Name: identification and analysis of mouse erythroid progenitors using the cd71/ter119 flow-cytometric assay
Uploaded: 2011-08-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay at JoVE.com

Мы благодарим UMass основной проточной цитометрии: Ричард Конц, Тед Giehl, Барбара Госселин, Yuehua Гу и Тэмми Krupoch. Эта работа финансировалась NIH / NHLBI RO1 HL084168 (MS) и NIH CA T32-130807 (JRS). Основные ресурсы, поддерживаемые Диабет Эндокринологический научный центр грант DK32520 также были использованы.

1. Заготовка тканей <ol><li> Подготовка пробирки, содержащие от 2 до 5 мл холодного буфера окрашивания (фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,2% БСА и 5 мМ глюкозы). Хранить трубы на льду до ткани урожая. </li><li> Калл мыши по соответствующим утвержденным протоколом (например, CO 2 ингаля?...

<ol>
	<li>Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+Fas-FasL+coexpression+by+erythropoietin+mediates+erythroblast+expansion+during+the+erythropoietic+stress+response+in.">Suppression of Fas-FasL coexpression by erythropoietin mediates erythroblast expansion during the erythropoietic stress response in.</a> 108, 123-133 (2006).</li><li>Socolovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negative+Autoregulation+by+FAS+Mediates+Robust+Fetal+Erythropoiesis.">Negative Autoregulation by FAS Mediates Robust Fetal Erythropoiesis.</a> PLoS Biol. 5, e252-e252 (2007).</li><li>Krutzik, P. O., Hale, M. B., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+murine+immunological+signaling+network+with+phosphospecific+flow+cytometry.">Characterization of the murine immunological signaling network with phosphospecific flow cytometry.</a> J Immunol. 175, 2366-2373 (2005).</li><li>Socolovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ineffective+erythropoiesis+in+Stat5a(-/-)5b(-/-)+mice+due+to+decreased+survival+of+early+erythroblasts.">Ineffective erythropoiesis in Stat5a(-/-)5b(-/-) mice due to decreased survival of early erythroblasts.</a> Blood. 98, 3261-3273 (2001).</li><li>Guihard, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MAPK+ERK1+is+a+negative+regulator+of+the+adult+steady-state+splenic+erythropoiesis.">The MAPK ERK1 is a negative regulator of the adult steady-state splenic erythropoiesis.</a> Blood. 115, 3686-3694 (2010).</li><li>Yu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+erythroid+chaperone+that+facilitates+folding+of+alpha-globin+subunits+for+hemoglobin+synthesis.">An erythroid chaperone that facilitates folding of alpha-globin subunits for hemoglobin synthesis.</a> J Clin Invest. 117, 1856-1865 (2007).</li><li>Chen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythroid+dysplasia,+megaloblastic+anemia,+and+impaired+lymphopoiesis+arising+from+mitochondrial+dysfunction.">Erythroid dysplasia, megaloblastic anemia, and impaired lymphopoiesis arising from mitochondrial dysfunction.</a> Blood. 114, 4045-4053 (2009).</li><li>Chen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolving+the+distinct+stages+in+erythroid+differentiation+based+on+dynamic+changes+in+membrane+protein+expression+during+erythropoiesis.">Resolving the distinct stages in erythroid differentiation based on dynamic changes in membrane protein expression during erythropoiesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 17413-17418 (2009).</li><li>McGrath, K. E., Bushnell, T. P., Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multispectral+imaging+of+hematopoietic+cells:+where+flow+meets+morphology.">Multispectral imaging of hematopoietic cells: where flow meets morphology.</a> J Immunol Methods. 336, 91-97 (2008).</li><li>Pop, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+key+commitment+step+in+erythropoiesis+is+synchronized+with+the+cell+cycle+clock+through+mutual+inhibition+between+PU.1+and+S-phase+progression.">A key commitment step in erythropoiesis is synchronized with the cell cycle clock through mutual inhibition between PU.1 and S-phase progression.</a> PLoS Biol. 8, (2010).</li><li>Borsook, H., Lingrel, J. B., Scaro, J. L., Millette, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+haemoglobin+in+relation+to+the+maturation+of+erythroid+cells.">Synthesis of haemoglobin in relation to the maturation of erythroid cells.</a> Nature. 196, 347-350 (1962).</li></ol>

Потока цитометрии методология позволяет одновременно расследовании любых клеточных функций, которые могут быть обнаружены с помощью флуоресценции, конъюгированных специфические антитела или лиганд, в том числе на поверхности клеток маркеры, экспрессии белка, выживаемость клеток, к?...

<table border="1"><tbody><tr><th> Название реагента </th><th> Компания </th><th> Номер в каталоге </th></tr><tr><td> Fas-биотин </td><td> BD Pharmingen </td><td> 554256 </td></tr><tr><td> Стрептавидином АПК </td><td> Молекулярные зонды </td><td> S868 </td></tr><tr><td> 40 мкм стерильный фильтр ячейки </td><td> Fisherbrand </td><td> 22363547 </td></tr><tr><td> Полистирол с круглым дном трубы для окрашивания FACS </td><td> BD Сокол </td><td> 352008 </td></tr><tr><td> U-96 и нижняя пластина </td><td> BD Сокол </td><td> 353910 </td></tr><tr><td> ChromePure кролика IgG </td><td> Джексон ImmunoResearch </td><td> 015-000-003 </td></tr><tr><td> CD71-FITC (фондовый 0.5mg/ml) </td><td> BD-биологических наук </td><td> 553266 </td></tr><tr><td> Ter119-PE (фондовый 0.2mg/ml) </td><td> BD-биологических наук </td><td> 553673 </td></tr><tr><td> 7AAD </td><td> BD-биологических наук </td><td> 559925 </td></tr><tr><td> DAPI порошок </td><td> Roche </td><td> 236276 </td></tr><tr><td> FITC Крыса Анти-CD41 мыши MWReg30 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553848 </td></tr><tr><td> FITC Крыса антимышиным CD45R/B220 RA3-6B2 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553087 </td></tr><tr><td> FITC Крыса антимышиным CD411b/Mac-1 M1/70 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 557396 </td></tr><tr><td> FITC Крыса антимышиным Ly-6G и Ли-6C (Gr-1) RB6-8C5 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553126 </td></tr><tr><td> FITC Hamster антимышиным CD3e 145-2C11 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553061 </td></tr><tr><td> APC BrdU потока комплект </td><td> BD Pharmingen </td><td> 557892 </td></tr><tr><td> Аннексин V-биотин </td><td> BD Pharmingen </td><td> 556418 </td></tr></tbody></table>

identification and analysis of mouse erythroid progenitors using the cd71/ter119 flow-cytometric assay

Исследования эритропоэза цели понять, как красный клетки образуются из более ранних гемопоэтических и эритроидных предшественников. В частности, скорость образования красных клетка регулирует гормон эритропоэтин (ЭПО), синтез которых вызывается тканевой гипоксии. Угроза на достаточное оксигенации тканей приводит к быстрому увеличению ЭПО, что привело к увеличению эритропоэза случае, процесс, известный как эритропоэтин реакцию на стресс. В результате увеличение количества циркулирующих эритроцитов улучшает доставку кислорода в тканях. Эффективное эритропоэтической стрессовой реакции является поэтому чрезвычайно важным для выживания и восстановления от физиологических и патологических состояний, таких как большой высоте, анемия, кровотечение, химиотерапии или трансплантации стволовых клеток. Мышь ключевых модель для исследования эритропоэза и его стрессовую реакцию. Мышь окончательного (взрослый тип) эритропоэза происходит в печени плода между эмбриональными дней 12,5 и 15,5, в неонатальном селезенки и во взрослой селезенке и костном мозге. Классические методы определения эритроидных предшественников в ткани полагаются на способность этих клеток вызвать красные колонии клетка при посеве в Epo содержащих полутвердых СМИ. Их эритроидных предшественников потомства опознаются по морфологическим критериям. Ни один из этих классических методов обеспечения доступа к большому числу дифференциации стадии конкретных эритроидных клеток для молекулярных исследований. Здесь мы представляем потока цитометрии метод идентификации и изучения дифференциации стадии конкретных эритроидных предшественников и прекурсоров, непосредственно в контексте свежевыделенных мыши ткани. Анализ основывается на поверхности клеток маркеры CD71, Ter119, а на поток-цитометрии параметр &quot;вперед рассеяния&quot;, которая является функцией от размера ячейки. CD71/Ter119 анализ может быть использован для изучения эритроидных предшественников во время их реакции на стресс эритропоэтической в ​​естественных условиях, например, у анемичных мышей или мышей размещалась в условиях низкой кислорода. Он также может быть использован для изучения эритроидных предшественников непосредственно в тканях генетически модифицированных взрослых мышей или эмбрионов, с тем чтобы оценить специфическую роль изменение молекулярный путь в эритропоэза.

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay at JoVE.com

Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay

Блок-цитометрии метод для идентификации и молекулярного анализа дифференциации стадии конкретных мышиной предшественников эритроидных и прекурсоров, прямо в только что заготовленных мозга мыши костей, селезенки и печени плода. Анализ основывается на поверхности клеток маркеры CD71, Ter119 и размера ячейки.

Идентификация и анализ Мышь прародителей эритроидных использованием CD71/TER119 Flow-цитометрии Пробирной

The study of erythropoiesis aims to understand how red cells are formed from earlier hematopoietic and erythroid progenitors. Specifically, the rate of ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Нейронов и астроцитов сотрудничеству культуры Пробирной высоких Анализ содержания Нейротоксичность

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Очистка прародителей из скелетных мышц

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

Количественный анализ на инсулиноподобный выражения колониеобразующих прародителей

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

Flow Cytometric Analysis of Bimolecular Fluorescence Complementation: A High Throughput Quantitative Method to Study Protein-protein Interaction

Проточной цитометрии бимолекулярного флуоресценции Комплементация: Высокая пропускная способность Количественный метод изучения взаимодействия белок-белок

Among methods to study protein-protein interaction inside cells, Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is relatively simple and sensitive. BiFC ...

SA-&#946;-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs

SA-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs

СА-З-Галактозидаза на основе скрининга Анализ для выявления senotherapeutic наркотиков

Cell senescence is one of the hallmarks of aging known to negatively influence a healthy lifespan. Drugs able to kill senescent cells specifically in cell ...

Flow Cytometric Analysis of Extracellular Vesicles from Cell-conditioned Media

Гранулярных анализ внеклеточного Vesicles из клеток кондиционером СМИ потока

Flow cytometry (FC) is the method of choice for semi-quantitative measurement of cell-surface antigen markers. Recently, this technique has been used for ...

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors (FAPs) and Myogenic Progenitors (MPs) in Skeletal Muscle in the Rat

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors FAPs and Myogenic Progenitors MPs in Skeletal Muscle in the Rat

Идентификация, выделение и характеристика фибро-адипогенных предшественников (ФАП) и миогенных прародителей (МП) в скелетных мышцах крыс

Fibro-adipogenic Progenitors (FAPs) are resident interstitial cells in skeletal muscle that, together with myogenic progenitors (MPs), play a key role in ...

Isolation of Mouse Megakaryocyte Progenitors

Выделение прародителей мегакариоцитов мыши

Bone marrow megakaryocytes are large polyploid cells that ensure the production of blood platelets. They arise from hematopoietic stem cells through ...

An Integrated Approach for Microprotein Identification and Sequence Analysis

Комплексный подход к идентификации микропротеинов и анализу последовательностей

Next-generation sequencing (NGS) has propelled the field of genomics forward and produced whole genome sequences for numerous animal species and model ...

Quantitative Analysis of Mitophagy in Murine Pancreatic &#946;-Cells

Complementary Approaches to Interrogate Mitophagy Flux in Pancreatic &#946;-Cells

Assessment of Mitophagy Flux in Pancreatic Î²-Cells Using Effective and Robust Complementary Approaches (Video) | JoVE

Комплементарные подходы к исследованию потока митофагии в β-клетках поджелудочной железы

Mitophagy is a quality control mechanism necessary to maintain optimal mitochondrial function. Dysfunctional &#946;-cell mitophagy results in insufficient ...