Name: detection of infectious virus from field-collected mosquitoes by vero cell culture assay
Uploaded: 2011-06-09T13:00:00
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我々は感謝して博士の重要な貢献を認識する。ジョンアンダーソン、アンドリューメインと本研究へのシャーリーティレル。この作業は、疾病管理予防（U50/CCU116806-01-1）と米国農務省（58-6615-1-218、CONH00768、およびCONH00773）センターからの補助金によって部分的にサポートされていました。

1。蚊のソートと同定<ol><li>次の手順は、ライブ蚊で動作するように訓練されているスタッフが、専用のバイオセーフティレベル2（BSL - 2）実験室でのオープンラボのベンチ上で実行されます。 &quot;コールドチェーン&quot;は、プロシージャ全体で維持されます。 </li><li> 5分間-20℃の冷凍庫で蚊コレクションのバッグを置くことで成虫に住んで麻酔。ドライアイスを含む断熱容器に回収袋を転?...

<ol>
	<li>Chosewood, L. C., Wilson, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. , (2007).</li><li>Anderson, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+West+Nile+virus+from+mosquitoes,+crows,+and+a+Cooper's+hawk+in+Connecticut.">Isolation of West Nile virus from mosquitoes, crows, and a Cooper's hawk in Connecticut.</a> Science. 286, 2331-2333 (1999).</li><li>Armstrong, P. M., Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Main, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolations+of+Potosi+virus+from+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+collected+in+Connecticut.">Isolations of Potosi virus from mosquitoes (Diptera: Culicidae) collected in Connecticut.</a> J Med Entomol. 42, 875-881 (2005).</li><li>Armstrong, P. M., Andreadis, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+genetic+variant+of+La+Crosse+virus+(Bunyaviridae)+isolated+from+New+England.">A new genetic variant of La Crosse virus (Bunyaviridae) isolated from New England.</a> Am J Trop Med Hyg. 75, 491-496 (2006).</li><li>Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Vossbrinck, C. R., Main, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+West+Nile+virus+in+Connecticut,+USA:+a+five+year+analysis+of+mosquito+data+1999-2003.">Epidemiology of West Nile virus in Connecticut, USA: a five year analysis of mosquito data 1999-2003.</a> Vector Borne Zoonotic Dis. 4, 360-378 (2004).</li><li>Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Tirrell-Peck, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+isolations+of+eastern+equine+encephalitis+and+highlands+J+viruses+from+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+during+a+1996+epizootic+in+southeastern+Connecticut.">Multiple isolations of eastern equine encephalitis and highlands J viruses from mosquitoes (Diptera: Culicidae) during a 1996 epizootic in southeastern Connecticut.</a> J Med Entomol. 35, 296-302 (1998).</li><li>Armstrong, P. M., Andreadis, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eastern+equine+encephalitis+virus+in+mosquitoes+and+their+role+as+bridge+vectors.">Eastern equine encephalitis virus in mosquitoes and their role as bridge vectors.</a> Emerg Infect Dis. 16, 1869-1874 (2010).</li><li>Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Armstrong, P. M., Main, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolations+of+Jamestown+Canyon+virus+(Bunyaviridae:+Orthobunyavirus)+from+field-collected+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+in+Connecticut,+USA:+a+ten-year+analysis,+1997-2006.">Isolations of Jamestown Canyon virus (Bunyaviridae: Orthobunyavirus) from field-collected mosquitoes (Diptera: Culicidae) in Connecticut, USA: a ten-year analysis, 1997-2006.</a> Vector Borne Zoonotic Dis. 8, 175-188 (2008).</li><li>Beaty, B. J., Calisher, C. H., Shope, R., Lennette, E. H., Lennette, D. A., Lennette, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+11.">Chapter 11.</a> Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial, and Chlamydial Infections. , 189-212 (1995).</li><li>Karabatsos, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> International Catalogue of Arboviruses Including Certain Other Viruses of Vertebrates. , (1985).</li><li>Lanciotti, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+west+nile+virus+from+human+clinical+specimens,+field-collected+mosquitoes,+and+avian+samples+by+a+TaqMan+reverse+transcriptase-PCR+assay.">Rapid detection of west nile virus from human clinical specimens, field-collected mosquitoes, and avian samples by a TaqMan reverse transcriptase-PCR assay.</a> J Clin Microbiol. 38, 4066-4071 (2000).</li><li>Lambert, A. J., Martin, D. A., Lanciotti, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+North+American+eastern+and+western+equine+encephalitis+viruses+by+nucleic+acid+amplification+assays.">Detection of North American eastern and western equine encephalitis viruses by nucleic acid amplification assays.</a> J Clin Microbiol. 41, 379-385 (2003).</li></ol>

ベロ細胞培養アッセイは、ウイルスの多様性のためのスクリーンのフィールドに収集蚊に効果的な方法として機能します。これは、特にいずれか興味のあるいくつかのウイルスを標的分子の方法とは対照的です。また、我々は、ヴェロ細胞培養アッセイが均等にRT - PCR 7より多くの敏感な場合ではないと今後の研究のために私達の参照のコレクションに格納されているウイルス分離株?...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬/装置の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td> GIBCO - インビトロジェン</td><td> 16140 </td></tr><tr><td> Anti-biotic/mycotic </td><td> GIBCO - インビトロジェン</td><td> 15240 </td></tr><tr><td>炭酸水素ナトリウムNaHCO 3を 、7.5％のSoln。 </td><td> GIBCO - インビトロジェン</td><td> 25080 </td></tr><tr><td> L -グルタミン200mmの100倍</td><td> GIBCO -インビトロジェン</td><td> 25030 </td></tr><tr><td>粉末状の最小必須培地（MEM） </td><td> GIBCO - インビトロジェン</td><td> 11700 </td></tr><tr><td> 10XダルベッコPBS </td><td> GIBCO - インビトロジェン</td><td> 14080 </td></tr><tr><td>トリプシン- EDTA </td><td> GIBCO - インビトロジェン</td><td> 15400 </td></tr><tr><td>ウサギ血清</td><td> GIBCO - インビトロジェン</td><td> 16120 </td></tr><tr><td> Vero細胞（クローンE6） </td><td> ATCC </td><td> CRL - 1586 </td></tr><tr><td>小さ ​​な組織培養フラスコ、ベントキャップ、25cm 2の </td><td>ファルコン - ベクトンディッキンソン</td><td> 353112 </td></tr><tr><td>大規模な組織培養フラスコ、ベントキャップ、175cm 2の </td><td>ファルコン - ベクトンディッキンソン</td><td> 353108 </td></tr><tr><td>銅でコーティングされたBBの、4.5ミリメートル</td><td> Crosman </td><td> 0767 </td></tr><tr><td>ミキサーミル</td><td>レッチェ</td><td> MM300 </td></tr><tr><td> Isopackのフリーザーラック</td><td>エッペンドルフ</td><td> 022510240 </td></tr></tbody></table>

detection of infectious virus from field-collected mosquitoes by vero cell culture assay

蚊は、西ナイルウイルス、デング熱ウイルス、およびchickungunyaウイルスとして重要なヒト病原体などの異なるウイルスの数を送信する。これらのウイルスの多くは彼らの流行の範囲で激化し、新しい地域に拡大し、これらの脅威に対応するための効果的な監視と制御プログラムを必要としている。ウイルスの活動を監視する一つの戦略は、流行のサイトから蚊が大量に収集し、ウイルス感染のためにそれらをテストして。この記事では、我々は、プロセスを処理する方法について説明し、画面のヴェロ細胞培養アッセイにより感染性ウイルスのための蚊をフィールド集めた。蚊は、トラップの位置や種によって並べ替え、および≤50人を含むプールにグループ化されます。プールされた標本は、ミキサー、ミルと水相がコンフルエントVero細胞培養（クローンE6）に接種している使用して緩衝生理食塩水でホモジナイズされています。細胞培養は、日3月7日、接種後から細胞変性効果のために監視され、細胞培養で増殖したウイルスは、適切な診断アッセイによって識別されます。このアプローチを利用することにより、我々はコネチカット、米国で収集された蚊から9種類のウイルスを分離しており、これらのうち、5はヒトの疾患を引き起こすことが知られている。これらのウイルスのうち3つは（ウエストナイルウイルス、ポトシウイルス、そしてラクロスウイルス）北米または1999年以来、ニューイングランド地方のための新しいレコードを表します。ウイルスの広い多様性を検出する能力は、蚊の人口に設立され、新たに出現したウイルスの両方を監視することが重要です。

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Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

我々はプロセスに方法を記述し、画面のヴェロ細胞培養アッセイによりウイルスの多様性のための蚊をフィールド集めた。この手法を採用することにより、我々はコネチカットで収集された蚊の4分類の家族から9種類のウイルスを検出した。

Vero細胞培養アッセイによるフィールドコレクト蚊から感染性ウイルスの検出

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread

Alphaherpesウイルス順行性輸送とスプレッドの生細胞イメージング

Advances in live cell fluorescence microscopy  techniques, as well as the construction of recombinant viral strains that  express fluorescent fusion ...

Organoids as Model for Infectious Diseases: Culture of Human and Murine Stomach Organoids and Microinjection of Helicobacter Pylori

感染症のためのモデルとしてのオルガノイド：人間の文化とマウス胃オルガノイドとピロリ菌のマイクロインジェクション

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

ジカウイルス感染細胞培養系と<em&gt;インビトロ</emインターフェロンの&gt;予防効果

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Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

新世界Zikaウイルス感染クローンからの組換えウイルスの救出とキャラクタリゼーション

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

迅速・安全・簡易マニュアル ベッドサイド核酸抽出の全血試料中のウイルス検出

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスの病原性を研究するためのEx Vivo鶏ファブリキウス嚢細胞培養モデル

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Identification of Mouse and Human Antibody Repertoires by Next-Generation Sequencing

マウスと次世代シーケンサーによるひと抗体のレパートリーの同定

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Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

細胞ベースのアッセイによるひと血清抗アクアポリン 4 免疫グロブリン G の検出

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus

ウイルスから離れた高収率細胞外小胞製剤の精製

One of the major hurdles in the field of extracellular vesicle (EV) research today is the ability to achieve purified EV preparations in a viral infection ...

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

ジカウイルスを用いた Aedes aegypti蚊の ベクターコンピテンス分析

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