Name: the mouse cremaster muscle preparation for intravital imaging of the microcirculation
Uploaded: 2011-06-10T12:00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Mouse Cremaster Muscle Preparation for Intravital Imaging of the Microcirculation at JoVE.com

ويدعم البحوث في المختبر المؤلفين من المعاهد الوطنية للصحة منح R37 - HL041026 ، R01 - R01 HL086483 وHL056786 - (SSS) وHL097463 - F32 و- T32 AR048523 (PB) من خدمة الولايات المتحدة الصحة العامة.

<ol>
	<li>Majno, G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+inflammation.+1.+The+effect+of+histamine+and+serotonin+on+vascular+permeability:+an+electron+microscopic+study.">Studies on inflammation. 1. The effect of histamine and serotonin on vascular permeability: an electron microscopic study.</a> J. Biophys. Biochem. Cytol. 11, 571-605 (1961).</li><li>Majno, G., Palade, G. E., Schoefl, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+inflammation.+II.+The+site+of+action+of+histamine+and+serotonin+along+the+vascular+tree:+a+topographic+study.">Studies on inflammation. II. The site of action of histamine and serotonin along the vascular tree: a topographic study.</a> J. Biophys. Biochem. Cytol. 11, 607-626 (1961).</li><li>Grant, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Observation+of+Skeletal+Muscle+Blood+Vessels+(Rat+Cremaster).">Direct Observation of Skeletal Muscle Blood Vessels (Rat Cremaster).</a> J. Physiol. 172, 123-137 (1964).</li><li>Baez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+open+cremaster+muscle+preparation+for+the+study+of+blood+vessels+by+in+vivo+microscopy.">An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy.</a> Microvasc. Res. 5, 384-394 (1973).</li><li>Bohlen, H. G., Gore, R. W., Hutchins, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+microvascular+pressures+in+normal+and+spontaneously+hypertensive+rats.">Comparison of microvascular pressures in normal and spontaneously hypertensive rats.</a> Microvasc. Res. 13, 125-130 (1977).</li><li>Klitzman, B., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+hematocrit+and+red+cell+flow+in+resting+and+contracting+striated+muscle.">Microvascular hematocrit and red cell flow in resting and contracting striated muscle.</a> Am. J. Physiol. 237, 481-490 (1979).</li><li>Hungerford, J. E., Sessa, W. C., &amp;amp, S. e. g. a. l., S, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasomotor+control+in+arterioles+of+the+mouse+cremaster+muscle.">Vasomotor control in arterioles of the mouse cremaster muscle.</a> FASEB J. 14, 197-207 (2000).</li><li>Figueroa, X. F., Paul, D. L., Simon, A. M., Goodenough, D. A., Day, K. H., Damon, D. N., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+of+connexin40+in+the+propagation+of+electrically+activated+vasodilation+in+mouse+cremasteric+arterioles+in+vivo.">Central role of connexin40 in the propagation of electrically activated vasodilation in mouse cremasteric arterioles in vivo.</a> Circ. Res. 92, 793-800 (2003).</li><li>Wolfle, S. E., Schmidt, V. J., Hoepfl, B., Gebert, A., Alcolea, S., Gros, D., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connexin45+cannot+replace+the+function+of+connexin40+in+conducting+endothelium-dependent+dilations+along+arterioles.">Connexin45 cannot replace the function of connexin40 in conducting endothelium-dependent dilations along arterioles.</a> Circ. Res. 101, 292-1299 (2007).</li><li>Milkau, M., Kohler, R., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+importance+of+the+endothelial+K++channel+SK3+and+connexin40+in+arteriolar+dilations+during+skeletal+muscle+contraction.">Crucial importance of the endothelial K+ channel SK3 and connexin40 in arteriolar dilations during skeletal muscle contraction.</a> FASEB J. 24, 3572-3579 (2010).</li><li>Bagher, P., Duan, D., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+impaired+neurovascular+transmission+in+a+murine+model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy.">Evidence for impaired neurovascular transmission in a murine model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> J. Appl. Physiol. 110, 601-610 (2011).</li><li>Tallini, Y. N., Brekke, J. F., Shui, B., Doran, R., Hwang, S. M., Nakai, J., Salama, G., Segal, S. S., Kotlikoff, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagated+endothelial+Ca2++waves+and+arteriolar+dilation+in+vivo:+measurements+in+Cx40BAC-GCaMP2+transgenic+mice.">Propagated endothelial Ca2+ waves and arteriolar dilation in vivo: measurements in Cx40BAC-GCaMP2 transgenic mice.</a> Circ. Res. 101, 1300-1309 (2007).</li><li>Grant, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+denervation+on+skeletal+muscle+blood+vessels+(rat+cremaster).">The effects of denervation on skeletal muscle blood vessels (rat cremaster).</a> J. Anat. 100, 305-316 (1966).</li><li>Proctor, K. G., Busija, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+among+arteriolar,+regional,+and+whole+organ+blood+flow+in+cremaster+muscle.">Relationships among arteriolar, regional, and whole organ blood flow in cremaster muscle.</a> Am. J. Physiol. 249, H34-H41 (1985).</li><li>Bagher, P., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+blood+flow+in+the+microcirculation:+Role+of+conducted+vasodilation.">Regulation of blood flow in the microcirculation: Role of conducted vasodilation.</a> Acta Physiol. , (2011).</li><li>Hill, M. A., Simpson, B. E., Meininger, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+cremaster+muscle+hemodynamics+due+to+disruption+of+the+deferential+feed+vessels.">Altered cremaster muscle hemodynamics due to disruption of the deferential feed vessels.</a> Microvasc. Res. 39, 349-363 (1990).</li></ol>

تمت الموافقة على كافة الإجراءات والبروتوكولات التي تنطوي على الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوان ، واستخدم من جامعة ميسوري والتي أجريت في الاتفاق مع المرشد لمعاهد الصحة الوطنية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. وقد رعت الإنتاج من هذه المادة عن طريق الفيديو بواسطة الضوئيات ستانفورد.

نحن هنا وصف العضلة المشمرة فتح في إعداد الماوس لرصد دوران الأوعية الدقيقة في الجسم الحي. وعلى غرار هذا الإجراء بعد &quot;فتح&quot; إعداد المشمرة وصف لأول مرة في الفئران 4. ويمكن أن يكتمل مع الممارسة العملية الجراحية بالكامل في أقل من 1 ساعة. وبراعة هذا الإعداد يسمح لمجموعة متنوعة من المعالجات التجريبية وتكييفها بسهولة للهامستر وكذلك الفئران ، وتمكين مجموعة متنوعة من نماذج تجريبية لدراستها بطريقة مماثلة. ويقتصر إعداد للحيوانات من الذكور ، وينبغي إجراء قياسات نحو وسط النسيج ، وتجنب المناطق المتضررة بالقرب من حواف العضلات 14. وينبغي أيضا أنه يجب الاعتراف بأنه ، في حين يتم تغيير توزيع الضغط والتدفق عندما يتم قطع الأوعية ربط عضلة المشمرة 16 ، microvessels تظل استجابة ومناسبة لجمع البيانات استنساخه. القيد الرئيسي على الرؤية ودوران الأوعية الدقيقة في العضلات المشمرة هو تراكم النسيج الضام مثل الحيوانات الناضجة وزيادة في الحجم ، ولا سيما في الفئران ولكن أيضا في الهامستر. كذلك ، الحيوانات الحصول على الدهون ، فإنه يصبح من الصعب السيطرة عليها بسبب التخدير بنتوباربيتال محبة للدهون ويمكن استيعابها في الأنسجة الدهنية. أفضل طريقة للمضي قدما هو من خلال التحلي بالصبر مع ضمان الحفاظ على درجة حرارة جسم الحيوان ° ~ في 37 درجة مئوية بينما المروية الأنسجة تتعرض باستمرار مع PSS.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم أو جهاز كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> الصياد </td><td> S642 - 212 </td><td></td></tr><tr><td> كلوريد البوتاسيوم </td><td> سيغما </td><td> P9541 </td><td></td></tr><tr><td> سلفات المغنيزيوم </td><td> سيغما </td><td> M2643 </td><td></td></tr><tr><td> كلوريد الكالسيوم </td><td> سيغما </td><td> C1016 </td><td></td></tr><tr><td> بيكربونات الصوديوم </td><td> الصياد </td><td> S233 </td><td></td></tr><tr><td> Nembutal الصوديوم الحل </td><td> Lundbeck </td><td> NDC 67386-501-55 </td><td> كما يشار إلى الصوديوم بنتوباربيتال </td></tr><tr><td> درجة الحرارة المراقب المالي </td><td> نذير الآلات </td><td> TC - 344B </td><td> البديل : تعديل التيار المستمر 12V العرض </td></tr><tr><td> سلسلة سخان منصة 20 طقم RH - 2 </td><td> نذير الآلات </td><td> 64-0274 </td><td> يتطلب مبنية خصيصا لوحة الألمنيوم </td></tr><tr><td> كاميرا 10 ميجا </td><td> ستانفورد الضوئيات </td><td> XR/Mega-10 </td><td></td></tr><tr><td> MVX10 </td><td> اوليمبوس </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MV PLAPO 2XC العدسة </td><td> اوليمبوس </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MVX10 الوقوف الهجين </td><td> ليدز </td><td> LBX الهجين </td><td></td></tr><tr><td> مزمر مراقبة البرامج </td><td> ستانفورد الضوئيات </td><td></td><td> برنامج للكاميرا 10 ميجا </td></tr><tr><td> مجهر ستيريو </td><td> نيكون </td><td> SMZ645 </td><td></td></tr><tr><td> سيليكون مانع التسرب للماء (واضح) </td><td> جنرال الكتريك </td><td> 47970-72643 - LW5000 </td><td> مانعات التسرب سيليكون أخرى واضحة تعمل أيضا </td></tr><tr><td> 60 × طبق بيتري 15mm </td><td> الصياد </td><td> 08-757 - 13A </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> داو كورننغ </td><td> 184 </td><td></td></tr><tr><td> Microdissection مقص </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 15003-08 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> دومون الملقط </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> # 5 / 45 </td><td></td></tr><tr><td> GP ميليبور اكسبريس PLUS الغشائية </td><td> ميليبور </td><td> SCGPT05RE </td><td></td></tr><tr><td> دبابيس Minutiens الحشرات </td><td> أوسترليتز </td><td> M حجم 0،15 ملم </td><td></td></tr><tr><td> المضغوط الحيوانات الأليفة المتقلب </td><td> فاهل شركة كليبر </td><td> نموذج 9966 </td><td> نظيفة بعد كل استعمال </td></tr></tbody></table>

the mouse cremaster muscle preparation for intravital imaging of the microcirculation

في جميع أنحاء الجسم ، والحفاظ على التوازن يتطلب امدادات ثابتة من الأوكسجين والمواد المغذية يصاحب ذلك مع إزالة الأيضية والمنتجات. ويتحقق هذا التوازن عن طريق حركة الدم من خلال دوران الأوعية الدقيقة ، والذي يشمل فروع أصغر من إمدادات الأوعية الدموية في جميع الأنسجة والأعضاء. الشرينات فرع من الشرايين على شكل شبكات للتحكم في توزيع وحجم الدم المؤكسج تصب في العديد من الشعيرات الدموية المرتبطة ارتباطا وثيقا مع خلايا متنية. الشعيرات الدموية توفر مساحة كبيرة لتبادل diffusional بين خلايا الأنسجة والدم. الوريدات جمع النفايات السائلة الشعرية وتتلاقى مع عودتهم امؤكسج الدم نحو القلب. لمراقبة هذه العمليات في الوقت الحقيقي يتطلب نهجا تجريبيا لتصور والتلاعب دوران الأوعية الدقيقة الحية. وقد استخدم لأول مرة في عضلة المشمرة الجرذان كنموذج لدراسة التهاب الأنسجة باستخدام المجهر والإلكترون 1،2 آخر بعد الوفاة. التحقيق الأول في تقرير المجراة من الفئران المعرضة سليمة العضلات المشمرة ردود الاوعية الدموية الدقيقة على الأدوية فعال في الأوعية باستخدام الضوء ينعكس 3. مهما كانت محدودة انحناء في العضلات وعدم وجود إنارة ركزت على فائدة من هذا الإعداد. واستتبع فتح فتحا كبيرا في العضلات ، وفصلها من الخصية وانتشاره شعاعيا كورقة للشقة تضوء تحت المجهر المركب 4. في حين أظهرت أن يكون إعداد قيمة لدراسة علم وظائف الأعضاء للدوران الأوعية الدقيقة في الجرذان والفئران البيضاء 5 6 ، وقد ثبت في العضلة المشمرة الفئران 7 مفيدة بشكل خاص في تشريح مسارات الخلوية تشارك في تنظيم وظيفة الاوعية الدموية الدقيقة 11/08 في الوقت الحقيقي والتصوير من بين الخلايا إشارات 12. مشتق من العضلة المشمرة عضلات البطن الداخلية المائل والعرضي والخصيتين ينزل من خلال القناة الإربية 13. إنه يساعد على دعم (باليونانية : المشمرة = رباط الجورب) والحفاظ على درجة حرارة الخصيتين. كما هو موضح هنا ، هو إعداد ورقة والعضلات المشمرة شقة رقيقة لقرار الضوئية المعلقة. مع الحفاظ على الماوس في درجة حرارة الجسم ثابتة وطائرة من التخدير ، وإعداد الجراحية ينطوي على تحرير العضلات من الأنسجة المحيطة بها ، والخصيتين ، ونشر ذلك على قاعدة التمثال من المطاط silastic شفافة وتأمين الحواف مع دبابيس الحشرات بينما لري بشكل مستمر مع محلول ملحي الفسيولوجية . ويستخدم هذا البروتوكول الفئران المعدلة وراثيا في التعبير عن GCaMP2 الخلايا البطانية تصلب. GCaMP2 المرمزة وراثيا هو مؤشر الكالسيوم الفلورسنت 12 الجزيء. Widefield التصوير والكاميرا كثف الجهاز المسؤول إلى جانب تمكين في الدراسة المجراة من إشارات الكالسيوم في بطانة تصلب.

Watch this Scientific Journal Video about The Mouse Cremaster Muscle Preparation for Intravital Imaging of the Microcirculation at JoVE.com

The Mouse Cremaster Muscle Preparation for Intravital Imaging of the Microcirculation

ووصف إعداد التصور والأنسجة لمعالجة التجريبية للدوران الأوعية الدقيقة الحية. في الفئران الذكور تخدير ، يتم إعداد رقيقة ، والعضلات المشمرة أوعية دموية للغاية لintravital المجهري لدراسة شبكات الاوعية الدموية الدقيقة بما في ذلك الشرايين والشعيرات الدموية والأوردة. ويتم تكييف بسهولة التحضير لهذه الجرذان والفئران البيضاء.

العضلة المشمرة ماوس التحضير لتصوير Intravital للدوران الأوعية الدقيقة

Throughout the body, the maintenance of homeostasis requires the constant supply of oxygen and nutrients concomitant with removal of metabolic ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

لإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لايف التصوير باستخدام بروتوكول إسقاط الشنق

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Microiontophoresis and Micromanipulation for Intravital Fluorescence Imaging of the Microcirculation

Microiontophoresis والمجهرية للتصوير الإسفار Intravital للدوران الأوعية الدقيقة

Microiontophoresis entails passage of current through a micropipette tip to deliver a solute at a designated site within an experimental  preparation. ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

جيل من الفئران المستمدة من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Intravital Microscopy of the Microcirculation in the Mouse Cremaster Muscle for the Analysis of Peripheral Stem Cell Migration

حيوي داخلي المجهري للدوران الأوعية الدقيقة في العضلات المشمرة ماوس لتحليل الهجرة الجذعية الطرفية المحمولة

In the era of intravascular cell application protocols in the context of regenerative cell therapy, the underlying mechanisms of stem cell migration to ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

عزل الميتوكوندريا من كميات الحد الأدنى من الفأر العضلات الهيكلية للإنتاجية عالية صفيحة ميكروسكوبية الجهاز التنفسي القياسات

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

عزل الفئران التاجي الأوعية الدموية خلايا العضلات الملساء

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Visualization and Quantification of the Cell-free Layer in Arterioles of the Rat Cremaster Muscle

التصور النوعي والكمي للطبقة خالية من الخلايا في الشرايين من العضلات الفئران المشمرة

The cell-free layer is defined as the parietal plasma layer in the microvessel flow, which is devoid of red blood cells. The measurement of the in vivo ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

بروتوكول الآلي السريع لالعضلات تحليل الألياف السكان في الجرذ العضلات المقاطع العرضية عن طريق سلسلة الميوسين الثقيلة المناعية

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

أسلوب متعدد الاستخدامات لتركيب نبات يترك لتصوير الوقت الفاصل بين إينترافيتال

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...

Sample Preparation for Metabolic Profiling using MALDI Mass Spectrometry Imaging

إعداد عينة للتنميط الأيضي باستخدام التصوير الطيفي الشامل MALDI

Metabolomics, the study to identify and quantify small molecules and metabolites present in an experimental sample, has emerged as an important tool to ...