Name: evaluation of mammary gland development and function in mouse models
Uploaded: 2011-07-21T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models at JoVE.com

Questi studi sono stati finanziati dalla CIHR e sovvenzioni per CBCRA DWL. IP è stato finanziato da borse di studio da CIHR-STP, FRSQ e CIHR. MKGS è stato finanziato da borse di studio e OGS CIHR-STP. Gli autori ringraziano Kevin Barr per la sua assistenza con l&#39;allevamento del mouse.

1. Dissezione della ghiandola mammaria <ol><li> Euthanize il mouse utilizzando CO 2 inalazione. Evitare dislocazione cervicale, se possibile, in quanto può danneggiare i vasi sanguigni del collo e provocare l&#39;accumulo di sangue intorno ghiandole mammarie, rendendo più difficile la dissezione. Tuttavia, se gli altri criteri sono da valutare nel topo lo stesso, quali i livelli di ossitocina nel sangue, i metodi di eutanasia alternativa può essere necessario, anche se ciò deve essere valutato dal IACUC...

<ol>
	<li>Geddes, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inside+the+lactating+breast:+the+latest+anatomy+research.">Inside the lactating breast: the latest anatomy research.</a> J Midwifery Womens Health. 52, 556-556 (2007).</li><li>Sternlicht, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+stages+in+mammary+gland+development:+the+cues+that+regulate+ductal+branching+morphogenesis.">Key stages in mammary gland development: the cues that regulate ductal branching morphogenesis.</a> Breast Cancer Res. 8, 201-201 (2006).</li><li>Silberstein, G. B., Flanders, K. C., Roberts, A. B., Daniel, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+mammary+morphogenesis:+evidence+for+extracellular+matrix-mediated+inhibition+of+ductal+budding+by+transforming+growth+factor-beta+1.">Regulation of mammary morphogenesis: evidence for extracellular matrix-mediated inhibition of ductal budding by transforming growth factor-beta 1.</a> Dev Biol. 152, 354-354 (1992).</li><li>Daniel, C. W., Robinson, S., Silberstein, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+TGF-beta+in+patterning+and+growth+of+the+mammary+ductal+tree.">The role of TGF-beta in patterning and growth of the mammary ductal tree.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 1, 331-331 (1996).</li><li>Neville, M. C., Daniel, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mammary gland : development, regulation, and function. , (1987).</li><li>Oakes, S. R., Hilton, H. N., Ormandy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alveolar+switch:+coordinating+the+proliferative+cues+and+cell+fate+decisions+that+drive+the+formation+of+lobuloalveoli+from+ductal+epithelium.">The alveolar switch: coordinating the proliferative cues and cell fate decisions that drive the formation of lobuloalveoli from ductal epithelium.</a> Breast Cancer Res. 8, 207-207 (2006).</li><li>Anderson, S. M., Rudolph, M. C., McManaman, J. L., Neville, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+stages+in+mammary+gland+development.+Secretory+activation+in+the+mammary+gland:+it's+not+just+about+milk+protein+synthesis!.">Key stages in mammary gland development. Secretory activation in the mammary gland: it's not just about milk protein synthesis!.</a> Breast Cancer Res. 9, 204-204 (2007).</li><li>Reversi, A., Cassoni, P., Chini, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+receptor+signaling+in+myoepithelial+and+cancer+cells.">Oxytocin receptor signaling in myoepithelial and cancer cells.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 10, 221-221 (2005).</li><li>Haslam, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+to+cell+interactions+and+normal+mammary+gland+function.">Cell to cell interactions and normal mammary gland function.</a> J Dairy Sci. 71, 2843-2843 (1988).</li><li>Plante, I., Laird, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+levels+of+connexin43+result+in+impaired+development+of+the+mammary+gland+in+a+mouse+model+of+oculodentodigital+dysplasia.">Decreased levels of connexin43 result in impaired development of the mammary gland in a mouse model of oculodentodigital dysplasia.</a> Dev Biol. 318, 312-312 (2008).</li><li>Talhouk, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterocellular+interaction+enhances+recruitment+of+alpha+and+beta-catenins+and+ZO-2+into+functional+gap-junction+complexes+and+induces+gap+junction-dependant+differentiation+of+mammary+epithelial+cells.">Heterocellular interaction enhances recruitment of alpha and beta-catenins and ZO-2 into functional gap-junction complexes and induces gap junction-dependant differentiation of mammary epithelial cells.</a> Exp Cell Res. 314, 3275-3275 (2008).</li><li>Palmer, C. A., Neville, M. C., Anderson, S. M., McManaman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+lactation+defects+in+transgenic+mice.">Analysis of lactation defects in transgenic mice.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 11, 269-269 (2006).</li><li>Howlin, J., McBryan, J., Martin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pubertal+mammary+gland+development:+insights+from+mouse+models.">Pubertal mammary gland development: insights from mouse models.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 11, 283-283 (2006).</li><li>You, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+mammary+gland+development+in+prepubertal+male+rats+exposed+to+genistein+and+methoxychlor.">Modulation of mammary gland development in prepubertal male rats exposed to genistein and methoxychlor.</a> Toxicol Sci. 66, 216-216 (2002).</li><li>Grill, C. J., Cohick, W. S., Sherman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postpubertal+development+of+the+rat+mammary+gland+is+preserved+during+iron+deficiency.">Postpubertal development of the rat mammary gland is preserved during iron deficiency.</a> J Nutr. 131, 1444-1444 (2001).</li><li>Hennighausen, L., Robinson, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Think+globally,+act+locally:+the+making+of+a+mouse+mammary+gland.">Think globally, act locally: the making of a mouse mammary gland.</a> Genes Dev. 12, 449-449 (1998).</li><li>Aupperlee, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-specific+differences+in+the+mechanisms+of+progesterone+regulation+of+murine+mammary+gland+development.">Strain-specific differences in the mechanisms of progesterone regulation of murine mammary gland development.</a> Endocrinology. 150, 1485-1485 (2009).</li><li>Montero Girard, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+estrogen+receptor-alpha+and+progesterone+receptor+A+expression+with+hormonal+mammary+carcinogenesis:+role+of+the+host+microenvironment.">Association of estrogen receptor-alpha and progesterone receptor A expression with hormonal mammary carcinogenesis: role of the host microenvironment.</a> Breast Cancer Res. 9, R22-R22 (2007).</li><li>Moore, D. M., Vogl, A. W., Baimbridge, K., Emerman, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+calcium+on+oxytocin-induced+contraction+of+mammary+gland+myoepithelium+as+visualized+by+NBD-phallacidin.">Effect of calcium on oxytocin-induced contraction of mammary gland myoepithelium as visualized by NBD-phallacidin.</a> J Cell Sci. 88, 563-563 (1987).</li></ol>

Sviluppo della ghiandola mammaria e la funzione sono strettamente orchestrata. Topi mutanti possono ospitare le mutazioni del gene che può alterare lo sviluppo della ghiandola mammaria e la funzione evidenziando la necessità di valutare l&#39;architettura della ghiandola 13,12. Montaggio intero può essere eseguita come descritto in questo articolo in tutte le fasi di sviluppo della ghiandola mammaria. Tipicamente, lo sviluppo del epitelio è valutata all&#39;inizio della pubertà (~ 4 settimane), nel bel m...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagente </th><th> Azienda </th><th> Numero di catalogo </th></tr><tr><td> Carminio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C1022 </td></tr><tr><td> Potassio, solfato di alluminio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A6435 </td></tr><tr><td> Timolo </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T0501 </td></tr><tr><td> Salicilato di metile </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M6752 </td></tr><tr><td> L&#39;ossitocina </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> O3251 </td></tr></tbody></table>

evaluation of mammary gland development and function in mouse models

La ghiandola mammaria umano è composto da 15-20 lobi, che secernono il latte in una ramificazione del sistema di apertura del condotto al capezzolo. Quelli lobi sono a loro volta composte di un numero di unità terminali del condotto lobulare in alveoli secretoria e condotti convergenti 1. Nei topi, un&#39;architettura simile è stato osservato in gravidanza in cui si alternano dotti e degli alveoli nello stroma del tessuto connettivo. L&#39;epitelio della ghiandola mammaria mouse è un albero come sistema di condotti composto da due strati di cellule, uno strato interno di cellule luminali circondato da uno strato esterno di cellule mioepiteliali indicato con i confini di una membrana basale 2. Alla nascita, solo un albero duttale rudimentale è presente, composto da un condotto di rami primari e 15-20. Filiale di allungamento e iniziare amplificazione all&#39;inizio della pubertà, circa 4 settimane, sotto l&#39;influenza degli ormoni 3,4,5. A 10 settimane, la maggior parte dello stroma è invasa da un complesso sistema di canali che saranno sottoposti a cicli di ramificazione e di regressione di ogni ciclo estrale fino a quando la gravidanza 2. All&#39;inizio della gravidanza, una seconda fase di sviluppo inizia, con la proliferazione e la differenziazione dell&#39;epitelio a formare strutture a forma di uva secretoria latte chiamati alveoli 6,7. A seguito di parto e durante l&#39;allattamento, il latte è prodotto dalle cellule secretorie luminale e conservati all&#39;interno del lume degli alveoli. L&#39;ossitocina rilascio, stimolato da un riflesso neurale indotta da latte di cuccioli, induce contrazioni sincronizzata delle cellule mioepiteliali intorno agli alveoli e lungo i condotti, permettendo il latte deve essere trasportato attraverso i condotti al capezzolo dove diventa disponibile per i cuccioli 8. Lo sviluppo della ghiandola mammaria, la differenziazione e la funzione sono strettamente orchestrata e richiedono, non solo le interazioni tra lo stroma e l&#39;epitelio, ma anche tra le cellule mioepiteliali e luminale all&#39;interno dell&#39;epitelio 9,10,11. In tal modo, le mutazioni in molti geni implicati in queste interazioni possono compromettere sia l&#39;allungamento duttale durante la pubertà o la formazione di alveoli durante la gravidanza iniziale, differenziazione durante la gravidanza e l&#39;attivazione secretoria porta alla lattazione 12,13. In questo articolo viene descritto come analizzare ghiandole mammarie del mouse e valutare il loro sviluppo utilizzando supporti interi. Abbiamo anche dimostrare come valutare le contrazioni mioepiteliali e l&#39;espulsione del latte con un ex-vivo a base di ossitocina test funzionali. L&#39;effetto di una mutazione del gene per lo sviluppo della ghiandola mammaria e la funzione può quindi essere determinata in situ con l&#39;esecuzione di queste due tecniche di controllo nei topi mutanti e wild-type.

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models at JoVE.com

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

Questo metodo viene illustrato come analizzare e valutare lo sviluppo della ghiandola mammaria e la funzione da topi. Escisse ghiandole mammarie sono valutati per il grado di sviluppo utilizzando montare tutto mentre emissione del latte viene valutata utilizzando un ossitocina a base di test contrazione delle cellule mioepiteliali.

Valutazione dello Sviluppo ghiandola mammaria e funzione in modelli murini

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

In vivo Bioluminescent Imaging dei tumori mammari che usano lo spettro IVIS

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system ...

Ricerca

Biologia

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

Topo cellule epiteliali mammarie forma Mammospheres durante la differenziazione lattogenica

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Imaging in vivo e trattamenti terapeutici in un modello di mouse ortotopico di cancro ovarico

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Cambiamenti nella morfologia della ghiandola mammaria e rischio di cancro al seno in topi

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Isolamento di cellule staminali del mouse ghiandole salivari

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃƒâ€šÃ‚Â·Cryo Kit

Crioconservazione del mouse Sperm and Recovery utilizzando il Kit · I Cryo

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

Iniezione intraduttale per Localizzato Drug Delivery per il mouse ghiandola mammaria

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

Ricostituzione funzionale e attività Canale Misure di purificata di tipo selvatico e mutante CFTR proteine

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Evaluation of Zebrafish Kidney Function Using a Fluorescent Clearance Assay

Valutazione del rene Zebrafish Funzione Con un test Clearance fluorescente

The zebrafish embryo offers a tractable model to study organogenesis and model human genetic disease. Despite its relative simplicity, the zebrafish ...

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

Immunofluorescenza indiretta su sezioni congelate di mouse ghiandola mammaria

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...