Name: sequencing of bacterial microflora in peripheral blood: our experience with hiv-infected patients
Uploaded: 2011-06-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients at JoVE.com

Estamos muy agradecidos a Scimone Gianni por su excelente asistencia con la fabricación de video.

Manejo de las muestras de sangre infectada por VIH requiere de algunas recomendaciones importantes. Todas las muestras de sangre deben ser transportados en robusta a prueba de fugas de contenedores. Se debe tener cuidado en la recogida de la muestra para evitar la contaminación del exterior del recipiente y de cualquier documentación que acompaña la muestra. Todas las personas de procesamiento de la sangre infectada debe usar guantes. Los guantes deben ser cambiados y lavarse las manos después de la fi...

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	<li>Hooper, L. V., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+adaptations+that+maintain+homeostasis+with+the+intestinal+microbiota.">Immune adaptations that maintain homeostasis with the intestinal microbiota.</a> Nat Rev Immunol. 10, 159-169 (2010).</li><li>Macpherson, A. J., Harris, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+commensal+intestinal+bacteria+and+the+immune+system.">Interactions between commensal intestinal bacteria and the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 4, 478-485 (2004).</li><li>Kanauchi, O., Mitsuyama, K., Araki, Y., Andoh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+intestinal+flora+in+the+treatment+of+inflammatory+bowel+disease.">Modification of intestinal flora in the treatment of inflammatory bowel disease.</a> Curr Pharm Des. 9, 333-346 (2003).</li><li>Brenchley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+a+cause+of+systemic+immune+activation+in+chronic+HIV+infection.">Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection.</a> Nat Med. 12, 1365-1371 (2006).</li><li>Brenchley, J. M., Price, D. A., Douek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+disease:+fallout+from+a+mucosal+catastrophe.">HIV disease: fallout from a mucosal catastrophe.</a> Nat Immunol. 7, 235-239 (2006).</li><li>Jiang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+bacterial+DNA+correlate+with+immune+activation+and+the+magnitude+of+immune+restoration+in+persons+with+antiretroviral-treated+HIV+infection.">Plasma levels of bacterial DNA correlate with immune activation and the magnitude of immune restoration in persons with antiretroviral-treated HIV infection.</a> J Infect Dis. 199, 1177-1185 (2009).</li><li>Marchetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+associated+with+sustained+failure+in+CD4++T-cell+reconstitution+in+HIV-infected+patients+on+long-term+highly+active+antiretroviral+therapy.">Microbial translocation is associated with sustained failure in CD4+ T-cell reconstitution in HIV-infected patients on long-term highly active antiretroviral therapy.</a> AIDS. 22, 2035-2038 (2008).</li><li>Marchetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Microbial+Translocation+and+Immune+Hyperactivation+in+Disease+Progression+of+HIV++Patients+with+Preserved+CD4+Count+in+the+Absence+of+ART.">Role of Microbial Translocation and Immune Hyperactivation in Disease Progression of HIV+ Patients with Preserved CD4 Count in the Absence of ART.</a> , (2010).</li><li>Greisen, K., Loeffelholz, M., Purohit, A., Leong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR+primers+and+probes+for+the+16S+rRNA+gene+of+most+species+of+pathogenic+bacteria,+including+bacteria+found+in+cerebrospinal+fluid.">PCR primers and probes for the 16S rRNA gene of most species of pathogenic bacteria, including bacteria found in cerebrospinal fluid.</a> J Clin Microbiol. 32, 335-351 (1994).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; Por la presente, muestran un protocolo de PCR / secuenciación para caracterizar la translocación de bacterias en la sangre periférica de individuos infectados con VIH.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Resultados de la más fiable se obtiene cuando se utiliza plasma con EDTA. Después de tomar muestras de sangre, el plasma se separa por centrifugación dentro de 2 / 3 horas, para evitar la hemólisis y la degradación del fragmento de ADN. Las muestras se almacenan primero a -20 ° C durante aproximadamente 5 día...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> Easty ADN Kit </td><td> Invitrogen </td><td> K 180001 </td><td></td></tr><tr><td> Cloroformo </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C2432 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E7203 </td><td></td><tr/><tr><td> UltraPure Waer </td><td> Invitrogen </td><td> 10977049 </td><td></td></tr><tr><td> Lisozima </td><td> Fluka </td><td> 62970 </td><td> 10 mg / ml en agua destilada </td></tr><tr><td> AmpliTaq Gold </td><td> Applied Biosystems </td><td> 26478701 </td><td></td></tr><tr><td> Microcontrolador 100 </td><td> Millipore </td><td> 42413 </td><td></td></tr><tr><td> PCR primers </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Agarosa </td><td> Eppendorf </td><td> C1343 </td><td></td></tr><tr><td> ADN escalera </td><td> Invitrogen </td><td> 15628019 </td><td></td></tr><tr><td> PureLink PCR kit de micro </td><td> Invitrogen </td><td> K310050 </td><td></td></tr><tr><td> Agar LB, en polvo </td><td> Invitrogen </td><td> 22700025 </td><td></td></tr><tr><td> Bactoagar </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ampicilina </td><td> Invitrogen </td><td> 11593027 </td><td> 10 mg / ml en agua destilada </td></tr><tr><td> X-gal </td><td> Invitrogen </td><td> 15520034 </td><td> 40mg/ml en DMF </td></tr><tr><td> IPTG </td><td> Invitrogen </td><td> 15529019 </td><td> 100 mm de agua destilada </td></tr><tr><td> Topo TA kit de clonación </td><td> Invitrogen </td><td> K450002 </td><td></td></tr><tr><td> PureLink rápida kit plásmido Miniprep </td><td> Invitrogen </td><td> K210010 </td><td></td></tr><tr><td> Big Dye </td><td> Applied Biosystems </td><td> 4337455 </td><td></td></tr><tr><td> DyeEx 2,0 spin kit </td><td> Qiagen </td><td> 63204 </td><td></td></tr></tbody></table>

sequencing of bacterial microflora in peripheral blood: our experience with hiv-infected patients

El tracto gastrointestinal es fisiológicamente sanos colonizados por una gran variedad de microbios comensales que influyen en el desarrollo de la humoral y celular 1,2 mucosa del sistema inmunológico. Microbiota está protegido del sistema inmune a través de una fuerte barrera de la mucosa. Las infecciones y los antibióticos son conocidos por alterar la barrera normales del tracto gastrointestinal y la composición de las bacterias residentes, lo que puede resultar en posibles anomalías inmunológicas 3. El VIH causa una brecha en la barrera gastrointestinal con insuficiencia progresiva de la inmunidad de la mucosa y la fuga hacia la circulación sistémica de bioproductos bacterianos, tales como lipopolisacárido y fragmentos de ADN bacteriano, lo que contribuye a la activación inmune sistémica 4-7. Translocación microbiana está implicado en el VIH / SIDA inmunopatogénesis y respuesta al tratamiento 4,8. El objetivo fue caracterizar la composición de las bacterias translocación en la sangre periférica de los pacientes infectados por VIH. Para perseguir nuestro objetivo hemos creado una reacción de PCR para el gen 16S panbacteric ribosomial seguido de un análisis de secuenciación. En pocas palabras, toda la sangre de ambos sujetos infectados por el VIH y saludable se utiliza. Dado que los individuos sanos presentan homeostasis intestinal normal sin desplazamiento de la microflora se espera que en estos pacientes. Tras la recogida de sangre entera por punción venosa y la separación del plasma, el ADN se extrae del plasma y se utiliza para llevar a cabo una amplia gama de reacción de PCR para el gen 16S panbacteric ribosomial 9. Tras la purificación análisis de productos PCR, clonación y secuenciación se llevan a cabo.

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Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients

Nuestro experimento muestra cómo realizar un análisis de la secuencia de translocación de especies de bacterias en la sangre periférica de los pacientes VIH positivos.

La secuenciación de la microflora bacteriana en la sangre periférica: Nuestra experiencia con pacientes infectados por VIH

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase

Modelado Hemorragia intracerebral en ratones: La inyección de sangre autóloga o colagenasa bacteriana

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

Investigación

Medicina

Measuring Frailty in HIV-infected Individuals. Identification of Frail Patients is the First Step to Amelioration and Reversal of Frailty

La fragilidad en las personas infectadas por el VIH de medición. La identificación de los pacientes frágiles es el primer paso para la mejora y la Inversión de la fragilidad

A simple, validated protocol consisting of a battery of tests is available to identify elderly patients with frailty syndrome. This syndrome of decreased ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Posturografía dinámica computarizada para la evaluación de control postural en pacientes con claudicación intermitente

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Evaluación de la función vascular en pacientes con enfermedad renal crónica

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

Ortotópico Implantación y Seguimiento de la célula inmune periférica en el modelo II-45 Singénico Rata Mesotelioma

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

Ensayo de actividad de endotoxinas para la detección de endotoxemia de sangre completa en pacientes con enfermedades críticas

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Evaluación semicuantitativa usando [18F] FDG trazador en pacientes con lesión cerebral grave

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of ...

Digital Handwriting Analysis of Characters in Chinese Patients with Mild Cognitive Impairment

Análisis digital de escritura a mano de personajes en pacientes chinos con deterioro cognitivo leve

An increasing amount of evidence shows that cognitive deficits and movement dysfunctions are not separated. Patients with mild cognitive impairment (MCI) ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Preservación de la fertilidad en pacientes con disfunción ovárica grave

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Evaluation of a Point-of-Care Testing Analyzer for Measuring Peripheral Blood Leukocytes

Evaluación de un analizador de pruebas en el punto de atención para medir leucocitos de sangre periférica

White blood cell (WBC) is an important indicator of inflammation in the body, and it can help distinguish between bacterial and viral infections. At ...