Name: identification and analysis of mouse erythroid progenitors using the cd71/ter119 flow-cytometric assay
Uploaded: 2011-08-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay at JoVE.com

हम UMass प्रवाह cytometry कोर धन्यवाद: रिचर्ड Konz, टेड Giehl, बारबरा Gosselin, Yuehua गुजरात और छलनी Krupoch. यह काम NIH / NHLBI HL084168 RO1 (एमएस) और NIH T32 +१३०८०७ सीए (JRS) द्वारा वित्त पोषित किया गया था. कोर मधुमेह इन्डोकिरनोलाजी अनुसंधान केंद्र अनुदान DK32520 द्वारा समर्थित संसाधनों का भी इस्तेमाल किया गया.

1. ऊतकों की कटाई <ol><li> 2 से 5 मिलीलीटर ठंड धुंधला बफर (फॉस्फेट-buffered खारा (पीबीएस) में 0.2% BSA और 5mm ग्लूकोज जोड़ी) युक्त ट्यूबों तैयार. बर्फ पर ट्यूब ऊतक फसल पहले रखो. </li><li> चुनना उचित अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार चूहो...

<ol>
	<li>Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+Fas-FasL+coexpression+by+erythropoietin+mediates+erythroblast+expansion+during+the+erythropoietic+stress+response+in.">Suppression of Fas-FasL coexpression by erythropoietin mediates erythroblast expansion during the erythropoietic stress response in.</a> 108, 123-133 (2006).</li><li>Socolovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negative+Autoregulation+by+FAS+Mediates+Robust+Fetal+Erythropoiesis.">Negative Autoregulation by FAS Mediates Robust Fetal Erythropoiesis.</a> PLoS Biol. 5, e252-e252 (2007).</li><li>Krutzik, P. O., Hale, M. B., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+murine+immunological+signaling+network+with+phosphospecific+flow+cytometry.">Characterization of the murine immunological signaling network with phosphospecific flow cytometry.</a> J Immunol. 175, 2366-2373 (2005).</li><li>Socolovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ineffective+erythropoiesis+in+Stat5a(-/-)5b(-/-)+mice+due+to+decreased+survival+of+early+erythroblasts.">Ineffective erythropoiesis in Stat5a(-/-)5b(-/-) mice due to decreased survival of early erythroblasts.</a> Blood. 98, 3261-3273 (2001).</li><li>Guihard, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MAPK+ERK1+is+a+negative+regulator+of+the+adult+steady-state+splenic+erythropoiesis.">The MAPK ERK1 is a negative regulator of the adult steady-state splenic erythropoiesis.</a> Blood. 115, 3686-3694 (2010).</li><li>Yu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+erythroid+chaperone+that+facilitates+folding+of+alpha-globin+subunits+for+hemoglobin+synthesis.">An erythroid chaperone that facilitates folding of alpha-globin subunits for hemoglobin synthesis.</a> J Clin Invest. 117, 1856-1865 (2007).</li><li>Chen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythroid+dysplasia,+megaloblastic+anemia,+and+impaired+lymphopoiesis+arising+from+mitochondrial+dysfunction.">Erythroid dysplasia, megaloblastic anemia, and impaired lymphopoiesis arising from mitochondrial dysfunction.</a> Blood. 114, 4045-4053 (2009).</li><li>Chen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolving+the+distinct+stages+in+erythroid+differentiation+based+on+dynamic+changes+in+membrane+protein+expression+during+erythropoiesis.">Resolving the distinct stages in erythroid differentiation based on dynamic changes in membrane protein expression during erythropoiesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 17413-17418 (2009).</li><li>McGrath, K. E., Bushnell, T. P., Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multispectral+imaging+of+hematopoietic+cells:+where+flow+meets+morphology.">Multispectral imaging of hematopoietic cells: where flow meets morphology.</a> J Immunol Methods. 336, 91-97 (2008).</li><li>Pop, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+key+commitment+step+in+erythropoiesis+is+synchronized+with+the+cell+cycle+clock+through+mutual+inhibition+between+PU.1+and+S-phase+progression.">A key commitment step in erythropoiesis is synchronized with the cell cycle clock through mutual inhibition between PU.1 and S-phase progression.</a> PLoS Biol. 8, (2010).</li><li>Borsook, H., Lingrel, J. B., Scaro, J. L., Millette, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+haemoglobin+in+relation+to+the+maturation+of+erythroid+cells.">Synthesis of haemoglobin in relation to the maturation of erythroid cells.</a> Nature. 196, 347-350 (1962).</li></ol>

प्रवाह - cytometric पद्धति किसी भी सेलुलर समारोह है कि एक प्रतिदीप्ति संयुग्मित विशिष्ट एंटीबॉडी या कोशिका की सतह मार्करों, प्रोटीन अभिव्यक्ति, सेल अस्तित्व, सेल संकेतन का उपयोग phospho विशिष्ट 3 एंटीबॉडी और ...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th></tr><tr><td> फैस-बायोटिन </td><td> बी.डी. Pharmingen </td><td> 554256 </td></tr><tr><td> Streptavidin-APC </td><td> आण्विक जांच </td><td> S868 </td></tr><tr><td> 40 सुक्ष्ममापी बाँझ सेल झरनी </td><td> Fisherbrand </td><td> 22363547 </td></tr><tr><td> FACS धुंधला के लिए Polystyrene दौर नीचे ट्यूबों </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 352008 </td></tr><tr><td> U नीचे 96 अच्छी तरह से थाली </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 353910 </td></tr><tr><td> ChromePure खरगोश आईजीजी </td><td> जैक्सन ImmunoResearch </td><td> 015-000-003 </td></tr><tr><td> CD71 FITC (स्टॉक 0.5mg/ml) </td><td> BD-बायोसाइंसेज </td><td> 553266 </td></tr><tr><td> Ter119 पीई (स्टॉक 0.2mg/ml) </td><td> BD-बायोसाइंसेज </td><td> 553673 </td></tr><tr><td> 7AAD </td><td> BD-बायोसाइंसेज </td><td> 559925 </td></tr><tr><td> DAPI पाउडर </td><td> रॉश </td><td> 236276 </td></tr><tr><td> FITC चूहा एंटी - माउस CD41 MWReg30 </td><td> बी.डी. Pharmingen </td><td> 553848 </td></tr><tr><td> FITC चूहा एंटी - माउस - 6B2 CD45R/B220 RA3 </td><td> बी.डी. Pharmingen </td><td> 553087 </td></tr><tr><td> FITC चूहा एंटी - माउस CD411b/Mac-1 M1/70 </td><td> बी.डी. Pharmingen </td><td> 557396 </td></tr><tr><td> FITC विरोधी माउस चूहा Ly - 6G और Ly (जीआर-1) - 6C RB6-8C5 </td><td> बी.डी. Pharmingen </td><td> 553126 </td></tr><tr><td> FITC हम्सटर विरोधी माउस 145 2C11-CD3e </td><td> बी.डी. Pharmingen </td><td> 553061 </td></tr><tr><td> APC BrdU फ्लो किट </td><td> बी.डी. Pharmingen </td><td> 557892 </td></tr><tr><td> वी - बायोटिन Annexin </td><td> बी.डी. Pharmingen </td><td> 556418 </td></tr></tbody></table>

identification and analysis of mouse erythroid progenitors using the cd71/ter119 flow-cytometric assay

erythropoiesis के अध्ययन के लिए समझने के लिए कैसे लाल कोशिकाओं को पहले hematopoietic और erythroid progenitors से गठन कर रहे हैं करना है. विशेष रूप से, लाल कोशिका गठन की दर हार्मोन (ईपीओ) erythropoietin, जिसका संश्लेषण ऊतक hypoxia के द्वारा ट्रिगर द्वारा नियंत्रित किया जाता है. ईपीओ में एक तेजी से वृद्धि में पर्याप्त ऊतक oxygenation परिणाम erythropoietic दर में वृद्धि ड्राइविंग के लिए एक खतरा, एक प्रक्रिया erythropoietic तनाव प्रतिक्रिया के रूप में जाना जाता है. लाल कोशिकाओं परिसंचारी की संख्या में वृद्धि हुई है जिसके परिणामस्वरूप ऊतक ऑक्सीजन वितरण में सुधार. एक कुशल erythropoietic तनाव प्रतिक्रिया इसलिए अस्तित्व और उच्च ऊंचाई, रक्ताल्पता, नकसीर, कीमोथेरेपी या स्टेम कोशिका प्रत्यारोपण के रूप में शारीरिक और रोग की स्थिति से वसूली के लिए महत्वपूर्ण है. माउस erythropoiesis और अपने तनाव प्रतिक्रिया के अध्ययन के लिए एक प्रमुख मॉडल है. निश्चित (वयस्क प्रकार) माउस erythropoiesis नवजात तिल्ली में, और वयस्क तिल्ली और अस्थि मज्जा में भ्रूण 12.5 और 15.5 दिनों के बीच भ्रूण जिगर में जगह लेता है. ऊतक में erythroid progenitors की पहचान की शास्त्रीय तरीकों इन कोशिकाओं की क्षमता लाल सेल कालोनियों को जन्म दे जब ईपीओ युक्त अर्द्ध ठोस मीडिया में चढ़ाया पर भरोसा करते हैं. उनके erythroid अग्रदूत संतान रूपात्मक मापदंड के आधार पर पहचाने जाते हैं. न तो इन तरीकों के शास्त्रीय भेदभाव मंच विशेष अध्ययन के लिए आणविक erythroid कोशिकाओं की बड़ी संख्या के लिए उपयोग की अनुमति देते हैं. यहाँ हम पहचान और अध्ययन हौसले से पृथक माउस ऊतक के संदर्भ में सीधे भेदभाव मंच विशिष्ट erythroid progenitors और व्यापारियों, एक प्रवाह cytometric विधि प्रस्तुत करते हैं. परख CD71 सेल सतह मार्कर, Ter119 पर निर्भर करता है, और प्रवाह cytometric &#39;आगे तितर बितर&#39; पैरामीटर पर है, जो कक्ष आकार के एक समारोह है. CD71/Ter119 परख के उनके vivo में erythropoietic तनाव के जवाब के दौरान erythroid progenitors अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, कम ऑक्सीजन की स्थिति में खून की कमी चूहों या चूहों में रखे. यह भी आनुवंशिक रूप से संशोधित वयस्क चूहों या भ्रूण के ऊतकों में सीधे erythroid progenitors का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, क्रम में करने के लिए संशोधित erythropoiesis में आणविक मार्ग की विशिष्ट भूमिका का आकलन.

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay at JoVE.com

Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay

प्रवाह cytometric पहचान और भेदभाव मंच विशिष्ट murine erythroid progenitors और हौसले से काटा माउस अस्थि मज्जा, प्लीहा या भ्रूण जिगर में सीधे व्यापारियों, आणविक विश्लेषण के लिए एक तरीका है. परख सेल सतह CD71 मार्करों, Ter119, और सेल के आकार पर निर्भर करता है.

पहचान और माउस Erythroid progenitors के विश्लेषण CD71/TER119 परख फ्लो - cytometric का उपयोग

The study of erythropoiesis aims to understand how red cells are formed from earlier hematopoietic and erythroid progenitors. Specifically, the rate of ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

इंसुलिन व्यक्त कालोनी बनाने progenitors के लिए एक मात्रात्मक परख

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

SA-&#946;-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs

एसए-जेड-गैलैक्टोसिडेस-आधारित स्क्रीनिंग सेनोथैरेपी ड्रग्स की पहचान के लिए परख

Cell senescence is one of the hallmarks of aging known to negatively influence a healthy lifespan. Drugs able to kill senescent cells specifically in cell ...

Flow Cytometric Analysis of Extracellular Vesicles from Cell-conditioned Media

कोशिका-वातानुकूलित मीडिया से Extracellular बुलबुले के प्रवाह Cytometric विश्लेषण

Flow cytometry (FC) is the method of choice for semi-quantitative measurement of cell-surface antigen markers. Recently, this technique has been used for ...

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors (FAPs) and Myogenic Progenitors (MPs) in Skeletal Muscle in the Rat

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors FAPs and Myogenic Progenitors MPs in Skeletal Muscle in the Rat

चूहे में कंकाल मांसपेशी में फाइब्रो-एडिपोजेनिक प्रोजेनिटर्स (एफएपी) और मायोजेनिक प्रोजेनिटर्स (सांसदों) की पहचान, अलगाव और लक्षण वर्णन

Fibro-adipogenic Progenitors (FAPs) are resident interstitial cells in skeletal muscle that, together with myogenic progenitors (MPs), play a key role in ...

Isolation of Mouse Megakaryocyte Progenitors

माउस मेगाकार्योसाइट प्रोजेनिटर्स का अलगाव

Bone marrow megakaryocytes are large polyploid cells that ensure the production of blood platelets. They arise from hematopoietic stem cells through ...

An Integrated Approach for Microprotein Identification and Sequence Analysis

माइक्रोप्रोटीन पहचान और अनुक्रम विश्लेषण के लिए एक एकीकृत दृष्टिकोण

Next-generation sequencing (NGS) has propelled the field of genomics forward and produced whole genome sequences for numerous animal species and model ...

Murine अग्नाशय β-कोशिकाओं में माइटोफैगी का मात्रात्मक विश्लेषण

Complementary Approaches to Interrogate Mitophagy Flux in Pancreatic &#946;-Cells

लेखक स्पॉटलाइट: प्रभावी और मजबूत पूरक दृष्टिकोण का उपयोग कर अग्नाशय β कोशिकाओं में माइटोफैगी फ्लक्स का आकलन 

अग्नाशयी β-कोशिकाओं में माइटोफैगी फ्लक्स से पूछताछ करने के लिए पूरक दृष्टिकोण

Mitophagy is a quality control mechanism necessary to maintain optimal mitochondrial function. Dysfunctional &#946;-cell mitophagy results in insufficient ...

इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके माइक्रोबियल ऑटोएग्रीगेशन का मात्रात्मक विश्लेषण

Imaging Flow Cytometry to Study Microbial Autoaggregation

लेखक स्पॉटलाइट: इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके माइक्रोबियल ऑटोएग्रीगेशन में अनुसंधान को आगे बढ़ाना

इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री माइक्रोबियल ऑटोएग्रीगेशन का अध्ययन करने के लिए

Beneficial and probiotic bacteria play essential roles in their hosts, providing various health benefits, including immunity to infectious diseases. The ...