Name: sequencing of bacterial microflora in peripheral blood: our experience with hiv-infected patients
Uploaded: 2011-06-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients at JoVE.com

Somos gratos a Gianni Scimone para assistência excelente, com tomada de vídeo.

Manipulação de amostras de sangue contaminado pelo HIV requer algumas recomendações importantes. Todas as amostras de sangue devem ser transportados em robusta contentores estanques. É preciso ter cuidado ao coletar a amostra para evitar a contaminação do exterior do container e de qualquer documentação que acompanha a amostra. Todas as pessoas de processamento de sangue infectados devem usar luvas. As luvas devem ser mudadas e as mãos lavadas após a conclusão do processamento das amostras. <br...

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	<li>Hooper, L. V., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+adaptations+that+maintain+homeostasis+with+the+intestinal+microbiota.">Immune adaptations that maintain homeostasis with the intestinal microbiota.</a> Nat Rev Immunol. 10, 159-169 (2010).</li><li>Macpherson, A. J., Harris, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+commensal+intestinal+bacteria+and+the+immune+system.">Interactions between commensal intestinal bacteria and the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 4, 478-485 (2004).</li><li>Kanauchi, O., Mitsuyama, K., Araki, Y., Andoh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+intestinal+flora+in+the+treatment+of+inflammatory+bowel+disease.">Modification of intestinal flora in the treatment of inflammatory bowel disease.</a> Curr Pharm Des. 9, 333-346 (2003).</li><li>Brenchley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+a+cause+of+systemic+immune+activation+in+chronic+HIV+infection.">Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection.</a> Nat Med. 12, 1365-1371 (2006).</li><li>Brenchley, J. M., Price, D. A., Douek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+disease:+fallout+from+a+mucosal+catastrophe.">HIV disease: fallout from a mucosal catastrophe.</a> Nat Immunol. 7, 235-239 (2006).</li><li>Jiang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+bacterial+DNA+correlate+with+immune+activation+and+the+magnitude+of+immune+restoration+in+persons+with+antiretroviral-treated+HIV+infection.">Plasma levels of bacterial DNA correlate with immune activation and the magnitude of immune restoration in persons with antiretroviral-treated HIV infection.</a> J Infect Dis. 199, 1177-1185 (2009).</li><li>Marchetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+associated+with+sustained+failure+in+CD4++T-cell+reconstitution+in+HIV-infected+patients+on+long-term+highly+active+antiretroviral+therapy.">Microbial translocation is associated with sustained failure in CD4+ T-cell reconstitution in HIV-infected patients on long-term highly active antiretroviral therapy.</a> AIDS. 22, 2035-2038 (2008).</li><li>Marchetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Microbial+Translocation+and+Immune+Hyperactivation+in+Disease+Progression+of+HIV++Patients+with+Preserved+CD4+Count+in+the+Absence+of+ART.">Role of Microbial Translocation and Immune Hyperactivation in Disease Progression of HIV+ Patients with Preserved CD4 Count in the Absence of ART.</a> , (2010).</li><li>Greisen, K., Loeffelholz, M., Purohit, A., Leong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR+primers+and+probes+for+the+16S+rRNA+gene+of+most+species+of+pathogenic+bacteria,+including+bacteria+found+in+cerebrospinal+fluid.">PCR primers and probes for the 16S rRNA gene of most species of pathogenic bacteria, including bacteria found in cerebrospinal fluid.</a> J Clin Microbiol. 32, 335-351 (1994).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; Vimos por este meio mostrar um protocolo de PCR / seqüenciamento para caracterizar a translocação de bactérias no sangue periférico de indivíduos infectados pelo HIV.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Resultados mais confiáveis ​​são obtidos quando se utiliza plasma coletadas em tubos contendo EDTA. Após coleta de sangue, plasma deve ser separado por centrifugação dentro de 03/02 horas, para evitar hemólise e degradação fragmento de DNA. As amostras são armazenadas primeiro em -20 ° C por aproxima...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número Catálogo </th><th> Comentários (opcional) </th></tr><tr><td> Easty DNA-Kit </td><td> Invitrogen </td><td> K 180001 </td><td></td></tr><tr><td> Clorofórmio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C2432 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E7203 </td><td></td><tr/><tr><td> UltraPure Waer </td><td> Invitrogen </td><td> 10977049 </td><td></td></tr><tr><td> Lisozima </td><td> Fluka </td><td> 62970 </td><td> 10 mcg / mL em água destilada </td></tr><tr><td> AmpliTaq Gold </td><td> Applied Biosystem </td><td> 26478701 </td><td></td></tr><tr><td> Microcontrolador 100 </td><td> Millipore </td><td> 42413 </td><td></td></tr><tr><td> PCR </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Eppendorf </td><td> C1343 </td><td></td></tr><tr><td> Escada de DNA </td><td> Invitrogen </td><td> 15628019 </td><td></td></tr><tr><td> Purelink PCR micro kit </td><td> Invitrogen </td><td> K310050 </td><td></td></tr><tr><td> LB Agar em pó, </td><td> Invitrogen </td><td> 22700025 </td><td></td></tr><tr><td> Bactoagar </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ampicilina </td><td> Invitrogen </td><td> 11593027 </td><td> 10 mg / mL em água destilada </td></tr><tr><td> X-gal </td><td> Invitrogen </td><td> 15520034 </td><td> 40mg/ml em DMF </td></tr><tr><td> IPTG </td><td> Invitrogen </td><td> 15529019 </td><td> 100mM em água destilada </td></tr><tr><td> Topo TA cloning kit </td><td> Invitrogen </td><td> K450002 </td><td></td></tr><tr><td> Purelink rápida kit Miniprep Plasmid </td><td> Invitrogen </td><td> K210010 </td><td></td></tr><tr><td> Big dye </td><td> Applied Biosystem </td><td> 4337455 </td><td></td></tr><tr><td> DyeEx 2,0 spin-kit </td><td> Qiagen </td><td> 63204 </td><td></td></tr></tbody></table>

sequencing of bacterial microflora in peripheral blood: our experience with hiv-infected patients

O trato gastrointestinal saudável é fisiologicamente colonizada por uma grande variedade de micróbios comensais que influenciam o desenvolvimento do sistema 1,2 humoral e celular imune da mucosa. Microbiota é protegido do sistema imunológico através de uma forte barreira mucosa. Infecções e antibióticos são conhecidos por alterar tanto a barreira do trato gastrointestinal normal ea composição das bactérias residentes, o que pode resultar em possíveis alterações imunológicas 3. HIV causa uma brecha na barreira gastrointestinal com insuficiência progressiva da imunidade da mucosa e vazamento para a circulação sistêmica de bioprodutos bacteriana, como lipopolissacarídeos e fragmentos de DNA de bactérias, que contribuem para a ativação imune sistêmica 4-7. Translocação microbiana está implicado em HIV / AIDS imunopatogênese e resposta à terapia 4,8. Nosso objetivo foi caracterizar a composição de bactérias translocação no sangue periférico de pacientes infectados pelo HIV. A perseguir o nosso objectivo é criar uma reação de PCR para o gene 16S panbacteric ribosomial seguido por uma análise de seqüenciamento. Resumidamente, o sangue total de ambos os sujeitos infectados pelo HIV e saudável é usado. Dado que os indivíduos saudáveis ​​apresentam homeostase intestinal normal não translocação de microflora é esperado nesses pacientes. Após a colheita de sangue total por punção venosa e separação do plasma, o DNA é extraído do plasma e usado para executar uma ampla gama reação de PCR para o gene 16S panbacteric ribosomial 9. Análises de purificação seguinte produto PCR, clonagem e sequenciamento são executadas.

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Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients

Nossa experiência vai mostrar como realizar uma análise de seqüenciamento de translocação de espécies bacterianas no sangue periférico de pacientes HIV positivos.

Seqüenciamento da microflora bacteriana no sangue periférico: a nossa experiência com pacientes infectados pelo HIV

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral ...

Research

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Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

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Medindo fragilidade em indivíduos infectados pelo HIV. Identificação de pacientes frágeis é o primeiro passo para a Melhoria e Reversão de fragilidade

A simple, validated protocol consisting of a battery of tests is available to identify elderly patients with frailty syndrome. This syndrome of decreased ...

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An increasing amount of evidence shows that cognitive deficits and movement dysfunctions are not separated. Patients with mild cognitive impairment (MCI) ...

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