Name: the mouse cremaster muscle preparation for intravital imaging of the microcirculation
Uploaded: 2011-06-10T12:00:00
Duration: 7 min 19 s
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&#39;लेखक की प्रयोगशाला में अनुसंधान स्वास्थ्य R37-HL041026 अनुदान, R01-HL086483 और R01-HL056786 (एसएसएस) और F32 HL097463 और T32 AR048523 संयुक्त राज्य अमेरिका के सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा से (पंजाब) के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित है.

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	<li>Majno, G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+inflammation.+1.+The+effect+of+histamine+and+serotonin+on+vascular+permeability:+an+electron+microscopic+study.">Studies on inflammation. 1. The effect of histamine and serotonin on vascular permeability: an electron microscopic study.</a> J. Biophys. Biochem. Cytol. 11, 571-605 (1961).</li><li>Majno, G., Palade, G. E., Schoefl, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+inflammation.+II.+The+site+of+action+of+histamine+and+serotonin+along+the+vascular+tree:+a+topographic+study.">Studies on inflammation. II. The site of action of histamine and serotonin along the vascular tree: a topographic study.</a> J. Biophys. Biochem. Cytol. 11, 607-626 (1961).</li><li>Grant, R. 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J., Hoepfl, B., Gebert, A., Alcolea, S., Gros, D., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connexin45+cannot+replace+the+function+of+connexin40+in+conducting+endothelium-dependent+dilations+along+arterioles.">Connexin45 cannot replace the function of connexin40 in conducting endothelium-dependent dilations along arterioles.</a> Circ. Res. 101, 292-1299 (2007).</li><li>Milkau, M., Kohler, R., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+importance+of+the+endothelial+K++channel+SK3+and+connexin40+in+arteriolar+dilations+during+skeletal+muscle+contraction.">Crucial importance of the endothelial K+ channel SK3 and connexin40 in arteriolar dilations during skeletal muscle contraction.</a> FASEB J. 24, 3572-3579 (2010).</li><li>Bagher, P., Duan, D., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+impaired+neurovascular+transmission+in+a+murine+model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy.">Evidence for impaired neurovascular transmission in a murine model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> J. Appl. Physiol. 110, 601-610 (2011).</li><li>Tallini, Y. N., Brekke, J. F., Shui, B., Doran, R., Hwang, S. M., Nakai, J., Salama, G., Segal, S. S., Kotlikoff, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagated+endothelial+Ca2++waves+and+arteriolar+dilation+in+vivo:+measurements+in+Cx40BAC-GCaMP2+transgenic+mice.">Propagated endothelial Ca2+ waves and arteriolar dilation in vivo: measurements in Cx40BAC-GCaMP2 transgenic mice.</a> Circ. Res. 101, 1300-1309 (2007).</li><li>Grant, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+denervation+on+skeletal+muscle+blood+vessels+(rat+cremaster).">The effects of denervation on skeletal muscle blood vessels (rat cremaster).</a> J. Anat. 100, 305-316 (1966).</li><li>Proctor, K. G., Busija, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+among+arteriolar,+regional,+and+whole+organ+blood+flow+in+cremaster+muscle.">Relationships among arteriolar, regional, and whole organ blood flow in cremaster muscle.</a> Am. J. Physiol. 249, H34-H41 (1985).</li><li>Bagher, P., Segal, S. 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सभी प्रक्रियाओं और जानवरों को शामिल प्रोटोकॉल पशु देखभाल और मिसौरी विश्वविद्यालय का प्रयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया और प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए संस्थान राष्ट्रीय स्वास्थ्य गाइड के साथ समझौते में प्रदर्शन किया . इस वीडियो लेख का उत्पादन स्टैनफोर्ड फोटोनिक्स द्वारा प्रायोजित किया गया है.

यहाँ हम vivo में microcirculation के अवलोकन के लिए माउस में खुला cremaster मांसपेशियों तैयारी का वर्णन . यह प्रक्रिया &quot;खुला&quot; cremaster पहले 4 चूहे में वर्णित तैयारी के बाद modeled है . अभ्यास के साथ पूरे शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया कम से कम 1 घंटे में पूरा किया जा सकता है. इस तैयारी के बहुमुखी प्रतिभा प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती की एक किस्म के लिए अनुमति देता है और आसानी से hamsters के रूप में अच्छी तरह के रूप में चूहों के लिए अनुकूलित, प्रयोगात्मक मॉडल की एक किस्म के लिए इसी तरह फैशन में अध्ययन किया जा सक्षम है. तैयारी पुरुष जानवरों के लिए सीमित है और माप ऊतक के केंद्र की ओर किया जाना चाहिए, 14 की मांसपेशी के किनारों के पास क्षतिग्रस्त क्षेत्रों से परहेज है. यह भी मान्यता है कि, जबकि दबाव और प्रवाह वितरण बदल रहे हैं जब cremaster मांसपेशियों की परस्पर वाहिकाओं 16 काट रहे हैं, microvessels संवेदनशील और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य डेटा के संग्रह के लिए उपयुक्त रहते हैं होना चाहिए. cremaster मांसपेशियों में microcirculation visualizing प्राथमिक सीमा चूहों में विशेष रूप से, लेकिन यह भी hamsters में परिपक्व जानवरों और आकार में वृद्धि के रूप में संयोजी ऊतक के buildup है. इसके अलावा, के रूप में पशुओं वसा मिल, इसे और अधिक मुश्किल हो जाता है संज्ञाहरण नियंत्रण क्योंकि pentobarbital lipophilic है और वसा ऊतकों में अवशोषित किया जा सकता है. सबसे अच्छा तरीका है आगे बढ़ने रोगी जा रहा है जबकि यह सुनिश्चित करना कि जानवर ° शरीर का तापमान 37 ~ पर बनाए रखा है डिग्री सेल्सियस जबकि उजागर ऊतक लगातार PSS के साथ सिंचित है.

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक या डिवाइस के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियाँ </th></tr><tr><td> सोडियम क्लोराइड </td><td> मछुआ </td><td> S642 - 212 </td><td></td></tr><tr><td> पोटेशियम क्लोराइड </td><td> सिग्मा </td><td> P9541 </td><td></td></tr><tr><td> मैग्नीशियम सल्फेट </td><td> सिग्मा </td><td> M2643 </td><td></td></tr><tr><td> कैल्शियम क्लोराइड </td><td> सिग्मा </td><td> C1016 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम बिकारबोनिट </td><td> मछुआ </td><td> S233 </td><td></td></tr><tr><td> Nembutal सोडियम समाधान </td><td> लंडबेक </td><td> 67386-501-55 एनडीसी </td><td> इसके अलावा pentobarbital सोडियम के रूप में संदर्भित </td></tr><tr><td> तापमान नियंत्रक </td><td> वार्नर उपकरण </td><td> TC-344B </td><td> वैकल्पिक: समायोज्य 12V डीसी बिजली की आपूर्ति </td></tr><tr><td> सीरीज 20 मंच हीटर किट आरएच-2 </td><td> वार्नर उपकरण </td><td> 64-0274 </td><td> कस्टम निर्मित एल्यूमिनियम प्लेट की आवश्यकता होती है </td></tr><tr><td> मेगा-10 कैमरा </td><td> स्टैनफोर्ड फोटोनिक्स </td><td> XR/Mega-10 </td><td></td></tr><tr><td> MVX10 </td><td> ओलिंप </td><td></td><td></td></tr><tr><td> एमवी PLAPO 2XC लेंस </td><td> ओलिंप </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MVX10 संकर स्टैंड </td><td> लीड्स </td><td> LBX - हाइब्रिड </td><td></td></tr><tr><td> मुरलीवाला नियंत्रण सॉफ्टवेयर </td><td> स्टैनफोर्ड फोटोनिक्स </td><td></td><td> मेगा-10 कैमरे के लिए कार्यक्रम </td></tr><tr><td> स्टीरियो माइक्रोस्कोप </td><td> Nikon </td><td> SMZ645 </td><td></td></tr><tr><td> निविड़ अंधकार सिलिकॉन सीलेंट (साफ) </td><td> जनरल इलेक्ट्रिक </td><td> +४७,९७०-७२,६४३ - LW5000 </td><td> अन्य स्पष्ट सिलिकॉन sealants भी काम </td></tr><tr><td> 60 x 15mm पेट्री डिश </td><td> मछुआ </td><td> 13A-08-757 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> डॉव Corning </td><td> 184 </td><td></td></tr><tr><td> Microdissection कैंची </td><td> ललित विज्ञान उपकरण </td><td> 15003-08 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dumont संदंश </td><td> ललित विज्ञान उपकरण </td><td> / 5 # 45 </td><td></td></tr><tr><td> जीपी Millipore एक्सप्रेस PLUS झिल्ली </td><td> Millipore </td><td> SCGPT05RE </td><td></td></tr><tr><td> Minutiens कीट पिंस </td><td> Austerlitz </td><td> एम आकार 0.15 मिमी </td><td></td></tr><tr><td> कॉम्पैक्ट पालतू Trimmer </td><td> Wahl क्लिपर कॉर्प </td><td> 9966 मॉडल </td><td> प्रत्येक उपयोग के बाद साफ </td></tr></tbody></table>

the mouse cremaster muscle preparation for intravital imaging of the microcirculation

Throughout the body, the maintenance of homeostasis requires the constant supply of oxygen and nutrients concomitant with removal of metabolic by-products. This balance is achieved by the movement of blood through the microcirculation, which encompasses the smallest branches of the vascular supply throughout all tissues and organs. Arterioles branch from arteries to form networks that control the distribution and magnitude of oxygenated blood flowing into the multitude of capillaries intimately associated with parenchymal cells. Capillaries provide a large surface area for diffusional exchange between tissue cells and the blood supply. Venules collect capillary effluent and converge as they return deoxygenated blood towards the heart. To observe these processes in real time requires an experimental approach for visualizing and manipulating the living microcirculation.
The cremaster muscle of rats was first used as a model for studying inflammation using histology and electron microscopy post mortem1,2. 
The first in vivo report of the exposed intact rat cremaster muscle investigated microvascular responses to vasoactive drugs using reflected light3. However 
curvature of the muscle and lack of focused illumination limited the usefulness of this preparation. The major breakthrough entailed opening the muscle, 
detaching it from the testicle and spreading it radially as a flat sheet for transillumination under a compound microscope4. While shown to be a valuable 
preparation to study the physiology of the microcirculation in rats5 and hamsters6, the cremaster muscle in mice7 has proven particularly useful in dissecting 
cellular pathways involved in regulating microvascular function8-11 and real-time imaging of intercellular signaling12. 
The cremaster muscle is derived from the internal oblique and transverse abdominus muscles as the testes descend through the inguinal canal13. 
It serves to support (Greek: cremaster = suspender) and maintain temperature of the testes. As described here, the cremaster muscle is prepared as a thin flat sheet 
for outstanding optical resolution. With the mouse maintained at a stable body temperature and plane of anesthesia, surgical preparation involves freeing the muscle 
from surrounding tissue and the testes, spreading it onto transparent pedestal of silastic rubber and securing the edges with insect pins while irrigating it 
continuously with physiological salt solution. The present protocol utilizes transgenic mice expressing GCaMP2 in arteriolar endothelial cells. GCaMP2 is a 
genetically encoded fluorescent calcium indicator molecule12. Widefield imaging and an intensified charge-coupled device camera enable in vivo study of 
calcium signaling in the arteriolar endothelium.

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The Mouse Cremaster Muscle Preparation for Intravital Imaging of the Microcirculation

एक ऊतक तैयारी दृश्य और रहने वाले microcirculation के प्रयोगात्मक हेरफेर के लिए वर्णित है. Anesthetized नर चूहों में, पतली, उच्च vascularized cremaster मांसपेशियों intravital माइक्रोस्कोपी arterioles, capillaries और venules सहित microvascular नेटवर्क अध्ययन के लिए तैयार है. यह तैयारी चूहों और hamsters के लिए आसानी से अनुकूलित है.

Microcirculation के intravital इमेजिंग के लिए माउस Cremaster बलवान तैयारी

Throughout the body, the maintenance of homeostasis requires the constant supply of oxygen and nutrients concomitant with removal of metabolic ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

की तैयारी ड्रोसोफिला लाइव इमेजिंग के लिए भ्रूण हैंगिंग ड्रॉप प्रोटोकॉल का उपयोग करना

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Microiontophoresis and Micromanipulation for Intravital Fluorescence Imaging of the Microcirculation

Microiontophoresis और microcirculation के intravital प्रतिदीप्ति इमेजिंग के लिए Micromanipulation

Microiontophoresis entails passage of current through a micropipette tip to deliver a solute at a designated site within an experimental  preparation. ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

प्रेरित pluripotent स्टेम सेल से व्युत्पन्न चूहों की पीढ़ी

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Intravital Microscopy of the Microcirculation in the Mouse Cremaster Muscle for the Analysis of Peripheral Stem Cell Migration

परिधीय स्टेम सेल प्रवास के विश्लेषण के लिए माउस cremaster मांसपेशियों में microcirculation के intravital माइक्रोस्कोपी

In the era of intravascular cell application protocols in the context of regenerative cell therapy, the underlying mechanisms of stem cell migration to ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

उच्च Throughput Microplate श्वसन माप के लिए माउस कंकाल की मांसपेशी की कम मात्रा से माइटोकॉन्ड्रिया के अलगाव

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Murine कोरोनरी संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं का अलगाव

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Visualization and Quantification of the Cell-free Layer in Arterioles of the Rat Cremaster Muscle

चूहा cremaster मांसपेशियों की धमनियों में दृश्य और सेल मुक्त लेयर की मात्रा

The cell-free layer is defined as the parietal plasma layer in the microvessel flow, which is devoid of red blood cells. The measurement of the in vivo ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

चूहा स्नायु पार वर्गों मायोसिन भारी चेन immunohistochemistry का उपयोग में स्नायु फाइबर जनसंख्या विश्लेषण के लिए एक तेजी से स्वचालित प्रोटोकॉल

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

Intravital समय चूक इमेजिंग के लिए बढ़ते Arabidopsis पत्तियों के लिए एक बहुमुखी विधि

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...

Sample Preparation for Metabolic Profiling using MALDI Mass Spectrometry Imaging

माल्डी मास स्पेक्ट्रोमेट्री इमेजिंग का उपयोग करके मेटाबोलिक प्रोफाइलिंग के लिए नमूना तैयारी

Metabolomics, the study to identify and quantify small molecules and metabolites present in an experimental sample, has emerged as an important tool to ...