Name: particle agglutination method for poliovirus identification
Uploaded: 2011-04-20T14:00:00
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Somos gratos a Junko Wada por sua excelente assistência técnica. Somos gratos ao Prof Akio Nomoto por gentilmente fornecer um vetor de expressão de baculovírus para PVR-IgG2a. Este estudo foi apoiado em parte pela Grants-in-Aid para a Promoção da Erradicação da Pólio e Pesquisa Emergentes e Re-emergentes Doenças Infecciosas do Ministério da Saúde, Trabalho e Bem-Estar.

1. Preparação de meio de manutenção (MM) e de crescimento médio (GM) Para a preparação de MM e GM, consulte um manual de laboratório Poliomielite da OMS 1. Meio modificado Dulbecco Águia (DMEM) suplementado com 2% de soro fetal bovino (FCS) e 10% FCS podem ser utilizados como substitutos de MM e GM, respectivamente. 2. Preparação de anticorpos anti-PV <ol><li> Anticorpos anti-PV reconstituir (RIVM PV digitando anti-soro) por adição de águ...

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	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , (2004).</li><li>Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+particle+agglutination+method+with+soluble+virus+receptor+for+identification+of+poliovirus.">Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus.</a> J. Clin. Microbiol. 48, 2698-2702 (2010).</li><li>Bibb, J. A., Witherell, G., Bernhardt, G., Wimmer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+poliovirus+with+its+cell+surface+binding+site.">Interaction of poliovirus with its cell surface binding site.</a> Virology. 201, 107-115 (1994).</li><li>Koike, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+poliovirus+receptor+protein+is+produced+both+as+membrane-bound+and+secreted+forms.">The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms.</a> Embo J. 9. , 3217-3224 (1990).</li><li>Mendelsohn, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+of+a+human+poliovirus+receptor+gene+into+mouse+cells.">Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 83, 7845-7849 (1986).</li><li>Mendelsohn, C. L., Wimmer, E., Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+receptor+for+poliovirus:+molecular+cloning,+nucleotide+sequence,+and+expression+of+a+new+member+of+the+immunoglobulin+superfamily.">Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequence, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily.</a> Cell. 56, 855-865 (1989).</li><li>Arita, M., Koike, S., Aoki, J., Horie, H., Nomoto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+poliovirus+with+its+purified+receptor+and+conformational+alteration+in+the+virion.">Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformational alteration in the virion.</a> J. Virol. 72, 3578-3586 (1998).</li><li>McDermott, B. M., Rux, A. H., Eisenberg, R. J., Cohen, G. H., Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+distinct+binding+affinities+of+poliovirus+for+its+cellular+receptor.">Two distinct binding affinities of poliovirus for its cellular receptor.</a> J. Biol. Chem. 275, 23089-23096 (2000).</li><li>Pipkin, P. A., Wood, D. J., Racaniello, V. R., Minor, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+L+cells+expressing+the+human+poliovirus+receptor+for+the+specific+detection+of+polioviruses+in+vitro.">Characterisation of L cells expressing the human poliovirus receptor for the specific detection of polioviruses in vitro.</a> J. Virol. Methods. 41, 333-340 (1993).</li><li>Avoort, H. G. v. a. n. d. e. r. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+five+methods+for+intratypic+differentiation+of+polioviruses.">Comparative study of five methods for intratypic differentiation of polioviruses.</a> J. Clin. Microbiol. 33, 2562-2566 (1995).</li><li>Kilpatrick, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+group-,+serotype-,+and+vaccine+strain-specific+identification+of+poliovirus+isolates+by+real-time+reverse+transcription-PCR+using+degenerate+primers+and+probes+containing+deoxyinosine+residues.">Rapid group-, serotype-, and vaccine strain-specific identification of poliovirus isolates by real-time reverse transcription-PCR using degenerate primers and probes containing deoxyinosine residues.</a> J. Clin. Microbiol. 47, 1939-1941 (2009).</li></ol>

O único ponto deste ensaio PA é a utilização da molécula de PVR em vez de anticorpos anti-PV para a detecção de PV 2. Isso permite uma interação específica das partículas sensibilizadas gelatina com PV com uma afinidade uniforme para todos os três sorotipos do PV 3-6. Nós usamos uma forma immunoadhesin de PVR (PVR-IgG2a) para a sensibilização das partículas de gelatina, porque as formas monoméricas de PVR têm apenas afinidades moderada para o único local de ligação do vírion (constante d...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários </th></tr><tr><td> Sensibilizadas-partículas de gelatina </td><td> Fujirebio Inc. </td><td></td><td> Kit de teste </td></tr><tr><td> Buffer de reconstituição </td><td> Fujirebio Inc. </td><td></td><td> Kit de teste </td></tr><tr><td> Placa de microtitulação </td><td> Fujirebio Inc. </td><td></td><td> Kit de teste </td></tr><tr><td> Anti-PV anticorpos </td><td> RIVM </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

particle agglutination method for poliovirus identification

Do Global de Erradicação da Pólio, diagnóstico laboratorial desempenha um papel crítico por isolar e identificar PV a partir de amostras de fezes de paralisia flácida aguda (PFA) casos. Na Organização Mundial de Saúde (OMS) Global Polio Laboratory Network, PV isolamento e identificação estão sendo realizadas por meio do sistema de cultura celular e em tempo real de RT-PCR, respectivamente. Na era pós-erradicação do PV, procedimentos de identificação simples e rápido seria útil para rápida confirmação de casos de pólio nos laboratórios nacionais. No presente estudo, vamos mostrar o procedimento do romance de ensaio PA desenvolvidos para identificação PV. Este ensaio PA utiliza interação de PV receptor molécula (PVR) e virion que é afinidade específica e uniforme para todos os sorotipos do PV. O procedimento é simples (um procedimento passo em placas de reação) e rápido (resultados podem ser obtidos dentro de 2 h de reação), eo resultado é visualmente observados (observação de aglutinação de partículas de gelatina).

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Particle Agglutination Method for Poliovirus Identification

A recentemente desenvolvida romance de partículas de aglutinação do ensaio (PA) utilizando molécula receptora vírus permitiu uma identificação rápida e fácil de poliovírus (PV). Neste artigo, vamos mostrar o procedimento para o ensaio PA para identificação PV.

Método de aglutinação de partículas de Identificação Poliovirus

In the Global Polio Eradication Initiative, laboratory diagnosis plays a critical role by isolating and identifying PV from the stool samples of acute ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Peptide-based Identification of Functional Motifs and their Binding Partners

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Specific short  peptides derived from motifs found in full-length proteins, in our case HIV-1  Nef, not only retain their biological function, but can ...

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Calculando a média de Viral glicoproteína do envelope Spikes de Electron Cryotomography reconstruções com Jsubtomo

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The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

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Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

Citometria de fluxo de partículas ligadas aos Bet v 1 alérgeno no PM10

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

Formação de biofilmes induzida por sais biliares em patógenos entéricos: técnicas para identificação e quantificação

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Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

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Identificação de marcadores de virulência de Mycobacterium abscessus para replicação intracelular em fagócitos

What differentiates Mycobacterium abscessus from other saprophytic mycobacteria is the ability to resist phagocytosis by human macrophages and the ability ...