Name: rapid diagnosis of avian influenza virus in wild birds: use of a portable rrt-pcr and freeze-dried reagents in the field
Uploaded: 2011-08-02T12:00:00
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Deseamos agradecer a M. y R. Scullion Crujiente de las Tecnologías de Idaho para el apoyo técnico y el USGS Western Centro de Investigaciones Ecológicas de financiación (S. Schwarzbach) y asistencia (K. Spragens, T. Graham). Esta investigación se realizó bajo los auspicios del Centro para la Innovación Tecnológica - Instituto para la Defensa y Seguridad Nacional (www.idhs.org), en apoyo del Departamento de Defensa y la Fuerza Aérea Laboratorio de Investigación. Manejo de los animales siguieron los protocolos aprobados por el Cuidado de Animales y el empleo de los EE.UU. Geological Survey Centro Occidental de Investigación Ecológica y los permisos de las Aves Servicio Geológico de EE.UU. Laboratorio de Anillamiento. Cualquier uso de nombres comerciales, productos, o de una empresa en esta publicación es sólo con fines descriptivos y no implica reconocimiento alguno por parte del gobierno de EE.UU..

1. La captura de aves silvestres con redes de niebla <ol><li> Para la captura de aves playeras, establecer redes de niebla en un sitio activo alimentación como un pantano, del litoral o de barro plana. </li><li> Deslice la línea de trasmallo bucles de un extremo de la red de niebla alrededor del poste y poste de inserción vertical en el barro. </li><li> Extiende la red, inserte el segundo polo a través de lazos de trasmallo en el otro extremo de la red de niebla y verticalmente insertar pole en el barro, asegurán...

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	<li>Spackman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+real-time+reverse+transcriptase+PCR+assay+for+type+A+influenza+virus+and+the+avian+H5+and+H7+hemagglutinin+subtypes.">Development of a real-time reverse transcriptase PCR assay for type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes.</a> J Clin Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).</li><li>Takekawa, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+detection+of+avian+influenza+virus+in+wild+birds:+evaluation+of+a+portable+rRT-PCR+system+and+freeze-dried+reagents.">Field detection of avian influenza virus in wild birds: evaluation of a portable rRT-PCR system and freeze-dried reagents.</a> J Virol Methods. 166, 92-97 (2010).</li><li>Das, A., Spackman, E., Senne, D., Pedersen, J., Suarez, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+internal+positive+control+for+rapid+diagnosis+of+avian+influenza+virus+infections+by+real-time+reverse+transcription-PCR+with+lyophilized+reagents.">Development of an internal positive control for rapid diagnosis of avian influenza virus infections by real-time reverse transcription-PCR with lyophilized reagents.</a> J Clin Microbiol. 44, 3065-3073 (2006).</li><li>Spackman, E., Suarez, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+influenza+virus+RNA+extraction+from+tissue+and+swab+material.">Avian influenza virus RNA extraction from tissue and swab material.</a> Methods Mol Biol. 436, 13-18 (2008).</li><li>Chen, R., Holmes, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequent+inter-species+transmission+and+geographic+subdivision+in+avian+influenza+viruses+from+wild+birds.+Virology.">Frequent inter-species transmission and geographic subdivision in avian influenza viruses from wild birds. Virology.</a> , 383-3156 (2009).</li><li>Macken, C. A., Webby, R. J., Bruno, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotype+turnover+by+reassortment+of+replication+complex+genes+from+avian+influenza+A+virus.">Genotype turnover by reassortment of replication complex genes from avian influenza A virus.</a> J Gen Virol. 87, 2803-2815 (2006).</li><li>Dugan, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolutionary+genetics+and+emergence+of+avian+influenza+viruses+in+wild+birds.">The evolutionary genetics and emergence of avian influenza viruses in wild birds.</a> PLoS Pathog.. 4, e1000076-e1000076 (2008).</li><li>Spackman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phylogenetic+analyses+of+type+A+influenza+genes+in+natural+reservoir+species+in+North+America+reveals+genetic+variation.">Phylogenetic analyses of type A influenza genes in natural reservoir species in North America reveals genetic variation.</a> Virus Res. 114, 89-100 (2005).</li><li>Pasick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+molecular+based+techniques+for+the+diagnosis+and+characterization+of+avian+influenza+virus+infections..">Advances in the molecular based techniques for the diagnosis and characterization of avian influenza virus infections..</a> Transbound Emerg Dis. 55, 329-338 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OIE+Manual+of+diagnostics+tests+and+vaccines+for+terrestrial+animals+(mammals,+birds+and+bees).">OIE Manual of diagnostics tests and vaccines for terrestrial animals (mammals, birds and bees).</a> 1, 258-269 (2004).</li><li>Weber, T. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ducks:+the+"Trojan+Horses"+of+H5N1+influenza.">Ducks: the "Trojan Horses" of H5N1 influenza.</a> Influenza and Other Respiratory Viruses. , 121-128 (2009).</li><li>Gilbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flying+over+an+infected+landscape:+distribution+of+highly+pathogenic+avian+influenza+H5N1+risk+in+South+Asia+and+satellite+tracking+of+wild+waterfowl.">Flying over an infected landscape: distribution of highly pathogenic avian influenza H5N1 risk in South Asia and satellite tracking of wild waterfowl.</a> Ecohealth. , (2010).</li></ol>

El método de diagnóstico rápido que aquí se presenta facilita la prueba de tiempo-eficiente y preciso de muestras de aves silvestres para la vigilancia de la AIV. Los requisitos de muestra mucho menos estrictas de almacenamiento portátil de RT-PCR son adecuadas para situaciones remotas donde el mantenimiento de la cadena de frío puede ser poco práctico, si los cargadores de nitrógeno líquido o hielo seco no está disponible. Además, encontramos que el análisis de las muestras con los reactivos liofilizados fu...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> RNeasy mini spin columna </td><td> Qiagen </td><td> 74106 </td><td> Incluido en RNeasy Mini Kit </td></tr><tr><td> Tubos de recogida (1,5 y 2 ml) </td><td> Qiagen </td><td> 74106 </td><td> Incluido en RNeasy Mini Kit </td></tr><tr><td> Tampón RLT </td><td> Qiagen </td><td> 74106 </td><td> Incluido en RNeasy Mini Kit </td></tr><tr><td> Buffer RW1 </td><td> Qiagen </td><td> 74106 </td><td> Incluido en RNeasy Mini Kit </td></tr><tr><td> Buffer RPE </td><td> Qiagen </td><td> 74106 </td><td> Incluido en RNeasy Mini Kit </td></tr><tr><td> Agua libre de RNasa </td><td> Qiagen </td><td> 74106 </td><td> Incluido en RNeasy Mini Kit </td></tr><tr><td> 14,3 M β-mercaptoetanol solución </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP176100 </td><td></td></tr><tr><td> 100% de etanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9602322 </td><td></td></tr><tr><td> Vortex Genie 2, 120 </td><td> Scientific Industries </td><td> SI-0236 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan Influenza A Objetivo 1 (hidrólisis de la sonda) </td><td> Idaho Tecnologías </td><td> Asay-ASY-0109 </td><td></td></tr><tr><td> Tubos capilares LightCycler 20ml </td><td> Roche Applied Science </td><td> 04929292001 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-centrífuga con rotor para tubos de 2 ml </td><td> Idaho Tecnologías </td><td></td><td> Incluido en el kit RAPID </td></tr><tr><td> Ruggedized avanzada de dispositivos de identificación de patógenos (RAPID) 7200 </td><td> Idaho Tecnologías </td><td></td><td> Incluido en el kit RAPID </td></tr><tr><td> Pentium portátil basado en Windows XP Professional </td><td> Idaho Tecnologías </td><td></td><td> Incluido en el kit RAPID </td></tr><tr><td> LightCycler software de análisis de datos </td><td> Idaho Tecnologías </td><td></td><td> Incluido en el kit RAPID </td></tr></tbody></table>

rapid diagnosis of avian influenza virus in wild birds: use of a portable rrt-pcr and freeze-dried reagents in the field

Las aves silvestres han sido implicados en la propagación de la influenza aviar altamente patógena (IAAP) del subtipo H5N1, lo que provocó la vigilancia a lo largo de las rutas migratorias. El muestreo de aves silvestres para el virus de la gripe aviar (AIV) se realiza a menudo en regiones remotas, pero los resultados son a menudo se retrasa debido a la necesidad de transportar las muestras a un laboratorio equipado para las pruebas moleculares. En tiempo real de la transcriptasa inversa reacción de polimerasa en cadena (RT-PCR) es una técnica molecular que ofrece uno de los métodos más precisos y sensibles para el diagnóstico de la AIV. Los protocolos de laboratorio previamente estrictamente necesario para la RT-PCR se están adaptando para el campo. El desarrollo de reactivos liofilizados (liofilizado) que no requieren cadena de frío, con una sensibilidad a nivel de los reactivos húmedos ha llevado a pruebas en el lugar remoto a un objetivo práctico. Aquí presentamos un método para el diagnóstico rápido de la AIV en aves silvestres con una unidad de RT-PCR (Ruggedized avanzada de dispositivos de identificación de patógenos o rápida, las tecnologías de Idaho, Salt Lake City, UT), que cuenta con los reactivos liofilizados (Influenza A Meta 1 Taqman; Asay -ASY-0109, Tecnologías de Idaho). Los reactivos contienen todos los componentes necesarios para las pruebas en las concentraciones adecuadas en un solo tubo: primers, sondas, las enzimas, los tampones y los controles internos positivos, eliminando los errores asociados con el almacenamiento o manejo inadecuado de los reactivos mojado. La unidad portátil realiza una pantalla para la gripe A por objetivo el gen de la matriz y los resultados de los rendimientos en 2-3 horas. Subtipos genéticos también es posible con imprimación H5 y H7, establece que se dirigen al gen de la hemaglutinina. El sistema es adecuado para su uso en muestras cloacales y orofaríngeos procedentes de aves silvestres, como se ha demostrado aquí en el especies de aves playeras migratorias, el playero occidental (Calidrus mauri) capturados en el norte de California. Manejo de los animales siguieron los protocolos aprobados por el Cuidado de Animales y el empleo de los EE.UU. Geological Survey Centro Occidental de Investigación Ecológica y los permisos de las Aves Servicio Geológico de EE.UU. Laboratorio de Anillamiento. La principal ventaja de esta técnica es acelerar el diagnóstico de las aves silvestres, lo que aumenta las posibilidades de contener un brote en una ubicación remota. Sobre el terreno diagnóstico también podrían ser útiles para la identificación y estudio de las personas infectadas en las poblaciones silvestres. La oportunidad de recoger información sobre la biología de acogida (la respuesta inmunológica y fisiológica a la infección) y la ecología espacial (el rendimiento de las aves migratorias infectadas) se proporciona una visión de la medida en que las aves silvestres pueden actuar como vectores para AIV a largas distancias.

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Rapid Diagnosis of Avian Influenza Virus in Wild Birds: Use of a Portable rRT-PCR and Freeze-dried Reagents in the Field

Este estudio describe el diagnóstico de la gripe aviar en aves silvestres con un portátil de RT-PCR sistema. El método tiene la ventaja de liofilizado reactivos para detectar las aves silvestres en un entorno ajeno al laboratorio, propio de un escenario de brote. Uso de herramientas moleculares ofrece alternativas precisas y sensibles para el diagnóstico rápido.

El diagnóstico rápido del virus de la influenza aviar en aves silvestres: El uso de un portátil de RT-PCR y reactivos liofilizados en el campo

Wild birds have been implicated in the spread of highly pathogenic avian influenza (HPAI) of the H5N1 subtype, prompting surveillance along migratory ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Utilizando imágenes bioluminiscentes encargado de investigar la sinergia entre Streptococcus pneumoniae Y el Virus de la Influenza en ratones lactantes

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Investigación

Inmunología e Infección

Avian Influenza Surveillance with FTA  Cards: Field Methods, Biosafety, and Transportation Issues Solved

Vigilancia de la Gripe Aviar, con tarjetas FTA: Métodos de Campo, la bioseguridad y los problemas de transporte resueltos

Avian Influenza Viruses (AIVs) infect many mammals, including humans1. These AIVs are diverse in their natural hosts, harboring almost all possible viral ...

Microwave Assisted Rapid Diagnosis of Plant Virus Diseases by Transmission Electron Microscopy

Asistida por microondas diagnóstico rápido de enfermedades de virus de plantas por microscopía electrónica de transmisión

Investigations of ultrastructural changes induced by viruses are often necessary to clearly identify viral diseases in plants. With conventional sample ...

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

Propagación del virus de la influenza en embrionados de pollo Huevos

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

Co-inmunoprecipitación de la proteína de ratón Mx1 con la Influenza A nucleoproteína del virus

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

Nasal Toallitas para Influenza A Detección de Virus y aislamiento de los cerdos

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Aislamiento de neutrófilos y análisis para determinar su papel en el linfoma de células sensibles a los agentes terapéuticos

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

In Vitro El desmontaje de virus de influenza A cápsides por centrifugación en gradiente

Acid-triggered molecular processes closely control cell entry of many viruses that enter through the endocytic system. In the case of influenza A virus ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

Evaluación de la eficacia y la toxicidad de los ARN del VIH-1 Orientación de la producción para uso en terapia génica o de drogas

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Estudios de Virus de influenza A en un modelo murino de infección

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...