Name: sequencing of bacterial microflora in peripheral blood: our experience with hiv-infected patients
Uploaded: 2011-06-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients at JoVE.com

我々は、ビデオの製作と優秀な支援のためのジャンニシモーネに感謝しています。

HIVに感染した血液サンプルの取り扱いが重要な推奨事項が必要です。 血液のすべての標本は、堅牢な漏れ防止のコンテナで輸送する必要があります。コンテナの外装のと試料に付随する事務処理の汚染を避けるために標本を収集する際には注意が必要です。 感染した血液を処理するすべての者は、手袋を着用する必要があります。手袋が変更され、手は、検体処理の完了後に洗浄?...

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	<li>Hooper, L. V., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+adaptations+that+maintain+homeostasis+with+the+intestinal+microbiota.">Immune adaptations that maintain homeostasis with the intestinal microbiota.</a> Nat Rev Immunol. 10, 159-169 (2010).</li><li>Macpherson, A. J., Harris, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+commensal+intestinal+bacteria+and+the+immune+system.">Interactions between commensal intestinal bacteria and the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 4, 478-485 (2004).</li><li>Kanauchi, O., Mitsuyama, K., Araki, Y., Andoh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+intestinal+flora+in+the+treatment+of+inflammatory+bowel+disease.">Modification of intestinal flora in the treatment of inflammatory bowel disease.</a> Curr Pharm Des. 9, 333-346 (2003).</li><li>Brenchley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+a+cause+of+systemic+immune+activation+in+chronic+HIV+infection.">Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection.</a> Nat Med. 12, 1365-1371 (2006).</li><li>Brenchley, J. M., Price, D. A., Douek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+disease:+fallout+from+a+mucosal+catastrophe.">HIV disease: fallout from a mucosal catastrophe.</a> Nat Immunol. 7, 235-239 (2006).</li><li>Jiang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+bacterial+DNA+correlate+with+immune+activation+and+the+magnitude+of+immune+restoration+in+persons+with+antiretroviral-treated+HIV+infection.">Plasma levels of bacterial DNA correlate with immune activation and the magnitude of immune restoration in persons with antiretroviral-treated HIV infection.</a> J Infect Dis. 199, 1177-1185 (2009).</li><li>Marchetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+associated+with+sustained+failure+in+CD4++T-cell+reconstitution+in+HIV-infected+patients+on+long-term+highly+active+antiretroviral+therapy.">Microbial translocation is associated with sustained failure in CD4+ T-cell reconstitution in HIV-infected patients on long-term highly active antiretroviral therapy.</a> AIDS. 22, 2035-2038 (2008).</li><li>Marchetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Microbial+Translocation+and+Immune+Hyperactivation+in+Disease+Progression+of+HIV++Patients+with+Preserved+CD4+Count+in+the+Absence+of+ART.">Role of Microbial Translocation and Immune Hyperactivation in Disease Progression of HIV+ Patients with Preserved CD4 Count in the Absence of ART.</a> , (2010).</li><li>Greisen, K., Loeffelholz, M., Purohit, A., Leong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR+primers+and+probes+for+the+16S+rRNA+gene+of+most+species+of+pathogenic+bacteria,+including+bacteria+found+in+cerebrospinal+fluid.">PCR primers and probes for the 16S rRNA gene of most species of pathogenic bacteria, including bacteria found in cerebrospinal fluid.</a> J Clin Microbiol. 32, 335-351 (1994).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt;我々はここにHIV感染者の末梢血中の細菌の転座を特徴づけるためにPCR /シーケンシングプロトコールを示す。</p&gt;<p class="jove_content"EDTA含有チューブに集められた血漿を使用するときに&gt;最も信頼性の高い結果が得られる。採血後、血漿が溶血し、DNA断片の劣化を避けるために、2 / 3時間以内に遠心分離によって分離されるべきである。サンプルは-80℃で、約5日間と℃、-20℃で最初に格納さ...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td>イースティ- DNAキット</td><td>インビトロジェン</td><td> K 180001 </td><td></td></tr><tr><td>クロロホルム</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> C2432 </td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> E7203 </td><td></td><tr/><tr><td>超高純度Waer </td><td>インビトロジェン</td><td> 10977049 </td><td></td></tr><tr><td>リゾチーム</td><td>フルカ</td><td> 62970 </td><td>蒸留水で10μg/ mLの</td></tr><tr><td>のAmpliTaqゴールド</td><td>アプライドバイオシステム</td><td> 26478701 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロコントローラ100 </td><td>ミリポア</td><td> 42413 </td><td></td></tr><tr><td> PCRプライマー</td><td>インビトロジェン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アガロース</td><td>エッペンドルフ</td><td> C1343 </td><td></td></tr><tr><td> DNAラダー</td><td>インビトロジェン</td><td> 15628019 </td><td></td></tr><tr><td> Purelink PCRマイクロキット</td><td>インビトロジェン</td><td> K310050 </td><td></td></tr><tr><td> LB寒天、粉</td><td>インビトロジェン</td><td> 22700025 </td><td></td></tr><tr><td> Bactoagar </td><td>インビトロジェン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アンピシリン</td><td>インビトロジェン</td><td> 11593027 </td><td>蒸留水に10 mg / mLの</td></tr><tr><td> X - galを</td><td>インビトロジェン</td><td> 15520034 </td><td> DMFで40mg/mL </td></tr><tr><td> IPTG </td><td>インビトロジェン</td><td> 15529019 </td><td>蒸留水に100mMの</td></tr><tr><td> TOPO TAクローニングキット</td><td>インビトロジェン</td><td> K450002 </td><td></td></tr><tr><td> Purelinkクイックプラスミドミニプレップキット</td><td>インビトロジェン</td><td> K210010 </td><td></td></tr><tr><td>ビッグ染料</td><td>アプライドバイオシステム</td><td> 4337455 </td><td></td></tr><tr><td> DyeEx 2.0スピンキット</td><td>キアゲン</td><td> 63204 </td><td></td></tr></tbody></table>

sequencing of bacterial microflora in peripheral blood: our experience with hiv-infected patients

健康な消化管は、生理的体液性および細胞性粘膜免疫系の1,2の開発に影響を与える共生微生物の多種多様によって植民地化されている。 微生物叢は、強力な粘膜関門を介した免疫系から遮蔽されている。感染症と抗生物質は、通常の消化管の障壁と3つの可能な免疫異常につながることが常駐細菌の構成、両方を変更することが知られています。 HIVは、全身免疫活性化4-7を貢献する、リポ多糖と細菌のDNA断片のような細菌のバイオ製品、、の全身循環への粘膜免疫と漏れの進行性破壊と消化管バリアの侵害を引き起こします。微生物の転座は、HIV /エイズ免疫病原性と治療4,8への応答に関与している。 我々は、HIV感染患者の末梢血中に転位細菌の組成を特徴づけることを目的とした。私たちの目的を追求するために我々は、シークエンス解析に続いてpanbacteric 16S ribosomial遺伝子のPCR反応をセットアップします。 簡単に言えば、両方のHIV感染と健常人全血が使用されます。健常者が正常な腸内恒常性を提示することを考えるとフローラのは転座は、これらの患者に期待されていません。静脈穿刺および血漿分離によって全血採取に続いて、DNAは血漿から抽出し、panbacteric 16S ribosomial遺伝子9用の幅広い範囲のPCR反応を実行するために使用されます。以下のPCR産物の精製、クローニングとシークエンシング解析を実施しています。

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Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients

私たちの実験では、HIV陽性患者の末梢血中に転位細菌種のシークエンス解析を実行する方法を説明します。

HIV感染患者との経験：末梢血中の細菌叢のシーケンシング

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase

マウスにおけるモデリング脳出血：自己血または細菌性コラゲナーゼの注入

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

Measuring Frailty in HIV-infected Individuals. Identification of Frail Patients is the First Step to Amelioration and Reversal of Frailty

HIV感染者でもろさを測定する。虚弱患者の同定は、もろさの改善と逆転への第一歩です。

A simple, validated protocol consisting of a battery of tests is available to identify elderly patients with frailty syndrome. This syndrome of decreased ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

間歇性跛行患者における姿勢制御評価のためのコンピュータ化されたダイナミックPosturography

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

慢性腎臓病患者における血管機能の評価

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

II-45同系ラット中皮腫モデルにおける同所移植と末梢免疫細胞の監視

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

重症患者における全血エンドトキシア血症の検出に関するエンドトキシン活性アッセイ

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

重症脳損傷患者 [18F] FDG トレーサーを用いた定量的評価

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of ...

Digital Handwriting Analysis of Characters in Chinese Patients with Mild Cognitive Impairment

軽度認知障害を有する中国患者における文字のデジタル手書き分析

An increasing amount of evidence shows that cognitive deficits and movement dysfunctions are not separated. Patients with mild cognitive impairment (MCI) ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

重度卵巣機能障害患者における不妊治療の保存

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Evaluation of a Point-of-Care Testing Analyzer for Measuring Peripheral Blood Leukocytes

末梢血白血球を測定するためのポイントオブケア検査分析装置の評価

White blood cell (WBC) is an important indicator of inflammation in the body, and it can help distinguish between bacterial and viral infections. At ...