Name: mosaic analysis of gene function in postnatal mouse brain development by using virus-based cre recombination
Uploaded: 2011-08-01T12:00:00
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Este trabajo es apoyado por una subvención del NIH RO1 (NINDS).

1. Los virus de la preparación para la inyección <ol><li> rAAVs fueron adquiridos por el proveedor recomienda comerciales, pero también pueden ser producidos en un laboratorio de propio (véase más adelante). La solución del virus se produce normalmente a un título de 1x10 ~ 12 copias del genoma por mililitro (GC / ml) y se puede utilizar en título completo de manipular un gran número de células. Alternativamente, pueden ser diluidos para producir el nivel deseado de etiquetado escasa. La dilución...

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	<li>Geschwind, D. H., Levitt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autism+spectrum+disorders:+developmental+disconnection+syndromes.">Autism spectrum disorders: developmental disconnection syndromes.</a> Curr Opin Neurobiol. 17, 103-111 (2007).</li><li>Giedd, J. N., Rapoport, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+MRI+of+pediatric+brain+development:+what+have+we+learned+and+where+are+we+going?.">Structural MRI of pediatric brain development: what have we learned and where are we going?.</a> Neuron. 67, 728-734 (2010).</li><li>Chedotal, A., Richards, L. 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El método de inyección neonatal viral que aquí se presenta ofrece una forma sencilla y rápida para generar mosaicos en vivo para el estudio del desarrollo del cerebro postnatal. El método tiene la ventaja de los alelos floxed que están actualmente disponibles, así como aquellos que se están realizando a través de los genes de alto rendimiento focalización del proyecto 6. En comparación con el uso de la expresión transgénica de la CRE, este método proporciona una forma rápida para proba...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> rAAV8-Cre,-GFP, DsRed-, </td><td> Vector Biolabs </td><td> # 7060, # 7061, la orden de encargo </td><td> http://www.vectorbiolabs.com </td></tr><tr><td> Harvard bomba 11 Plus </td><td> Harvard Apparatus </td><td> # 702208 </td><td> (No hay puerto de pedal) </td></tr><tr><td> El epitelio pigmentario de la retina de inyección Kit </td><td> Mundial de Instrumentos de Precisión </td><td> RPE-KIT </td><td> Contiene conectivo tubos, agujas de inyección (36G), y soporte de la aguja </td></tr><tr><td> NanoFil jeringa, 100μl </td><td> Mundial de Instrumentos de Precisión </td><td> NANOFIL-100 </td><td> Incluye aguja de carga reutilizables </td></tr><tr><td> D-PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 14040-117 </td><td></td></tr><tr><td> GFP de anticuerpos </td><td> Aves </td><td> GFP-1020 </td><td></td></tr><tr><td> Anticuerpos DsRed </td><td> Clontech </td><td> 632496 </td><td></td></tr><tr><td> El bloque de calentamiento </td><td> VWR </td><td> 97042-610 </td><td></td></tr><tr><td> ROSA26R ratón </td><td> Jackson Laboratory </td><td> 003309 </td><td></td></tr></tbody></table>

mosaic analysis of gene function in postnatal mouse brain development by using virus-based cre recombination

Función normal del cerebro se basa no sólo en el desarrollo embrionario, cuando las principales vías neuronales se establecen, sino también sobre el desarrollo postnatal cuando los circuitos neuronales son maduros y refinados. Regulación deficiente en esta etapa puede conducir a trastornos neurológicos y psiquiátricos como el autismo y la esquizofrenia 1,2. Muchos genes han sido estudiados en el cerebro prenatal y se encontró crucial para muchos procesos de desarrollo 3.5. Sin embargo, su función en el cerebro postnatal se desconoce, en parte debido a su eliminación en ratones conduce a menudo a mortalidad durante el desarrollo neonatal, y en parte porque sus requerimientos en el desarrollo temprano dificulta el análisis post-natal. Para superar estos obstáculos, los alelos floxed de estos genes se están generando en los 6 ratones. Cuando se combina con alelos transgénicos que expresan la recombinasa Cre en tipos celulares específicos, la supresión condicional se puede lograr para estudiar la función génica en el cerebro postnatal. Sin embargo, este método requiere alelos adicionales y el tiempo extra (3-6 meses) para generar los ratones con genotipos apropiados, lo que limita la expansión del análisis genético a gran escala en el cerebro del ratón. Aquí se demuestra un enfoque complementario que utiliza de forma viral, expresa Cre para estudiar estos alelos floxed rápida y sistemáticamente en el desarrollo cerebral postnatal. Mediante la inyección de recombinante virus adeno-asociados (rAAVs) 7,8 codificación Cre en el cerebro neonatal, que son capaces de eliminar el gen de interés en las diferentes regiones del cerebro. Al controlar el título viral y coexpressing un marcador de la proteína fluorescente, que al mismo tiempo se puede lograr la inactivación de genes mosaico y etiquetado neuronal escaso. Este método evita la necesidad de muchos genes en el desarrollo temprano, y nos permite estudiar la función de las células autónomas en muchos procesos críticos en el desarrollo cerebral postnatal, incluyendo el crecimiento axonal y dendrítico, ramas, y los azulejos, así como la formación de sinapsis y refinamiento. Este método ha sido utilizado con éxito en nuestro propio laboratorio (resultados no publicados) y otros 8,9, y se puede ampliar a otros virus, como lentivirus 9, así como a la expresión de shRNA o dominante proteínas activas 10. Por otra parte, mediante la combinación de esta técnica con la electrofisiología, así como de reciente desarrollo de herramientas de imagen óptica 11, este método ofrece una nueva estrategia para estudiar cómo las vías genéticas influyen en el desarrollo de circuitos neuronales y la función en ratones y ratas.

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Mosaic Analysis of Gene Function in Postnatal Mouse Brain Development by Using Virus-based Cre Recombination

Un<em&gt; In vivo</emMétodo&gt; para poner a prueba la función del gen en el cerebro postnatal se describe. AAV recombinantes que expresan Cre y / o una proteína fluorescente se inyectan en el cerebro de ratones recién nacidos. Inactivación del gen de mosaico y el etiquetado neuronales dispersos se logra, permitiendo un análisis rápido de la función de genes en los procesos críticos para el desarrollo de circuitos neuronales.

Mosaico de Análisis de la función de genes en el desarrollo postnatal del cerebro del ratón mediante el uso de virus basada en la recombinación Cre

Normal brain function relies not only on embryonic development when major neuronal pathways are established, but also on postnatal 
development when ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Gen de entrega de cerebro de rata postnatal por la inyección no ventricular plásmido y electroporación

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Investigación

Neurociencias

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Del ratón en el útero de electroporación: Transefection controlada Gene espacio-temporal

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

En electroporación in ovo en el mesencéfalo polluelo para estudiar la función génica en el desarrollo neuronal dopaminérgica

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Las fibras serotoninérgicos proyección de imagen en la médula espinal de ratón El uso de la claridad / Técnica CÚBICO

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Inducing Cre-lox Recombination in Mouse Cerebral Cortex Through In Utero Electroporation

Inducing Cre-lox Recombination in Mouse Cerebral Cortex Through In Utero Electroporation

Inducción de la recombinación del Cre-lox en la corteza Cerebral de ratón a través de electroporación en el útero

Cell-autonomous neuronal functions of genes can be revealed by causing loss or gain of function of a gene in a small and sparse population of neurons. To ...

Homochronic Transplantation of Interneuron Precursors into Early Postnatal Mouse Brains

Homochronic trasplante de precursores de interneurona en cerebros de ratón Postnatal temprana

Neuronal fate determination and maturation requires an intricate interplay between genetic programs and environmental signals. However, disentangling the ...

Studying Brain Function in Children Using Magnetoencephalography

Estudiar la función cerebral en niños utilizando Magnetoencefalografía

Magnetoencephalography (MEG) is a non-invasive neuroimaging technique which directly measures magnetic fields produced by the electrical activity of the ...

Production, Purification, and Quality Control for Adeno-associated Virus-based Vectors

Producción, purificación y Control de calidad de vectores de base de Virus Adeno-asociado

Gene delivery tools based on adeno-associated viruses (AAVs) are a popular choice for the delivery of transgenes to the central nervous system (CNS), ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Implantación crónica de todo cortical matriz electrocorticográfica en el tití común

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...

Transplantation of Chemogenetically Engineered Cortical Interneuron Progenitors into Early Postnatal Mouse Brains

Trasplante de progenitores interneuronas corticales de ingeniería química en cerebros de ratón postnatal temprano

Neuronal development is regulated by a complex combination of environmental and genetic factors. Assessing the relative contribution of each component is ...