Name: measuring the kinetics of mrna transcription in single living cells
Uploaded: 2011-08-25T13:00:00
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वाईएस टी यूरोपीय अनुसंधान परिषद (ईआरसी), इसराइल विज्ञान फाउंडेशन (ISF) (250/06), ISF-Bikura, इसराइल कैंसर रिसर्च फंड (ICRF), वैज्ञानिक अनुसंधान और विकास के लिए जर्मन - इजरायल फाउंडेशन (GIF द्वारा समर्थित है ), संयुक्त राज्य अमेरिका इसराइल Binational विज्ञान फाउंडेशन (बीएसएफ), जर्मन इजरायल परियोजना (डुबकी), सहयोग, और विज्ञान और स्वास्थ्य के इजरायल के मंत्रालयों, और जेन बार इलान विश्वविद्यालय में स्टर्न Lebell लाइफ साइंसेज में परिवार फैलो है. YB Azrieli फाउंडेशन के लिए एक Azrieli फैलोशिप के पुरस्कार के लिए आभारी है.

सेल प्रणाली का इस्तेमाल किया कि MS2 mRNA टैगिंग के लिए जीवित कोशिकाओं में दोहराने दृश्यों शामिल एक एकीकृत जीन का निर्माण होना चाहिए. इस प्रोटोकॉल में हम एक stably एकीकृत जीन β-actin के fluorescently डीएनए, आरएनए और प्रोट?...

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	<li>Wada, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+wave+of+nascent+transcription+on+activated+human+genes.">A wave of nascent transcription on activated human genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 18357-18361 (2009).</li><li>Singh, J., Padgett, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rates+of+in+situ+transcription+and+splicing+in+large+human+genes.">Rates of in situ transcription and splicing in large human genes.</a> Nat Struct Mol Biol. 16, 1128-1133 (2009).</li><li>Brody, Y., Shav-Tal, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+transcription+in+real-time.">Visualizing transcription in real-time.</a> Cent Eur J Biol. 3, 11-18 (2008).</li><li>Lamond, A. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage+regulates+alternative+splicing+through+inhibition+of+RNA+polymerase+II+elongation.">DNA damage regulates alternative splicing through inhibition of RNA polymerase II elongation.</a> Cell. 137, 708-720 (2009).</li><li>Hieda, M., Winstanley, H., Maini, P., Iborra, F. J., Cook, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+populations+of+RNA+polymerase+II+in+living+mammalian+cells.">Different populations of RNA polymerase II in living mammalian cells.</a> Chromosome Res. 13, 135-144 (2005).</li><li>Kimura, H., Sugaya, K., Cook, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+cycle+of+RNA+polymerase+II+in+living+cells.">The transcription cycle of RNA polymerase II in living cells.</a> J Cell Biol. 159, 777-782 (2002).</li></ol>

जीवित कोशिकाओं में पोलीमर्स गतिज गतिविधि को मापने के लिए विधि को दो भागों में विभाजित किया जा सकता है. पहला भाग &#39;गीले&#39; प्रक्रिया है जो मापने और mRNA प्रतिलेखन की गतिज डेटा पुन: प्राप्त करने में सक्षम बना...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th></tr><tr><td> डॉक्सीसाइक्लिन </td><td> सिग्मा </td></tr><tr><td> FuGENE 6 अभिकर्मक अभिकर्मक </td><td> रॉश </td></tr></tbody></table>

measuring the kinetics of mrna transcription in single living cells

शाही सेना पोलीमरेज़ द्वितीय (पोल द्वितीय) के transcriptional गतिविधि एक गतिशील प्रक्रिया है और इसलिए vivo में transcriptional प्रक्रिया के कैनेटीक्स को मापने के महत्व का है. पोल द्वितीय कैनेटीक्स जैव रासायनिक या आणविक विधियों का उपयोग कर मापा गया है हाल के वर्षों में. 1-3 नए दृश्य तरीकों के विकास के साथ, यह संभव बन गया है प्रतिलेखन पालन के रूप में यह एक जीवित कोशिकाओं में वास्तविक समय में होता है इस के साथ साथ 4. हम कैसे वर्णन 5 जीवित कोशिकाओं में एक विशेष जीन पर पोल द्वितीय बढ़ाव कैनेटीक्स का विश्लेषण प्रदर्शन करने के लिए, एक सेल लाइन में एक विशेष जीन (डीएनए) बिन्दुपथ, इसके mRNA उत्पाद, और अंतिम प्रोटीन उत्पाद fluorescently हो और लेबल कर सकते हैं, vivo में कल्पना का प्रयोग 6 , यह संभव है ब्याज की जीन पर mRNAs का वास्तविक प्रतिलेखन का पता लगाने के 7, 8 mRNA fluorescently vivo में, जहां mRNA टेप की 3&#39;UTR 24 MS2 स्टेम पाश होते टैगिंग mRNAs लिए MS2 प्रणाली का उपयोग में है टैग. दोहराता है, जो YFP-MS2 कोट प्रोटीन है कि mRNA लेबल के रूप में यह लिखित है के लिए अत्यधिक विशिष्ट बाध्यकारी साइटों प्रदान करते हैं. 9 प्रतिलेखन के कैनेटीक्स हम विधि (FRAP) photobleaching के बाद प्रतिदीप्ति वसूली का उपयोग की निगरानी करने के लिए. प्रतिलेखन की साइट पर टैग YFP-MS2-नवजात टेप photobleaching और फिर समय पर इस संकेत की वसूली के बाद से, हम दूसरे शब्दों में नव बनाया mRNAs का संश्लेषण की दर प्राप्त करने के 5, YFP MS2 प्रतिदीप्ति वसूली पीढ़ी को दर्शाता है नई MS2 फ्लोरोसेंट मुक्त YFP MS2 अणुओं आसपास के nucleoplasm से प्रवेश करने से नवजात और उनके बंधन टेप में स्टेम छोरों. FRAP वसूली घटता है तो गणितीय यंत्रवत अंतर समीकरणों की एक श्रृंखला के द्वारा औपचारिक रूप मॉडल का उपयोग करते हुए, क्रम में करने के लिए प्रतिलेखन की गतिज समय पैरामीटर प्राप्त करने के लिए विश्लेषण कर रहे हैं.

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Measuring the Kinetics of mRNA Transcription in Single Living Cells

शाही सेना पोलीमरेज़ द्वितीय transcriptional कैनेटीक्स जीवित कोशिकाओं में विशेष जीन पर मापा जाता है. ब्याज की जीन से लिखित mRNAs fluorescently टैग और प्रतिदीप्ति वसूली के बाद photobleaching (FRAP) transcriptional बढ़ाव के vivo कैनेटीक्स में प्राप्त कर रहे हैं का उपयोग कर रहे हैं.

एकल जीवित कोशिकाओं में mRNA ट्रांसक्रिप्शन के कैनेटीक्स माप

The transcriptional activity of RNA polymerase II (Pol II) is a dynamic process and therefore measuring the kinetics of the transcriptional process in ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Measurement of Viral Fusion Kinetics at the Single Particle Level

वायरल फ्यूजन कैनेटीक्स के मापन के लिए एकल कण स्तर पर विधि

Membrane fusion is an essential step during entry of enveloped viruses into cells. Conventional fusion assays typically report on a large number of fusion ...

Analysis of mRNA Nuclear Export Kinetics in Mammalian Cells by Microinjection

MRNA परमाणु निर्यात कैनेटीक्स के Microinjection द्वारा स्तनधारी कोशिकाओं में विश्लेषण

In eukaryotes, messenger RNA (mRNA) is transcribed in the nucleus and must be exported into the cytoplasm to access the translation machinery. Although ...

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

जहाँ रहते इमेजिंग सेल आकार बदलें ड्रोसोफिला भ्रूण

The developing Drosophila melanogaster embryo undergoes a number of cell shape changes that are highly amenable to live confocal imaging.  Cell shape ...

Photobleaching Assays (FRAP &amp; FLIP) to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

Photobleaching Assays FRAP & FLIP to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

Assays (FRAP और फ्लिप) photobleaching भ्रूण स्टेम कोशिकाओं में रहते हैं chromatin प्रोटीन गतिशीलता उपाय

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) and Fluorescence Loss In Photobleaching (FLIP) enable the study of protein dynamics in living cells with ...

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

इन विट्रो प्रतिलेखन और Gaussia luciferase mRNA की कैपिंग HeLa सेल प्रोटोकॉल के द्वारा पीछा किया

In vitro transcription is the synthesis of RNA transcripts by RNA polymerase from a linear DNA template containing the corresponding promoter sequence ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

मेटाबोलिक लेबल और फ्लो के साथ कोशिका चक्र प्रगति कैनेटीक्स मापने

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

Ratiometric bimolecular संकेतकों का उपयोग जीवित कोशिकाओं में एकल इंजीनियर शाही सेना टेप के वास्तविक समय इमेजिंग

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient (Pf) of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient Pf of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

Osmotic पानी पारगम्यता गुणांक (पी मापने<sub&gt; च</sub&gt;) गोलाकार कोशिकाओं का एक उदाहरण के रूप में अलग संयंत्र protoplasts

Studying AQP regulation mechanisms is crucial for the understanding of water relations at both the cellular and the whole plant levels. Presented here is ...

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy (FIONA)

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy FIONA

एक नैनोमीटर सटीकता के साथ प्रतिदीप्ति इमेजिंग (फियोना)

Fluorescence imaging with one-nanometer accuracy (FIONA) is a simple but useful technique for localizing single fluorophores with nanometer precision in ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

उच्च संकल्प समय चूक इमेजिंग और जीवित मानव नाल की शिरा endothelial कोशिकाओं में microtubule गतिशीलता की स्वचालित विश्लेषण

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...