Name: dissection of the adult zebrafish kidney
Uploaded: 2011-08-29T12:00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Adult Zebrafish Kidney at JoVE.com

RAW يود أن أشكر أعضاء زون ومختبرات البحوث ديفيدسون لما قدموه من مساهمات لا تحصى للمساعدة على وضع استراتيجيات والتي شكلت تدريجيا هذه التقنية في تشريح الزرد الكبار على مدى العقد الماضي. بالإضافة إلى ذلك ، نود أن نعرب عن امتناننا لموظفي مركز نوتردام للبحوث اسماك الزرد لتوفير الرعاية الممتازة تربية الجارية لمستعمرة الزرد لدينا. حصل RAW تمويل البحوث من منح الجائزة NIH - NIDDK DK083512 ، ومختبر السخي البدء بتمويل من جامعة نوتردام.

1. تشريح الكلى الزرد الكبار من عينة الحيوانات غير المثبتة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الزرد بين البالغين في سن 3-6 أشهر للتشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الاسماك التي وضعها في الطبق مع 0.2 ٪ 7.0 درجة الحموضة Tricaine لحوالي 4-5 دقائق ، وتراقب عن كثب لنرى أن يتوقف عن الحركة الخياشيم والقلب توقف الضرب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملعقة ، ورفع من الأسماك في حوض الاستحمام Tricaine كمية صغيرة من الحل ، الحل صب ومكان الحيوان برفق على منشفة ورقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام زوج من مقص حاد تشريح لإزالة رأس الحيوان ، مما يجعل من مجرد قطع وراء الوصاد الخيشومية (الشكل 1 ، مسار A). تجاهل رأسه في حاوية نفايات بيولوجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدم المقص لفتح تشريح جسم الحيوان ، من خلال جعل شق بطني طويلة ، بدءا من الرأس وتنتهي في الذيل في قاعدة الزعنفة الذيلية (الشكل 1 ، ب المسار). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأعضاء الداخلية للحيوان باستخدام زوج من ملاقط تشريح / ملقط ، ووضعها في النفايات بيولوجية. يجب الحرص على عدم فرشاة جدار الجسم الظهري ، وهذا هو الموقع في الكلى (الشكل 2). إذا كان لديك اختيار الأسماك الإناث ، وسوف تحتاج لحلج القطن البيض النامية للخروج من تجويف الجسم ، والذي يمكن القيام به بسهولة باستخدام الملقط الزاوية الزوج أو ملاقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام إبر تشريح يعلقون فتح الجدران الجسم إلى علبة تشريح ، وزاوية دبابيس بحيث يمكن تصور الكلى. وسوف تمتلك الكلى شكل سمة (الرأس ، والجذع / السرج ، والذيل) واللون ، ويجري تتخللها تصبغ ملون أسود (الشكل 2). قد تشاهد أيضا الأبهر مليئة الدم المحيطي ، والذي يمتد الى اسفل خط الوسط لهيكل الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط غرامة لفصل الكلى من جدار الجسم الظهري ، وذلك باستخدام ملقط زوج واحد من رفع الكلى كما يمكنك فصل الجهاز من الأنسجة الضامة التي تكمن وراء ذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المكان برفق الكلى في السيارة المطلوب لمزيد من الدراسات الخلية الحية ، مثل أنبوب microcentrifuge تحتوي 1X PBS لإعداد نظام مراقبة الأصول الميدانية. </li></ol> 2. إعداد وتشريح الكلى الزرد الكبار من عينة الحيوانات الثابتة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل PBST paraformaldehyde/1X 4 ٪. تغلي الحل بحل PFA إلى حل ، ثم تبرد الخليط إلى 4 درجات مئوية وإضافة dimethylsulfoxide 0.1 ٪. كان لدينا أكثر نجاحا مع الحفاظ على نسيج من استخدام الحلول الطازجة PFA مقابل aliquots المجمدة. جعل حل ما يكفي لغمر الزرد الكبار خلال التشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء علبة تشريح مع الحل التثبيت بما يكفي لغمر الزرد الكبار خلال التشريح. علينا تنفيذ الخطوات اللاحقة مع هذا الدرج وضعه تحت المجهر ، والتي يمكن وضعها في غطاء الكيميائية للحد من التعرض لتثبيت الروائح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الزرد بين البالغين في سن 3-6 أشهر للتشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الاسماك التي وضعها في الطبق مع 0.2 ٪ 7.0 درجة الحموضة Tricaine لنحو 5 دقائق ، وتراقب عن كثب لنرى أن الخياشيم والقلب النابض تتوقف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملعقة ، ورفع من الأسماك في حوض الاستحمام Tricaine كمية صغيرة من الحل ، الحل صب ومكان الحيوان برفق على منشفة ورقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام زوج من مقص حاد تشريح لإزالة رأس الحيوان ، مما يجعل من مجرد قطع وراء الوصاد الخيشومية (الشكل 1 ، مسار A). تجاهل رأسه في حاوية نفايات بيولوجية ، والمكان على الفور في درج الحيوانية تشريح PFA المحتوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدم المقص لفتح تشريح جسم الحيوان ، من خلال جعل شق بطني طويلة ، بدءا من الرأس وتنتهي في الذيل في قاعدة الزعنفة الذيلية (الشكل 1 ، ب المسار) ، والحفاظ على الجسم المغمور جزئيا خلال الإجراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأعضاء الداخلية للحيوان باستخدام زوج من ملاقط تشريح / ملقط ، ووضعها في النفايات بيولوجية. يجب الحرص على عدم فرشاة جدار الجسم الظهري ، وهذا هو الموقع في الكلى (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام إبر تشريح يعلقون فتح الجدران الجسم ، وزاوية دبابيس بحيث يمكن تصور الكلى. وسوف تمتلك الكلى شكل سمة (الرأس ، والسرج ، والذيل) واللون ، ويجري تتخللها تصبغ ملون أسود (الشكل 2). قد تشاهد أيضا الأبهر مليئة الدم المحيطي ، والذي يمتد الى اسفل خط الوسط لهيكل الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإصلاح العينة بين عشية وضحاها ، ووضع درج في 4 درجات مئوية عندما كنت فعلت مع ترتيب العينات المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي ، وإزالة الحل PFA من الدرج واستبدال 1X PBST. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط غرامة لفصل بعناية الكلى من جدار الجسم الظهري ، وذلك باستخدام ملقط زوج واحد من رفع الكلى كما يمكنك فصل الجهاز من الأنسجة الضامة التي تكمن وراء ذلك. سوف تكون لينة نسيج الكلى ومرن من DMSO تثبيتي في الحل ، مما يجعل من الممكن لتشريح الجهاز الكلوي بالكامل في قطعة واحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تستخدم على نطاقحمل الماصة نقلها إلى مكان الكلى في أنبوب microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن الآن الكلى تتم معالجتها لإجراء مزيد من جبل النسيجي أو كليا في الموقع دراسات التعبير الجيني واستنادا الى الدراسة المطلوبة. </li></ol> 3. ممثل النتائج : الخطوات التي يتم تخطيطي في الشكل رقم 1 يبين إجراء تشريح. يمكن التعرف على الكلى على أساس الشكل المميز له ، والتلون ، والموقع التشريحي على الجدار الظهري للتجويف جسم الحيوان ، كما هو مبين في الشكل 2. ويمكن بعد تشريح جبل الكلى ثابت ، مجمل العينة في الموقع التهجين يمكن استخدامها لإضفاء الطابع المحلي على التعبير عن الجينات في المصالح ، كما هو مبين في الشكل 3. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1 : الإجراءات التي تمكن من الوصول المباشر للتشريح الكلى الكبار الزرد. (أ) يتم تشريح الزرد الموت الرحيم بطريقة متدرجة (المشار إليها بواسطة أرقام والسهام) لإعطاء الباحث أسهل الوصول إلى جهاز الكلى كاملة. صور من تجويف البطن قبل (ب) وبعد (C) إزالة الأجهزة في البطن. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2 : التصور الكلى الزرد في عينة غير المثبت بعد إزالة الأجهزة في تجويف الجسم ، والكلى يظهر كجهاز واحد بالارض التي هي ملتصقة على جدار الجسم الظهري عبر الأنسجة الضامة (A) ، ولقد تم schematized (B) لإظهار شكلها التشريحية. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3 : جبل الجامع في الموقع التهجين التي أجريت على الجهاز الكبار الكلى بالكامل. (أ) يتم الكشف عن محاضر في cadherin17 نبيب النيفرون الكلى من الكبار ، والموسع في (A &#39;) ، (ب) هي النصوص المترجمة mafba أنواع الخلايا القريبة نفرون في الكلى الكبار (مقارنة نبيب بأكملها في لوحة A) (B&#39; ) موسع للرأي والتعبير mafba تكشف على وجه التحديد أن يتم ترجمة النصوص إلى الخلايا (ف) من تصفية خلية رجلاء الدم (كبيبة) ونبيب الملتوية القريبة (PCT).

<ol>
	<li>Stocum, D. L., Zupanc, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretching+the+limits:+stem+cells+in+regeneration+science.">Stretching the limits: stem cells in regeneration science.</a> Dev. Dyn. 237, 3648-3671 (2008).</li><li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+disease:+zebrafish+swim+into+view.">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nat. Rev. Genet. 8, 353-367 (2007).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullman, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+organs+from+the+adult+zebrafish.">Dissection of organs from the adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (37), (2010).</li><li>Mione, M. C., Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+as+a+model+for+cancer.">The zebrafish as a model for cancer.</a> Dis. Model Mech. 3, 517-523 (2010).</li><li>Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+biology+of+hematopoiesis.">Developmental biology of hematopoiesis.</a> Blood. 86, 2876-2891 (1995).</li><li>Davidson, A. J., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'definitive'+(and+'primitive')+guide+to+zebrafish+hematopoiesis.">The 'definitive' (and 'primitive') guide to zebrafish hematopoiesis.</a> Oncogene. 23, 7233-7246 (2004).</li><li>Orkin, S. H., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoiesis:+an+evolving+paradigm+for+stem+cell+biology.">Hematopoiesis: an evolving paradigm for stem cell biology.</a> Cell. 132, 631-644 (2008).</li><li>Reimschuessel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fish+model+of+renal+regeneration+and+development.">A fish model of renal regeneration and development.</a> ILAR J. 42, 285-291 (2001).</li><li>Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mesonephric+development+and+regeneration+using+transgenic+zebrafish.">Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 299, F1040-F1047 (2010).</li><li>Diep, C. Q., Ma, D., Holm, T., Naylor, R., Arora, N., Wingert, R., Bollig, F., Djordjevic, G., Lichman, B., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+adult+nephron+progenitors+capable+of+kidney+regeneration+in+zebrafish.">Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish.</a> Nature. 470, 95-100 (2011).</li><li>Traver, D., Paw, B. H., Poss, K. D., Penberthy, W. T., Lin, S., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+in+vivo+imaging+of+multilineage+engraftment+in+zebrafish+bloodless+mutants.">Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants.</a> Nat. Immunol. 4, 1238-1246 (2003).</li><li>Weber, G. J., Choe, S. E., Dooley, K. A., Paffett-Lugassy, N. N., Zhou, Y., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant-specific+gene+programs+in+the+zebrafish.">Mutant-specific gene programs in the zebrafish.</a> Blood. 106, 521-530 (2005).</li><li>Sumanas, S., Jorniak, T., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+vascular+endothelial-specific+genes+by+the+microarray+analysis+of+the+zebrafish+cloche+mutants.">Identification of novel vascular endothelial-specific genes by the microarray analysis of the zebrafish cloche mutants.</a> Blood. 106, 534-541 (2005).</li><li>Burns, C. E., Traver, D., Mayhall, E., Shepard, J. L., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell+fate+is+established+by+the+Notch-Runx+pathway.">Hematopoietic stem cell fate is established by the Notch-Runx pathway.</a> Genes Dev. 19, 2331-2342 (2005).</li><li>Little, M. H., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+there+such+a+thing+as+a+renal+stem+cell.">Is there such a thing as a renal stem cell.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 20, 2112-2117 (2009).</li><li>Stachura, D. L., Reyes, J. R., Bartunek, P., Paw, B. H., Zon, L. I., Traver, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+kidney+stromal+cell+lines+support+multilineage+hematopoiesis.">Zebrafish kidney stromal cell lines support multilineage hematopoiesis.</a> Blood. 114, 279-289 (2009).</li><li>North, T. E., Goessling, W., Walkley, C. R., Lengerke, C., Kopani, K. R., Lord, A. M., Weber, G. J., Bowman, T. V., Jang, I. H., Grosser, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E2+regulates+vertebrate+haematopoietic+stem+cell+homeostasis.">Prostaglandin E2 regulates vertebrate haematopoietic stem cell homeostasis.</a> Nature. 447, 1007-1011 (2007).</li><li>Wingert, R. A., Selleck, R., Yu, J., Song, H. D., Chen, Z., Song, A., Zhou, Y., Thisse, B., Thisse, C., McMahon, A. P., Davidson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cdx+genes+and+retinoic+acid+control+the+positioning+and+segmentation+of+the+zebrafish+pronephros.">The cdx genes and retinoic acid control the positioning and segmentation of the zebrafish pronephros.</a> PLoS Genet. 3, 1922-1938 (2007).</li><li>de Groh, E. D., Swanhart, L. M., Cosentino, C. C., Jackson, R. L., Dai, W., Kitchens, C. A., Day, B. W., Smithgall, T. E., Hukriede, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+histone+deacetylase+expands+the+renal+progenitor+cell+population.">Inhibition of histone deacetylase expands the renal progenitor cell population.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 21, 794-802 (2010).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الخلايا الجذعية البالغة هي مكونات حيوية وأساسية التي تحافظ على شكل الجسم البالغ 1. يمكن أن الخلايا الجذعية تستخدم أيضا لمواجهة الأضرار التي تتحملها الدول الجسم أثناء المرض ، وضعف أو فقدان الخلايا الجذعية البالغة يمكن ان يؤدي الى انخفاض وظيفة الجهاز والتي تورطت في دفع الأورام الخبيثة السرطانية وتسهم في الشيخوخة. الخلايا الجذعية البالغة خواص الخلوية التي تميزها عن أنواع الخلايا المتمايزة. بناء على انقسام الخلايا ، والخلايا الجذعية البالغة هي قادرة على التجديد الذاتي وإنتاج الخلايا الاصلية التي بدورها يمكن أن تؤدي إلى نسل متباينة متميزة. هناك اهتماما كبيرا في فهم مسارات اتخاذ القرارات التي تنظم مصير الخلية وفعالية من الخلايا الجذعية للبالغين بسبب دورهم المهم في توازن الأنسجة 1. على سبيل المثال ، العديد من العلماء يسعون حاليا للتعرف على الإشارات التي تحافظ على خلايا مختلفة من السكان البالغين الجذعية في مكانها المناسب ، أو المكروية المتخصصة ، وكيف أثرت هذه العوامل الخلطية الكوة. الكبار الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) هي خلايا متعددة الإمكانات التي تغذي التجديد المستمر لخلايا الدم في الحيوانات 8. تكون الدم هي عملية حيوية ومستمرة باستمرار خلال حياة الكائن الفقاريات لأن خلايا الدم الناضجة أنواع متباينة قصيرة الأجل ، وبالتالي يجب أن تتجدد بشكل منتظم. لأنها تفرق ، HSCs توريد هذا الطلب حاسما عن طريق تجديد الذات وإنتاج سلسلة من الأسلاف التي تؤدي إلى محمر ، الأنساب النواء ، اللمفاوية والدم النخاعي. كل هذه الأنواع من خلايا الدم يؤدي وظائف فريدة من نوعها في الدورة الدموية ، بما في ذلك توفير تبادل الغازات في الأنسجة ، وسيلة لمنع تسرب اصابات في الأوعية الدموية عن طريق تكوين جلطة ، أو آليات الدفاع ضد غزو الجراثيم. في حين تم الاعتراف HSCs لسنوات عديدة ، وعدد كبير من الأسئلة لا تزال دون إجابة رائعة حول هذه الخلايا مدهشة. وقد حددت الدراسات التي أجريت مؤخرا من HSCs فرعية مختلفة مع خصائص ذاتية التجديد على المدى الطويل ، والكشف عن المكونات المتخصصة والإشارات التي تعدل سلوك HSC 8. والزرد هو الآن من بين الركائز الأساسية لنماذج بحثية تكون الدم ، على أساس الصفات الوراثية والجزيئية لهذا النموذج الحيوان 8. وقد أدت البحوث الاستفادة من الزرد إلى رؤى جديدة حول البيولوجيا شهادة الثانوية العامة التي يتم حفظها مع ارتفاع الفقاريات مثل الثدييات ، مع التشديد على أهمية الطب الحيوي التحقيقات الدم الأسماك 8. تاريخيا ، والمعارف حول HSCs قد مهد الطريق لحملات تسعى لاكتشاف ما إذا كان يتم الاحتفاظ أجهزة الجسم الأخرى من الخلايا الجذعية للبالغين. ويقدر الآن العديد من السكان البالغين الخلية الجذعية في الوجود ، التي تمتد عبر هياكل متنوعة من الدماغ إلى الأمعاء والجلد والعضلات والهيكل العظمي. مواصلة بذل الجهود في مجال الخلايا الجذعية وتسعى إلى تحديد كيفية خلايا جذعية للبالغين وغيرها من أنواع الخلايا المختلفة حتى يمكن عرض قوة معززة في مختلف البيئات. فيما يتعلق الكلى ، وكان هناك نقاش كبير بين الكلى ما إذا كان وجود خلايا جذعية الكلوي 16. وقد وثقت نتائج مستقلة السكان من خلايا الكلى في الثدييات التي تمتلك درجات متفاوتة من إمكانات التجدد ، ولكن فهم متماسك من هذه التقارير لم يتحقق بعد. ومن المثير للاهتمام ، وهناك أدلة قوية لدعم الفكرة القائلة بأن العديد من أنواع الأسماك التي يمكن أن تمتلك خلايا الوقود بقوة تجديد النيفرون المتضررة ، فضلا عن النمو النيفرون جديدة كليا خلال مرحلة البلوغ 9. وقد حددت الأعمال الأخيرة بصمات الجزيئي للخلايا الجذعية للبالغين في الكلى 10،11 الزرد ، وبرهنت على فاعلية الذات تجديد هذه الخلايا الجذعية ما يسمى / السلف كلوي (محاولات RPCs) 11. هناك حاجة لدراسات المستقبل للتأكد مما إذا كانت خلايا الكلى مماثلة موجودة في الثدييات. ومع ذلك ، فقد استمرت التحقيقات حول الآليات الخلوية والجزيئية التي تنظم محاولات RPCs الأسماك توفير نظرة ثاقبة كيف يمكن حفز التجدد المفاخر في الكلى الثدييات. فمن الواضح أنه لا يزال هناك الكثير الذي ينبغي فهمه حول محاولات RPCs ، والتي يمكن تنفيذها في العديد من الأدوات المتاحة الآن للباحث الزرد لمعالجة هذه المسائل المثيرة للاهتمام. في هذا البروتوكول ، ونحن لدينا وصف طريقة لتحديد التشريحية وتشريح الكلى الزرد الكبار. ويمكن استخدام خطوات بديلة لتشريح الكلى ، مثل فتح التجويف البطني مع شق بطني باستخدام مقص التشريح ، ولكن واجهتنا أكثر نجاحا في الحصول على كامل الكلى عند دبس فتح جدار البطن ويتم إزالة الرأس. الدم والكلى ويمكن الباحثين على حد سواء الذين يرغبون في عزل والعمل مع هذه أنواع الخلايا إما استخدام أسلوب تشريح. تجدر الإشارة إلى أن الأسلوب وصفنا من أجل عزل وركينومن المؤكد غ مع الكلى الكبار الزرد لا تقتصر على العلماء الذين يرغبون في متابعة المسائل الكبار بيولوجيا الخلايا الجذعية ، وتشريح هذا الجهاز يمكن أن تسهل هذه الدراسات للباحثين متابعة التحقيقات حول مواضيع تتراوح بين علم وظائف الأعضاء في الشيخوخة. كذلك ، يمكن أن يقترن هذا الأسلوب مع تكنولوجيات أخرى مثل البذور المعدلة وراثيا ، وذلك لتسمية جزيئيا ثم تنقية ودراسة المجموعات السكانية الفرعية منفصلة من خلايا الدم أو الكلى أو وراثيا من wildtype الزرد متحولة 11. نتطلع ، مثل تنقية الإجراءات التفصيلية لأنواع الخلايا الجذعية والسلف هو أمر حيوي لكسب المعرفة حول كيفية تنظيم سلوكهم ، والتجارب التشغيلية مثل زرع أو زراعة السلف تشكل الأساس الذي يعرف قوة وهوية هذه الخلايا. التطورات الحديثة في أساليب لدم ثقافة السلف فتح آفاقا جديدة لكثير من الدراسة ، ويمكن تكييفها لزراعة الكلى للسكان 17. وقد الزرد الوراثة الكيميائية ناجحة في تحديد المسارات التي تعدل HSCs والأسلاف الكلوي في سياقات مختلفة 18-20 ، وستظل وسيلة مفيدة لاختبار في تركيبة مع تقنيات البيولوجيا الخلوية أعلاه. أخذت معا ، كان هناك عدد من المساهمات الرائدة في مجال أمراض الدم وأمراض الكلى باستخدام نموذج الزرد ، واستمر البحث في هذه المجالات وعود إلى رؤى تمارس تحويلية أخرى في السنوات المقبلة.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th></tr><tr><td> مقص تشريح </td><td> Roboz </td><td> RS - 5882 </td></tr><tr><td> تشريح ملقط </td><td> Roboz </td><td> RS - 5010 </td></tr><tr><td> ملقط تشريح الزاوية </td><td> Roboz </td><td> RS - 5058 </td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> سيغما </td><td> E10521 </td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> خدمات الإلكترون المجهر </td><td> 19210 </td></tr></tbody></table>

dissection of the adult zebrafish kidney

الباحثين العاملين في حقل يزدهر بيولوجيا الخلايا الجذعية للبالغين يسعون لفهم الإشارات التي تنظم السلوك وظيفة الخلايا الجذعية خلال التوازن الطبيعي والحالات المرضية. فهم الخلايا الجذعية البالغة والآثار واسعة المدى على مستقبل الطب التجديدي 1. على سبيل المثال ، يمكن معرفة أفضل عن الكبار بيولوجيا الخلايا الجذعية تسهيل تصميم الاستراتيجيات العلاجية التي يتم تشغيلها في أجهزة لعلاج أنفسهم أو حتى إيجاد طرق لأجهزة المتنامية في المختبر التي يمكن زرعها في البشر 1. أصبحت نموذجا الزرد الحيوان القوي لدراسة بيولوجيا الخلايا الفقاريات 2. كانت هناك وثائق مستفيضة وتحليل التطور الجنيني في الزرد 3. إلا أن العلماء في الآونة الأخيرة سعى إلى توثيق التشريح الكبار والتقنيات الجراحية تشريح 4 ، كما كانت هناك حركة التقدمية داخل المجتمع الزرد لتوسيع تطبيقات هذا الكائن البحوث للدراسات الكبار. على سبيل المثال ، هناك توسع في استخدام المصالح الزرد للتحقيق في بيولوجيا الخلايا الجذعية للبالغين من السكان وتقديم نماذج متطورة من البالغين بأمراض مثل سرطان 5. تاريخيا ، تم عزل الكلى الكبار الزرد مفيدة لدراسة تكون الدم ، والكلى هو الموقع التشريحي للإنتاج خلايا الدم في الأسماك 6،7. تتألف من وحدات الكلى نفرون الفنية موجودة في ترتيبات arborized ، وتحيط بها الأنسجة المكونة للدم التي تتوزع في جميع أنحاء المسافات الفاصلة. مكون للدم يتكون من الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) وذريتها التي تعيش في الكلى حتى يفرق عضال 8. بالإضافة إلى ذلك ، ويقدر الآن أن مجموعة من الخلايا الجذعية / السلف كلوي (محاولات RPCs) تسكن أيضا الجهاز الكلوي الزرد وتمكين كل من التجدد والنمو الكلى ، كما لوحظ في أنواع الأسماك الأخرى 9-11. في ضوء هذا الاكتشاف الجديد ، والكلى الزرد واحد الجهاز الذي يضم الموقع اثنين من الفرص المثيرة للبالغين دراسات بيولوجيا الخلايا الجذعية. فمن الواضح أنه يمكن عمل الكثير من المسائل العالقة بشكل جيد مع هذا النظام التجريبي. لتشجيع التوسع في هذا المجال ، من المفيد لتوثيق مفصل لطرق تصور ثم عزل الكلى الزرد الكبار الجهاز. تفاصيل هذا البروتوكول إجراء تشريح لدينا في الكلى الكبار على حد سواء من الحيوانات غير الثابتة والثابتة. ويمكن استخدام تشريح الجهاز الكلوي لعزل وتوصيف الخلايا الجذعية المكونة للدم والكلى وذريتهم باستخدام تقنيات معروفة مثل الأنسجة ، مضان تنشيط الخلايا الفرز (FACS) 11،12 ، 13،14 التنميط التعبير ، والزرع 11،15. نأمل أن نشر هذا البروتوكول سيتيح للباحثين معرفة أوسع لتنفيذ استخدام دراسات الزرد التي يمكن ترجمتها في نهاية المطاف للتطبيق البشري.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Adult Zebrafish Kidney at JoVE.com

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

الكلى الزرد هي موطن كل من الخلايا الجذعية المكونة للدم والكلى / السلف الكبار ، ويمثل فرصة رائعة لدراسة هذه الخلية أنواع وذريتها في الفقاريات الحي النموذجي. هنا ، علينا أن نظهر إجراء تشريح التفصيلية التي تمكن الباحث من تحديد وإزالة جراحيا الكلى الزرد الكبار ، والتي يمكن استخدامها لتطبيقات مثل عزل الخلايا ، وزرع ، ودراسات التعبير و / أو السكان الكلى خلايا الدم.

تشريح الكلى اسماك الزرد الكبار

Researchers working in the burgeoning field of adult stem cell biology seek to understand the signals that regulate the behavior and function of stem ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

زرع نخاع الكلى في الجامعة اسماك الزرد الكبار

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

الجسيمة والجميلة تشريح الأذن الداخلية الظهارة الحسية في اسماك الزرد الكبار ( دانيو rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

تشريح هيئات من اسماك الزرد الكبار

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

حقن داخل الصفاق الى اسماك الزرد الكبار

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

تشريح Oenocytes من الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Transplantation of Cells Directly into the Kidney of Adult Zebrafish

زرع الخلايا مباشرة في الكلى من اسماك الزرد الكبار

Regenerative medicine based on the transplantation of stem or progenitor cells into damaged tissues has the potential to treat a wide range of chronic ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

تشريح القلب في اليرقات ، اسماك الزرد الأحداث والكبار ، دانيو rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

في الجسم الحي من Electroporation Morpholinos في شبكية العين اسماك الزرد الكبار

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

في Electroporation المجراة من Morpholinos في الكبار التجديد زعنفة الذيل الزرد

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging اسماك الزرد الكبار

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...