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 17413-17418 (2009).</li><li>McGrath, K. E., Bushnell, T. P., Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multispectral+imaging+of+hematopoietic+cells:+where+flow+meets+morphology.">Multispectral imaging of hematopoietic cells: where flow meets morphology.</a> J Immunol Methods. 336, 91-97 (2008).</li><li>Pop, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+key+commitment+step+in+erythropoiesis+is+synchronized+with+the+cell+cycle+clock+through+mutual+inhibition+between+PU.1+and+S-phase+progression.">A key commitment step in erythropoiesis is synchronized with the cell cycle clock through mutual inhibition between PU.1 and S-phase progression.</a> PLoS Biol. 8, (2010).</li><li>Borsook, H., Lingrel, J. B., Scaro, J. L., Millette, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+haemoglobin+in+relation+to+the+maturation+of+erythroid+cells.">Synthesis of haemoglobin in relation to the maturation of erythroid cells.</a> Nature. 196, 347-350 (1962).</li></ol>

منهجية تدفق cytometric التحقيق في وقت واحد يسمح لأي وظيفة الخلوية التي قد يتم الكشف عن الأجسام المضادة مع مضان ، مترافق محددة أو يجند ، بما في ذلك علامات سطح الخلية ، والتعبير من البروتين ، وبقاء الخلية ، مما يشير إلى الخلية باستخدام الفوسفات محددة الأجسام المضادة (3)...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th></tr><tr><td> فاس ، البيوتين </td><td> دينار بحريني Pharmingen </td><td> 554256 </td></tr><tr><td> Streptavidin - APC </td><td> المسابر الجزيئية </td><td> S868 </td></tr><tr><td> 40 ميكرومتر مصفاة الخلية معقمة </td><td> Fisherbrand </td><td> 22363547 </td></tr><tr><td> البوليسترين جولة القاع أنابيب لتلطيخ FACS </td><td> فالكون دينار بحريني </td><td> 352008 </td></tr><tr><td> U - 96 لوحة أسفل جيدا </td><td> فالكون دينار بحريني </td><td> 353910 </td></tr><tr><td> ChromePure أرنب مفتش </td><td> جاكسون ImmunoResearch </td><td> 015-000-003 </td></tr><tr><td> CD71 - FITC (الأسهم 0.5mg/ml) </td><td> BD - العلوم البيولوجية </td><td> 553266 </td></tr><tr><td> Ter119 - PE (الأسهم 0.2mg/ml) </td><td> BD - العلوم البيولوجية </td><td> 553673 </td></tr><tr><td> 7AAD </td><td> BD - العلوم البيولوجية </td><td> 559925 </td></tr><tr><td> دابي مسحوق </td><td> روش </td><td> 236276 </td></tr><tr><td> FITC الجرذ المضادة للماوس CD41 MWReg30 </td><td> دينار بحريني Pharmingen </td><td> 553848 </td></tr><tr><td> FITC الجرذ المضادة للماوس CD45R/B220 RA3 - 6B2 </td><td> دينار بحريني Pharmingen </td><td> 553087 </td></tr><tr><td> FITC الجرذ المضادة للماوس CD411b/Mac-1 M1/70 </td><td> دينار بحريني Pharmingen </td><td> 557396 </td></tr><tr><td> FITC مكافحة الجرذ الفأر لي - 6G و Ly - 6C (GR - 1) RB6 - 8C5 </td><td> دينار بحريني Pharmingen </td><td> 553126 </td></tr><tr><td> FITC الهامستر المضادة للماوس CD3e 145 2C11 </td><td> دينار بحريني Pharmingen </td><td> 553061 </td></tr><tr><td> APC BrdU تدفق طقم </td><td> دينار بحريني Pharmingen </td><td> 557892 </td></tr><tr><td> Annexin V - البيوتين </td><td> دينار بحريني Pharmingen </td><td> 556418 </td></tr></tbody></table>

identification and analysis of mouse erythroid progenitors using the cd71/ter119 flow-cytometric assay

دراسة تكون الكريات الحمر يهدف إلى فهم الكيفية التي تتشكل الخلايا الحمراء من الأسلاف في وقت سابق للدم ومحمر. على وجه التحديد ، وينظم معدل تكوين الخلايا الحمراء التي إرثروبويتين هرمون (EPO) ، التي يتم تشغيلها بواسطة التوليف نقص الأكسجة الأنسجة. وثمة تهديد لائق نتائج الأوكسجين في الأنسجة من الزيادة السريعة في المكتب ، والقيادة زيادة في معدل الكريات الحمر ، وهي عملية تعرف باسم الاجهاد استجابة الكريات الحمر. الزيادة الناتجة في عدد خلايا الدم الحمراء المنتشرة يحسن نسيج تسليم الأوكسجين. فعال الاجهاد استجابة الكريات الحمر وبالتالي حاسمة بالنسبة لبقاء والتعافي من الظروف الفسيولوجية والمرضية مثل علو شاهق ، وفقر الدم ، والنزف ، والعلاج الكيميائي أو زرع الخلايا الجذعية. الفأر هو مفتاح نموذجا لدراسة تكون الكريات الحمر وردها الإجهاد. تكون الكريات الحمر الماوس النهائي (للبالغين من نوع) يأخذ مكان في كبد الجنين بين أيام الجنينية 12.5 و 15.5 ، في الطحال حديثي الولادة ، والكبار في الطحال ونخاع العظام. الطرق التقليدية لتحديد الأسلاف محمر في الأنسجة تعتمد على قدرة هذه الخلايا أن يؤدي إلى نشوء مستعمرات الخلايا الحمراء في وسائل الاعلام عندما مطلي شبه الصلبة المحتوية على المكتب. ويتم تحديد ذريتها السلائف محمر على أساس معايير شكلية. أيا من هذه الأساليب الكلاسيكية تسمح بالوصول إلى أعداد كبيرة من الخلايا محمر تمايز في مرحلة محددة للدراسة الجزيئية. نقدم هنا طريقة تدفق cytometric لتحديد ودراسة التمايز المرحلة الخاصة الأسلاف محمر والسلائف ، ومباشرة في سياق نسيج الماوس معزولة حديثا. في مقايسة يعتمد على علامات سطح الخلية CD71 ، Ter119 ، وعلى تدفق cytometric المعلمة &#39;إلى الأمام مبعثر&quot; ، والتي هي وظيفة من حجم الخلية. يمكن استخدام مقايسة CD71/Ter119 لدراسة الأسلاف محمر خلال استجابتها لإجهاد الكريات الحمر في الجسم الحي ، على سبيل المثال ، أو فقر الدم في الفئران الفئران الموجودة في ظروف انخفاض الأكسجين. ويمكن أيضا أن تستخدم لدراسة الأسلاف محمر مباشرة في أنسجة الفئران المعدلة وراثيا أو الأجنة ، بغية تقييم الدور المحدد للمسار الجزيئية تكون الكريات الحمر في تعديل.

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay at JoVE.com

Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay

وهناك طريقة التدفق cytometric لتحديد وتحليل الجزيئي للتمايز في مرحلة معينة الأسلاف محمر الفئران والسلائف ، ومباشرة في طازجة تحصد الماوس نخاع العظم والطحال أو الكبد الجنين. في مقايسة يعتمد على سطح الخلية علامات CD71 ، Ter119 ، وحجم الخلية.

تحديد وتحليل الأسلاف محمر ماوس باستخدام CD71/TER119 التدفق cytometric الفحص

The study of erythropoiesis aims to understand how red cells are formed from earlier hematopoietic and erythroid progenitors. Specifically, the rate of ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

والخلايا العصبية ونجمية المشارك الثقافة الفحص لتحليل محتوى عال من العصبية

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

تنقية الأسلاف من الهيكل العظمي والعضلات

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

والفحص الكمية للأنسولين ، معربا عن الأسلاف لتشكيل مستعمرة

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

Flow Cytometric Analysis of Bimolecular Fluorescence Complementation: A High Throughput Quantitative Method to Study Protein-protein Interaction

تدفق تحليل Cytometric من التكملة الإسفار ثنائي الجزيء: عالية الإنتاجية الأسلوب الكمي لدراسة التفاعل البروتين البروتين

Among methods to study protein-protein interaction inside cells, Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is relatively simple and sensitive. BiFC ...

SA-&#946;-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs

SA-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs

SA-β-Galactosidase القائم على فحص الفحص لتحديد الأدوية Senotherapeutic

Cell senescence is one of the hallmarks of aging known to negatively influence a healthy lifespan. Drugs able to kill senescent cells specifically in cell ...

Flow Cytometric Analysis of Extracellular Vesicles from Cell-conditioned Media

تحليل سيتوميتريك من حويصلات خارج الخلية من خلية مكيفة وسائل الإعلام تدفق

Flow cytometry (FC) is the method of choice for semi-quantitative measurement of cell-surface antigen markers. Recently, this technique has been used for ...

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors (FAPs) and Myogenic Progenitors (MPs) in Skeletal Muscle in the Rat

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors FAPs and Myogenic Progenitors MPs in Skeletal Muscle in the Rat

تحديد وعزل وتوصيف السلف الليفية الشحمية (FAPs) والذرى العضلية المنشأ (أعضاء البرلمان) في العضلات الهيكلية في الجرذ

Fibro-adipogenic Progenitors (FAPs) are resident interstitial cells in skeletal muscle that, together with myogenic progenitors (MPs), play a key role in ...

Isolation of Mouse Megakaryocyte Progenitors

عزل السلف ميغاكاريوسيت الماوس

Bone marrow megakaryocytes are large polyploid cells that ensure the production of blood platelets. They arise from hematopoietic stem cells through ...

An Integrated Approach for Microprotein Identification and Sequence Analysis

نهج متكامل لتحديد البروتين الدقيق وتحليل التسلسل

Next-generation sequencing (NGS) has propelled the field of genomics forward and produced whole genome sequences for numerous animal species and model ...

Quantitative Analysis of Mitophagy in Murine Pancreatic &#946;-Cells

Complementary Approaches to Interrogate Mitophagy Flux in Pancreatic &#946;-Cells

Assessment of Mitophagy Flux in Pancreatic Î²-Cells Using Effective and Robust Complementary Approaches (Video) | JoVE

مناهج تكميلية لاستجواب تدفق الميتوفاجي في خلايا β البنكرياس

Mitophagy is a quality control mechanism necessary to maintain optimal mitochondrial function. Dysfunctional &#946;-cell mitophagy results in insufficient ...