Name: cecal ligation puncture procedure
Uploaded: 2011-05-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cecal Ligation Puncture Procedure at JoVE.com

Detta arbete stöddes av ett bidrag från Pennsylvania Department of Health. Dr Miguel Garcia Toscano var en forskarassistent vid Temple University, finansierat av Alfonso Martin Escudero stiftelsen under denna studie. Vi vill tacka Iliya Yordanov och Kevin Kotredes för framställning av videon.

1. Cecal Ligation och punktering som en musmodell för mänskliga Sepsis För detta förfarande C57BL / 6 möss (7-9 veckor) används. <ol><li> Bedöva musen genom att injicera intraperitonealt en lösning på 1:1 ketamin (75mg/kg) och xylazin (15mg/kg). Som referens, injicera 30 ìl av 01:01 lösningen i en mus som väger 20 gram. Alternativt kan möss vara bedövas med inhalerade isofluran med ett bedövningsmedel förångaren. </li><li> Shave buken av musen och desinficera området geno...

<ol>
	<li>Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States:+analysis+of+incidence,+outcome,+and+associated+costs+of+care.">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).</li><li>Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+enigma+of+sepsis.">The enigma of sepsis.</a> J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).</li><li>Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-analysis+of+acute+lung+injury+and+acute+respiratory+distress+syndrome+trials+testing+low+tidal+volumes.">Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes.</a> Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).</li><li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis:+setting+the+stage.">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li><li>Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis+and+sepsis-induced+kidney+injury.">Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury.</a> J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).</li><li>Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+background+determines+susceptibility+during+murine+septic+peritonitis.">Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis.</a> J Surg Res. 102, 45-49 (2002).</li><li>De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+determinants+influencing+the+response+to+injury,+inflammation,+and+sepsis.">Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis.</a> Shock. 23, 11-17 (2005).</li><li>Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+the+inflammatory+response+and+survival+following+haemorrhage+and+subsequent+sepsis.">Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis.</a> Cytokine. 14, 162-169 (2001).</li><li>Turnbull, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+age+on+mortality+and+antibiotic+efficacy+in+cecal+ligation+and+puncture.">Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture.</a> Shock. 19, 310-313 (2003).</li><li>Miyaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethyl+pyruvate+decreases+sepsis-induced+acute+renal+failure+and+multiple+organ+damage+in+aged+mice.">Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice.</a> Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).</li><li>Torres, M. B., De Maio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+exaggerated+inflammatory+response+after+CLP+correlates+with+a+negative+outcome.">An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome.</a> J Surg Res. 125, 88-93 (2005).</li><li>Doi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AP214,+an+analogue+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone,+ameliorates+sepsis-induced+acute+kidney+injury+and+mortality.">AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality.</a> Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).</li><li>Wilson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+attenuates+early+cytokine+mRNA+expression+after+peritonitis.">Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis.</a> J Trauma. 41, 622-627 (1996).</li><li>Zanotti-Cavazzoni, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis.">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).</li><li>Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model.">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34, 250-260 (2010).</li></ol>

Här visar vi i detalj hur du utför CLP-modell i möss och modulera svårighetsgrad. Jämfört med andra djurmodeller av sepsis kan CLP utföras i något musstam av olika ålder och kön. Det är ett relativt enkelt och billigt kirurgiska ingrepp. I denna modell har den svårighetsgrad en direkt inverkan på andelen överlevnad. Längden på ligation, tjockleken på nålen och antalet punkteringar är parametrar som kan styras för att modulera svårighetsgrad / dödlighet i CLP. Därför a...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagensets namn </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th><th> Kommentarer </th></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> AnaSed </td><td> Nada # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Insulin spruta 29G </td><td> Exel </td><td> 26.028 </td><td></td></tr><tr><td> Silk sutur, 6-0 PROLENE </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> 19G och 25G nål </td><td> BD </td><td> 305.186 </td><td></td></tr><tr><td> Rakapparat </td><td> Allmän försörjning </td><td> Allmän försörjning </td><td></td></tr><tr><td> Infraröd Uppvärmning lampa </td><td> Allmän försörjning </td><td> Allmän försörjning </td><td></td></tr><tr><td> Michel sår klipp 7mm </td><td> Roboz Kirurgiska Instr </td><td> RS-9270 </td><td></td></tr><tr><td> Öronbåge Mask </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> Dissection sax </td><td> Roboz Kirurgiska Instr </td><td> RS-6702 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine lösning </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> Kirurgisk pincett </td><td> Roboz Kirurgiska Instr </td><td> RS-5135 </td><td></td></tr><tr><td> 70% isopropylalkohol pad </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfin </td><td> Bedford Labs </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tramadol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 42.965 </td><td></td></tr></tbody></table>

cecal ligation puncture procedure

Mänskliga sepsis kännetecknas av en uppsättning av systemiska reaktioner som svar på intensiv och massiva infektion som inte kunde vara lokalt tillbaka av värden. För närvarande sepsis rankas bland de tio dödsorsakerna i USA intensivvårdsavdelningar 1. Vid sepsis finns två etablerade hemodynamisk faser som kan överlappa varandra. Den första fasen (hyperdynamic) definieras som en massiv produktion av proinflammatoriska cytokiner och reaktiva ämnen syrgas makrofager och neutrofiler som påverkar vaskulär permeabilitet (som leder till hypotension), hjärtfunktion och inducerar metabola förändringar kulminerade i vävnadsnekros och organsvikt. Följaktligen är den vanligaste dödsorsaken akut njurskada. Den andra fasen (hypodynamic) är en anti-inflammatorisk process med förändrat monocyter antigen presentation, minskade lymfocyter spridning och funktion och ökad apoptos. Detta tillstånd kallas immunsuppression eller immun depression ökar kraftigt risken för nocosomial infektioner och slutligen döden. Mekanismen bakom dessa patofysiologiska processer är inte väl karakteriserade. Eftersom båda faserna av sepsis kan medföra oåterkallelig och irreparabel skada är det viktigt att fastställa de immunologiska och fysiologiska status patienten. Detta är den främsta anledningen till många terapeutiska läkemedel har misslyckats. Samma läkemedel ges i olika stadier av sepsis kan vara terapeutiskt eller på annat sätt skadliga eller ha någon effekt 2,3. För att förstå sepsis på olika nivåer är det avgörande att ha en lämplig och omfattande djur-modell som återger det kliniska förloppet av sjukdomen. Det är viktigt att karakterisera patofysiologiska mekanismer som uppstår vid sepsis och kontroll modellen förutsättningar för att testa potentiella läkemedel. För att studera etiologin av mänskliga sepsis forskare har utvecklat olika djurmodeller. Den mest använda kliniska modellen är cecal ligation och punktering (CLP). CLP-modellen består av perforation av blindtarmen låta utsläpp av fekalt material in i bukhålan för att skapa ett förvärrat immunsvar som framkallas av polymikrobiella infektion. Denna modell uppfyller människans villkor som är kliniskt relevant. Liksom hos människor, möss som genomgår CLP med vätsketillförsel visar den första (tidiga) hyperdynamic fas som med tiden utvecklas till den andra (sent) hypodynamic fas. Dessutom är den cytokin profil som liknar den som ses hos människa sepsis där det finns ökad lymfocyt apoptos (över 4,5). På grund av de många och överlappande mekanismer involverade i sepsis, forskare behöver en lämplig sepsis modell av kontrollerade svårighetsgrad för att få enhetliga och reproducerbara resultat.

Watch this Scientific Journal Video about Cecal Ligation Puncture Procedure at JoVE.com

Cecal Ligation Puncture Procedure

Den musmodell av cecal ligation och punktera som ett värdefullt verktyg för studiet av mänskliga sepsis.

Cecal Ligation Punktering Förfarande

Human sepsis is characterized by a set of systemic reactions in response to intensive and massive infection that failed to be locally contained by the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Koronar Ligation och Intramyocardial Injektion i en murin modell för infarkt

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Tillämpningen av permanenta Mellanöstern Cerebral Artery Ligation i musen

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Ändrad Teknik för kransartärligering hos möss

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling

Murin Spinotrapezius modell för att bedöma effekten av arteriolär Ligering på Microvascular Funktion och Remodeling

The murine spinotrapezius is a thin, superficial skeletal support muscle that extends from T3 to L4, and is easily accessible via dorsal skin incision. ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Bile Duct Tion hos möss: Induktion av inflammatoriska leverskada och fibros av obstruktiv Kolestas

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Reduction of Iatrogenic Atrial Septal Defects with an Anterior and Inferior Transseptal Puncture Site when Operating the Cryoballoon Ablation Catheter

Minskning av Iatrogen Atrial septumdefekter med en främre och Inferior transseptala stickstället när Använda Cryoballoon abiationskatetern

The cryoballoon catheter ablates atrial fibrillation (AF) triggers in the left atrium (LA) and pulmonary veins (PVs) via transseptal access. The typical ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murina vänstra främre nedåtgående (LAD) kransartärligering: en förbättrad och förenklad modell för hjärtinfarkt

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Råtta modell av associera lever Partition och portalen ven Ligation stegvis Hepatectomy (ALPPS) förfarandet för

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

Punktering-inducerad Iris kärlnybildning som en musmodell av Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Subclavia ven punktering som en alternativ metod för blod provtagning hos råttor

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...