Name: sequencing of bacterial microflora in peripheral blood: our experience with hiv-infected patients
Uploaded: 2011-06-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients at JoVE.com

Wir sind dankbar, dass Gianni Scimone für hervorragende Unterstützung mit Video machen.

Behandlung von HIV-infizierten Blutproben erfordert einige wichtige Empfehlungen. Alle Proben von Blut muss in robuster auslaufsicheren Behältern transportiert werden. Vorsicht beim Sammeln der Proben eine Kontamination des Containers Außen-und einer begleitenden Unterlagen der Probe zu vermeiden. Alle Personen, die Verarbeitung infiziertes Blut muss Handschuhe tragen. Handschuhe müssen geändert werden und die Hände gewaschen nach Abschluss der Verarbeitung von Proben. Die Verarbeitung von HIV-...

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	<li>Hooper, L. V., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+adaptations+that+maintain+homeostasis+with+the+intestinal+microbiota.">Immune adaptations that maintain homeostasis with the intestinal microbiota.</a> Nat Rev Immunol. 10, 159-169 (2010).</li><li>Macpherson, A. J., Harris, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+commensal+intestinal+bacteria+and+the+immune+system.">Interactions between commensal intestinal bacteria and the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 4, 478-485 (2004).</li><li>Kanauchi, O., Mitsuyama, K., Araki, Y., Andoh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+intestinal+flora+in+the+treatment+of+inflammatory+bowel+disease.">Modification of intestinal flora in the treatment of inflammatory bowel disease.</a> Curr Pharm Des. 9, 333-346 (2003).</li><li>Brenchley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+a+cause+of+systemic+immune+activation+in+chronic+HIV+infection.">Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection.</a> Nat Med. 12, 1365-1371 (2006).</li><li>Brenchley, J. M., Price, D. A., Douek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+disease:+fallout+from+a+mucosal+catastrophe.">HIV disease: fallout from a mucosal catastrophe.</a> Nat Immunol. 7, 235-239 (2006).</li><li>Jiang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+bacterial+DNA+correlate+with+immune+activation+and+the+magnitude+of+immune+restoration+in+persons+with+antiretroviral-treated+HIV+infection.">Plasma levels of bacterial DNA correlate with immune activation and the magnitude of immune restoration in persons with antiretroviral-treated HIV infection.</a> J Infect Dis. 199, 1177-1185 (2009).</li><li>Marchetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+associated+with+sustained+failure+in+CD4++T-cell+reconstitution+in+HIV-infected+patients+on+long-term+highly+active+antiretroviral+therapy.">Microbial translocation is associated with sustained failure in CD4+ T-cell reconstitution in HIV-infected patients on long-term highly active antiretroviral therapy.</a> AIDS. 22, 2035-2038 (2008).</li><li>Marchetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Microbial+Translocation+and+Immune+Hyperactivation+in+Disease+Progression+of+HIV++Patients+with+Preserved+CD4+Count+in+the+Absence+of+ART.">Role of Microbial Translocation and Immune Hyperactivation in Disease Progression of HIV+ Patients with Preserved CD4 Count in the Absence of ART.</a> , (2010).</li><li>Greisen, K., Loeffelholz, M., Purohit, A., Leong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR+primers+and+probes+for+the+16S+rRNA+gene+of+most+species+of+pathogenic+bacteria,+including+bacteria+found+in+cerebrospinal+fluid.">PCR primers and probes for the 16S rRNA gene of most species of pathogenic bacteria, including bacteria found in cerebrospinal fluid.</a> J Clin Microbiol. 32, 335-351 (1994).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; Hiermit zeigen ein PCR / Sequenzierung Protokoll, um die Translokation von Bakterien im peripheren Blut von HIV-infizierten Personen zu charakterisieren.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Die meisten zuverlässige Ergebnisse werden erzielt, wenn mittels Plasma in EDTA-haltige Röhrchen gesammelt. Nach der Blutentnahme sollte Plasma durch Zentrifugation in 2 / 3 Stunden auseinander liegen, um Hämolyse und DNA-Fragment Abbau zu vermeiden. Die Proben werden zunächst bei -20 ° C für ca. 5 Tage und dann bei -80 ° C g...

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenz </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare (optional) </th></tr><tr><td> Easty-DNA Kit </td><td> Invitrogen </td><td> K 180001 </td><td></td></tr><tr><td> Chloroform </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C2432 </td><td></td></tr><tr><td> Ethanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E7203 </td><td></td><tr/><tr><td> UltraPure Waer </td><td> Invitrogen </td><td> 10977049 </td><td></td></tr><tr><td> Lysozym </td><td> Fluka </td><td> 62970 </td><td> 10 ug / ml in destilliertem Wasser </td></tr><tr><td> AmpliTaq Gold </td><td> Applied Biosystem </td><td> 26478701 </td><td></td></tr><tr><td> Microcon 100 </td><td> Millipore </td><td> 42413 </td><td></td></tr><tr><td> PCR-Primer </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Eppendorf </td><td> C1343 </td><td></td></tr><tr><td> DNA-Leiter </td><td> Invitrogen </td><td> 15628019 </td><td></td></tr><tr><td> Purelink PCR Mikro-Kit </td><td> Invitrogen </td><td> K310050 </td><td></td></tr><tr><td> LB-Agar, Pulver </td><td> Invitrogen </td><td> 22700025 </td><td></td></tr><tr><td> Bactoagar </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ampicillin </td><td> Invitrogen </td><td> 11593027 </td><td> 10 mg / mL in destilliertes Wasser </td></tr><tr><td> X-gal </td><td> Invitrogen </td><td> 15520034 </td><td> 40mg/mL in DMF </td></tr><tr><td> IPTG </td><td> Invitrogen </td><td> 15529019 </td><td> 100 mM in destilliertes Wasser </td></tr><tr><td> Topo TA Cloning Kit </td><td> Invitrogen </td><td> K450002 </td><td></td></tr><tr><td> Purelink Schnelle Plasmid Miniprep Kit </td><td> Invitrogen </td><td> K210010 </td><td></td></tr><tr><td> Big Farbstoff </td><td> Applied Biosystem </td><td> 4337455 </td><td></td></tr><tr><td> DyeEx 2,0 Spin Kit </td><td> Qiagen </td><td> 63204 </td><td></td></tr></tbody></table>

sequencing of bacterial microflora in peripheral blood: our experience with hiv-infected patients

Der gesunde Magen-Darm-Trakt ist physiologisch kolonisierten durch eine Vielzahl von kommensalen Mikroben, die die Entwicklung der humoralen und zellulären mukosalen Immunsystems 1,2 beeinflussen. Microbiota vom Immunsystem über eine starke Schleimhaut-Barriere abgeschirmt. Infektionen und Antibiotika sind dafür bekannt, sowohl die normale Magen-Darm-Schranke und die Zusammensetzung der ansässigen Bakterien, die in möglichst immun Anomalien Ergebnis 3. Mai zu ändern. HIV verursacht einen Bruch in der Magen-Darm-Barriere mit progressiven Versagen der Schleimhaut-Immunität und Leckagen in die systemische Zirkulation von bakteriellen Bioprodukte, wie Lipopolysaccharid und bakterielle DNA-Fragmente, die zu systemischen Immunaktivierung 4-7 beitragen. Mikrobielle Translokation ist in HIV / AIDS-Immunpathogenese und Ansprechen auf die Therapie 4,8 gebracht. Unser Ziel war die Zusammensetzung der Bakterien translozierenden im peripheren Blut von HIV-infizierten Patienten zu charakterisieren. Um zu verfolgen unser Ziel wir eine PCR-Reaktion für die panbacteric 16S ribosomial Gen durch eine Sequenzanalyse gefolgt. Kurz gesagt, ist Vollblut sowohl HIV-infizierten und gesunden Probanden verwendet. Da die gesunden Individuen normalen intestinalen Homöostase derzeit keine Translokation der Mikroflora wird bei diesen Patienten zu erwarten. Nach Vollblutspende durch Venenpunktion und Plasma-Trennung wird die DNA aus dem Plasma extrahiert und verwendet werden, um eine breite Palette PCR-Reaktion für die panbacteric 16S ribosomial Gen 9 Führen. Nach PCR-Produkt Reinigung, Klonierung und Sequenzierung Analysen durchgeführt.

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Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients

Unser Experiment zeigt, wie eine Sequenzierung von bakteriellen Spezies translozierenden im peripheren Blut von HIV-positiven Patienten.

Die Sequenzierung der bakteriellen Mikroflora im peripheren Blut: Unsere Erfahrung mit HIV-infizierten Patienten

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

Forschung

Medizin

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Messen Frailty in HIV-infizierten Personen. Bezeichnung des gebrechlichen Patienten ist der erste Schritt zur Besserung und Umkehr der Frailty

A simple, validated protocol consisting of a battery of tests is available to identify elderly patients with frailty syndrome. This syndrome of decreased ...

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Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

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The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

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Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

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Semi-quantitative Bewertung mit [18F] FDG Tracer bei Patienten mit schweren Hirnverletzungen

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Digitale Handschriftanalyse von Charakteren bei chinesischen Patienten mit leichter kognitiver Beeinträchtigung

An increasing amount of evidence shows that cognitive deficits and movement dysfunctions are not separated. Patients with mild cognitive impairment (MCI) ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Fruchtbarkeitserhaltung bei Patientinnen mit schwerer Ovarialfunktionsstörung

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Evaluation of a Point-of-Care Testing Analyzer for Measuring Peripheral Blood Leukocytes

Evaluierung eines Point-of-Care-Testanalysators zur Messung peripherer Blutleukzyten

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