Name: lentiviral-mediated knockdown during ex vivo erythropoiesis of human hematopoietic stem cells
Uploaded: 2011-07-16T14:00:00
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我々は、血液サンプルを提供するためL. DouayとMC Giarratana（大学パリVI、フランス） のex vivo赤血球分化についてのアドバイス、D.アランとH.アトキンス（オフジー、カナダの）感謝（オタワ病院研究倫理審査会で得られた＃ 2007804 - 01H）、批判的に原稿を読み取るためのレンチウイルスベクターとFJディルワース（オフジー、カナダ）を提供するためのD. Trono（エコール連邦工科大学ローザンヌ校）。このプロジェクトはMBCGPにCIHRの助成金（MOP - 82813）によって賄われていたオンタリオ州の研究基金計算Regulomicsトレーニングポストドクトラルフェローシップの受賞者です。 MBは遺伝子発現調節のカナダリサーチチェアを保持しています。

Part I. ex vivo erythropoiesis of human hematopoietic stem/progenitor cells
1. Isolation of CD34+ human hematopoietic stem/progenitor cells
Human CD34+ cell population, which contains a mixture of hematopoietic stem cells (HSCs) and early progenitors 8, 
is harvested from umbilical cord blood, peripheral blood mobilized with G-CSF (leukapheresis) or bone marrow (Figure 1-Step1). If using cord blood or peripheral 
blood, go direct...

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	<li>Orkin, S. H., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoiesis:+an+evolving+paradigm+for+stem+cell+biology.">Hematopoiesis: an evolving paradigm for stem cell biology.</a> Cell. 132, 631-644 (2008).</li><li>Kim, S. I., Bresnick, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+erythropoiesis:+emerging+mechanisms+and+principles.">Transcriptional control of erythropoiesis: emerging mechanisms and principles.</a> Oncogene. 26, (2007).</li><li>Friend, C., Patuleia, M. 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メソッドの数は、成功の可変度と文化の中で赤血球系細胞を区別するために以前に使用されている。例えば、MS - 5上で共培養することなく一部のプロトコルは、赤血球系細胞の拡張を使用できますが、12月17日 、完全に成熟した除核赤血球の生産に効率的ではありません。他の方法が効率的に眼球摘出を可能にする一方で、それが増殖18,19を犠牲にしています。我々が最初にDo...

lentiviral-mediated knockdown during ex vivo erythropoiesis of human hematopoietic stem cells

赤血球は細胞の分化を研究するために一般的に使用されるモデルシステムです。赤血球中に、多能性成体ヒト造血幹細胞（HSC）はoligopotent前駆細胞、コミットされた前駆体および成熟赤血球1に分化する。このプロセスは、付随して他の細胞タイプ2に固有の遺伝子を抑制する一方、特定の転写因子は、系統特異的遺伝子を活性化により、遺伝子発現のレベルでの大部分は規制されています。赤血球産生を制御する転写因子に関する研究は多くの場合、赤血球細胞が分化3-5の特定の段階で、ある程度、表現するヒトおよびマウス細胞株を使用して実行されます。しかし、形質転換細胞株は、部分的にしか赤血球系細胞を模倣することができますし、最も重要な、彼らは1つが理解しやすく、最終的な赤血球の運命に向かって多くの段階を経て細胞の進捗状況として発生する動的な変化を研究することはできません。したがって、現在の課題は、ゲノミクスおよびプロテオミクスの実験を行うのに十分な量で分化の様々な段階での主造血幹細胞と赤血球細胞の比較的均質な集団を得るために、プロトコルの開発のまま。 ここでは、臍帯血、骨髄、またはG - CSF（白血球搬出）を動員成人末梢血のいずれかから単離されたヒト造血幹/前駆細胞から赤血球分化を誘導するためにex vivoでの細胞培養のプロトコルについて説明します。最初にDouay研究所6によって開発されたこの培養系は、、骨髄の微小環境を模倣する間葉系細胞にサイトカインと共培養を使用しています。このex vivoの分化のプロトコルを使用して、我々は、赤血球前駆細胞の強力な増幅、排他的に赤血球系統と除核赤血球のステージへの完全な成熟に向かって分化誘導を観察。したがって、このシステムは、赤血球の系統に沿って造血幹細胞の進行など、転写制御の分子機構を研究する機会を提供しています。 転写レベルでの赤血球産生を研究することも主要な赤血球系細胞で過剰発現やノックダウン、特定の要因に能力を必要とします。この目的のために、我々は7分割し、非分裂細胞の両方を効率的に感染を可能にするレンチウイルスを介した遺伝子送達系を使用してください。ここで我々は効率的に初代ヒト赤血球系細胞における転写因子のTAL1をノックダウンすることができることを示している。さらに、GFPの発現は90％近くにレンチウイルス感染効率を示しています。従って、我々のプロトコルは、制御赤血球その転写因子の調節ネットワークの特性評価のための非常に有用なシステムを提供します。

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Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

アン<em&gt;生体外で</em&gt;プロトコルが記述されている造血幹/前駆細胞から成熟ヒト赤血球を生成する。さらに我々は、ノックダウン一次赤血球系細胞における転写因子のTAL1をするために効率的なレンチウイルスの配信方法を説明します。レンチウイルスによる遺伝子導入効率はGFP発現ウイルスを用いて示されています。

レンチウイルスを介したノックダウン中生体外で</emヒト造血幹細胞の>赤血球

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Research

JoVE Journal

Biology

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

造血幹細胞の分離と移植（造血幹細胞）

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

マウス胚性幹細胞から造血幹細胞の導出

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Passaging Human Neural Stem Cells

ヒト神経幹細胞を継代

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

プラセンタから造血幹細胞の単離と解析

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

マウス卵黄嚢とAGMから早期の造血幹細胞の分離

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

オリゴデンドロサイト前駆体に胚性幹細胞の分化

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

初代ヒト卵管上皮細胞のex vivoでの文化

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

マウス造血幹細胞およびリネージュコミット前駆細胞の表現型の解析と分離

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

ex vivoで培養マウス胚の皮膚およびメラノブラストの移行のライブイメージング

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

共焦点および多光子顕微鏡を用いて5蛍光タンパク質によってマーク造血幹細胞および前駆細胞の生体内でクローン追跡で

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

レンチウイルスを介したノックダウン中生体外で赤血球