Name: detection of infectious virus from field-collected mosquitoes by vero cell culture assay
Uploaded: 2011-06-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay at JoVE.com

אנו בתודה להכיר תרומות חשובות של בני הזוג. ג&#39;ון אנדרסון, אנדרו ראשי ושירלי Tirrell למחקר זה. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי תרומות של המרכז לבקרת מחלות ומניעתן (U50/CCU116806-01-1) לבין משרד החקלאות האמריקני (58-6615-1-218, CONH00768 ו CONH00773).

1. יתוש מיון וזיהוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנהלים הבאים מבוצעים על הספסל מעבדה פתוח ייעודי biosafety רמה-2 מעבדה (BSL-2) על ידי צוות אשר מאומנים לעבוד עם יתושים לחיות. &quot;קר שרשרת&quot; נשמר לאורך כל ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי לחיות יתושי?...

<ol>
	<li>Chosewood, L. C., Wilson, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. , (2007).</li><li>Anderson, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+West+Nile+virus+from+mosquitoes,+crows,+and+a+Cooper's+hawk+in+Connecticut.">Isolation of West Nile virus from mosquitoes, crows, and a Cooper's hawk in Connecticut.</a> Science. 286, 2331-2333 (1999).</li><li>Armstrong, P. M., Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Main, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolations+of+Potosi+virus+from+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+collected+in+Connecticut.">Isolations of Potosi virus from mosquitoes (Diptera: Culicidae) collected in Connecticut.</a> J Med Entomol. 42, 875-881 (2005).</li><li>Armstrong, P. M., Andreadis, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+genetic+variant+of+La+Crosse+virus+(Bunyaviridae)+isolated+from+New+England.">A new genetic variant of La Crosse virus (Bunyaviridae) isolated from New England.</a> Am J Trop Med Hyg. 75, 491-496 (2006).</li><li>Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Vossbrinck, C. R., Main, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+West+Nile+virus+in+Connecticut,+USA:+a+five+year+analysis+of+mosquito+data+1999-2003.">Epidemiology of West Nile virus in Connecticut, USA: a five year analysis of mosquito data 1999-2003.</a> Vector Borne Zoonotic Dis. 4, 360-378 (2004).</li><li>Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Tirrell-Peck, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+isolations+of+eastern+equine+encephalitis+and+highlands+J+viruses+from+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+during+a+1996+epizootic+in+southeastern+Connecticut.">Multiple isolations of eastern equine encephalitis and highlands J viruses from mosquitoes (Diptera: Culicidae) during a 1996 epizootic in southeastern Connecticut.</a> J Med Entomol. 35, 296-302 (1998).</li><li>Armstrong, P. M., Andreadis, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eastern+equine+encephalitis+virus+in+mosquitoes+and+their+role+as+bridge+vectors.">Eastern equine encephalitis virus in mosquitoes and their role as bridge vectors.</a> Emerg Infect Dis. 16, 1869-1874 (2010).</li><li>Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Armstrong, P. M., Main, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolations+of+Jamestown+Canyon+virus+(Bunyaviridae:+Orthobunyavirus)+from+field-collected+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+in+Connecticut,+USA:+a+ten-year+analysis,+1997-2006.">Isolations of Jamestown Canyon virus (Bunyaviridae: Orthobunyavirus) from field-collected mosquitoes (Diptera: Culicidae) in Connecticut, USA: a ten-year analysis, 1997-2006.</a> Vector Borne Zoonotic Dis. 8, 175-188 (2008).</li><li>Beaty, B. J., Calisher, C. H., Shope, R., Lennette, E. H., Lennette, D. A., Lennette, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+11.">Chapter 11.</a> Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial, and Chlamydial Infections. , 189-212 (1995).</li><li>Karabatsos, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> International Catalogue of Arboviruses Including Certain Other Viruses of Vertebrates. , (1985).</li><li>Lanciotti, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+west+nile+virus+from+human+clinical+specimens,+field-collected+mosquitoes,+and+avian+samples+by+a+TaqMan+reverse+transcriptase-PCR+assay.">Rapid detection of west nile virus from human clinical specimens, field-collected mosquitoes, and avian samples by a TaqMan reverse transcriptase-PCR assay.</a> J Clin Microbiol. 38, 4066-4071 (2000).</li><li>Lambert, A. J., Martin, D. A., Lanciotti, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+North+American+eastern+and+western+equine+encephalitis+viruses+by+nucleic+acid+amplification+assays.">Detection of North American eastern and western equine encephalitis viruses by nucleic acid amplification assays.</a> J Clin Microbiol. 41, 379-385 (2003).</li></ol>

תרבות Vero assay תא משמשת שיטה יעילה יתושים מסך השדה שנאספו עבור מגוון של וירוסים. זאת בניגוד לשיטות מולקולריות שמתמקדים אחד או כמה וירוסים של עניין. יתר על כן, מצאנו כי assay Vero תרבות התא הוא שווה אם לא יותר רגישה RT-PCR 7 ומספק לנו מבודד וירוס המאוחסנים באוסף התייחסות שלנ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב / ציוד </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> בסרום שור עוברית </td><td> Gibco - Invitrogen </td><td> 16140 </td></tr><tr><td> Anti-biotic/mycotic </td><td> Gibco - Invitrogen </td><td> 15240 </td></tr><tr><td> סודיום ביקרבונט NaHCO 3, Soln 7.5%. </td><td> Gibco - Invitrogen </td><td> 25080 </td></tr><tr><td> L-גלוטמין 200mm 100x </td><td> Gibco-Invitrogen </td><td> 25030 </td></tr><tr><td> אבקת מדיום חיוני מינימלי (מ) </td><td> Gibco - Invitrogen </td><td> 11700 </td></tr><tr><td> PBS 10X Dulbecco של </td><td> Gibco - Invitrogen </td><td> 14080 </td></tr><tr><td> טריפסין-EDTA </td><td> Gibco - Invitrogen </td><td> 15400 </td></tr><tr><td> הארנב בסרום </td><td> Gibco - Invitrogen </td><td> 16120 </td></tr><tr><td> Vero תאים (Clone E6) </td><td> ATCC </td><td> CRL-1586 </td></tr><tr><td> צלוחיות קטנות בתרבית רקמה, כובעים פרקו, 25 ס&quot;מ 2 </td><td> פלקון - בקטון דיקינסון </td><td> 353112 </td></tr><tr><td> גדול בתרבית רקמה צלוחיות, כובעים פרקו, 175 ס&quot;מ 2 </td><td> פלקון - בקטון דיקינסון </td><td> 353108 </td></tr><tr><td> נחושת מצופה של BB, 4.5 מ&quot;מ </td><td> Crosman </td><td> 0767 </td></tr><tr><td> מיקסר מיל </td><td> Retsch </td><td> MM300 </td></tr><tr><td> Isopack מתלים במקפיא </td><td> Eppendorf </td><td> 022510240 </td></tr></tbody></table>

detection of infectious virus from field-collected mosquitoes by vero cell culture assay

יתושים לשדר מספר וירוסים שונים כולל פתוגנים אנושיים חשובים כמו וירוס הנילוס המערבי, וירוס דנגה, וירוס chickungunya. רבים של וירוסים אלה הגבירו בטווחים אנדמיים שלהם התרחבו השטחים החדשים, דבר המחייב מעקב יעיל תוכניות ובקרת להגיב לאיומים אלה. אסטרטגיה אחת כדי לעקוב אחר פעילות נגיף כרוך באיסוף כמויות גדולות של יתושים מאתרים אנדמיים ובדיקה אותם זיהום ויראלי. במאמר זה, אנו מתארים כיצד לטפל, לעבד למסך שדה שנאספו יתושים עבור וירוס מדבק ידי assay תא Vero תרבות. יתושים ממוינות לפי מיקום מלכודת מינים, מקובצים בריכות המכילות ≤ 50 אנשים. הם אספו דגימות הומוגני ב מלוחים שנאגרו באמצעות מערבל-הטחנה ואת השלב מימית הוא מחוסן ומחוברות על תרביות תאים Vero (Clone E6). בתרביות תאים מנוטרים להשפעת cytopathic מ 3-7 ימים לאחר חיסון וכל וירוסים מגדלים תרבית תאים מזוהים על ידי מבחני אבחון מתאים. על ידי ניצול גישה זו, יש לנו מבודדים 9 וירוסים שונים היתושים שנאספו בקונטיקט, ארה&quot;ב, ובין אלה, 5 ידועים כגורמים למחלות אנושיות. שלושה וירוסים אלה (וירוס הנילוס המערבי, נגיף פוטוסי, ו La Crosse וירוס) מייצגים רשומות חדשות עבור צפון אמריקה או אזור ניו אינגלנד מאז 1999. היכולת לזהות מגוון רחב של וירוסים הוא קריטי ניטור הן הוקמה ווירוסים המתהווה באוכלוסיית היתושים.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay at JoVE.com

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

אנו מתארים שיטה לעבד למסך שדה שנאספו יתושים עבור מגוון של וירוסים על ידי assay תא Vero תרבות. על ידי שימוש בטכניקה זו, יש לנו זוהה 9 וירוסים שונים 4 משפחות טקסונומיות ב היתושים שנאספו בקונטיקט.

איתור של וירוסים זיהומיות מהשטח, שנאספו על ידי יתושים Assay תרבות Vero Cell

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread

הדמיה של תא חי התחבורה אנטרוגרדית וירוס Alphaherpes ומורחים

Advances in live cell fluorescence microscopy  techniques, as well as the construction of recombinant viral strains that  express fluorescent fusion ...

Organoids as Model for Infectious Diseases: Culture of Human and Murine Stomach Organoids and Microinjection of Helicobacter Pylori

Organoids כמודל למחלות זיהומיות: התרבות של האדם וOrganoids הקיבה Murine וMicroinjection של הליקובקטר פילורי

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

מערכת תרבית תאי זיהומיות וירוס זיקה ואת<em&gt; במבחנה</em&gt; אפקט מניעתי של אינטרפרונים

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...

Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

הצלה אפיון של וירוס רקומביננטי מעולם חדש Zika וירוס זיהום מזוהם

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

חילוץ מהיר, בטוח, ופשוט ידנית המיטה חומצת גרעין איתור וירוס בדגימות דם מלא

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

מודל תרבות Bursal-תא ראשי לשעבר Vivo עוף ללמוד פתוגנזה וירוס מחלה זיהומית Bursal

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Identification of Mouse and Human Antibody Repertoires by Next-Generation Sequencing

זיהוי של נוגדנים אנושיים Repertoires על ידי הדור הבא רצפי של עכבר

The immense adaptability of antigen recognition by antibodies is the basis of the acquired immune system. Despite our understanding of the molecular ...

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

זיהוי נוגדן Anti-aquaporin-4 G בנסיוב אדם על ידי Assay מבוססת-תא

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus

טיהור של תשואה גבוהה לחילוץ ההכנות הרחק וירוס

One of the major hurdles in the field of extracellular vesicle (EV) research today is the ability to achieve purified EV preparations in a viral infection ...

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

וקטור יכולת ניתוחים על יתושים Aedes aegypti באמצעות וירוס זיקה

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine ...